一种抗炎化合物DalditoneA及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种具有较好抗炎活性化合物Dalditone A，其结构式为：。该化合物从光炭轮菌属真菌中提取获得，包括真菌培养、粗浸膏的制备、乙酸乙酯部位浸膏的制备、硅胶柱层析，分离纯化等，经核磁检测并解析得到该化合物的结构，并对该化合物进行抗炎活性测试和机制验证等。结果表明：该化合物具有较好的抗炎活性，有潜在的抗炎药物开发利用价值。潜在的抗炎药物开发利用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种抗炎化合物Dalditone A及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及一种抗炎活性化合物Dalditone A，及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]光炭轮菌（Daldinia eschscholtzii）属于子囊菌门真菌。该真菌可产生多种类型的化合物如萘酚类、色酮类、生物碱类、黄酮类、萜类等化合物，具有抗肿瘤，抗炎抑菌，降糖，抗HPV病毒等药理活性。
[0003]本专利技术所涉及的Dalditone A是大环醚类化合物，具有优异的抗炎活性，属于光炭轮菌代谢产物少有的一类。以往的研究发现：少数的微生物能够产生此类化合物。据文献报道，大环醚类化合物具有抗细胞毒、抗肿瘤以及抗菌等多种生物活性。
[0004]从植物来源获得该类化合物的成本高，周期长，使得大环醚类化合物的抗炎活性难以被充分利用，为了进一步推广应用大环醚类化合物，提供一种新的抗炎策略，对潜在抗炎药物的发现具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于克服现有技术缺陷，提供一种可以通过微生物发酵得到的、新的大环醚类化合物Dalditone A。
[0006]本专利技术还提供了上述抗炎活性化合物Dalditone A的制备方法和在制备抗炎药物的应用。
[0007]一种抗炎化合物Dalditone A，分子式为C
17
H
32
O2，其结构式如下所示： 式1。
[0008]上述抗炎化合物Dalditone A的制备方法，其包括以下步骤：1）真菌培养：将真菌接种在大米培养基上，于室温培养30
±
2天；所述大米培养基由80g大米与50
‑
80ml质量浓度0.3%的盐水混合组成；2）粗浸膏的制备：将步骤1）所得产物置于甲醇中室温浸泡提取，减压浓缩，获得粗浸膏；3）乙酸乙酯部位浸膏的制备：粗浸膏水溶后，用乙酸乙酯萃取，减压浓缩，获得乙酸乙酯部位浸膏；4）硅胶柱层析：乙酸乙酯部位浸膏用硅胶柱拌样，依次用体积浓度为0%，10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%的石油醚
‑
乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集30%石油醚
‑
乙酸乙酯洗脱部分；
5）分离纯化：30%石油醚
‑
乙酸乙酯洗脱部分减压浓缩后，用二氯甲烷溶解经Sephadex LH
‑
20凝胶色谱柱分离，洗脱剂为体积比1：1的二氯甲烷
‑
甲醇，所得组分按分子量由大到小依次标记为组分1和2；组分2经溶解用硅胶拌样后装柱，二氯甲烷洗脱，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分Fr.2.1至Fr2.6，组分Fr.2.6即为Dalditone A粗品。
[0009]进一步的，为提高纯度，将Dalditone A粗品用二氯甲烷溶解后经Sephadex LH
‑
20凝胶色谱柱纯化，获得Dalditone A纯品。Sephadex LH
‑
20凝胶色谱柱纯化所用洗脱剂为体积比1：1的二氯甲烷
‑
甲醇。所述洗脱剂流速为0.4～0.6mL/min，更优选为0.5mL/min。
[0010]如附图1所示的抗炎活性化合物Dalditone A的HR
‑
ESI
‑
MS(高分辨电喷雾电离质谱)谱图，m/z 268.2470[M+H]+
。本专利技术通过1D/2D NMR(一维核磁共振波谱和二维核磁共振波谱)以及HR
‑
ESI
‑
MS对抗炎活性化合物Dalditone A结构进行鉴定，1H、
13
C、1H
‑1H COSY、HSQC、HMBC和NOESY核磁数据见附图2～7，可以确定其结构如式1所示，其化学名称为：(13S,14R)
‑
3,3,13,14
‑
tetramethyloxacyclotetradecan
‑4‑
one，即(13S,14R)
‑
3,3,13,14
‑
四甲基氧杂环十四烷
‑4‑
酮。
[0011]进一步的，步骤1）中，真菌预先经过活化和初级培养；所述活化具体为：将光炭轮菌（Daldinia eschscholtzii）接种到PDA培养基上，室温条件培育3
‑
5天，即得到活化后的菌种；所用PDA培养基组成为：马铃薯浸粉3.0g/L，葡萄糖20.0g/L，琼脂14.0g/L，pH值5.6
±
0.2；所述初级培养具体为：将活化后的菌种接种到PDB培养基上，在25~30℃条件下摇床培养4
‑
6天，得到种子液；所用PDB培养基组成为：马铃薯浸粉5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖15g/L，氯化钠5g/L，pH值5.6
±
0.2。步骤2）中，步骤1）所得产物置于甲醇中室温浸泡提取2
‑
4次，每次2
‑
4天；优选浸泡提取3次，每次3天。所用甲醇的体积浓度为95
‑
98%。
[0012]本专利技术提供的抗炎化合物Dalditone A具有显著的抗炎活性，能够应用于制备抗炎药物。本专利技术提供了上述抗炎化合物Dalditone A在制备抗炎药物中的应用。
[0013]本专利技术还提供了一种抗炎组合物，其包含上述的抗炎化合物Dalditone A。所述的抗炎组合物，还可以包括药用辅料，选择本领域常规药用辅料采用本领域熟知的制备方法制成片剂、颗粒剂、注射剂等剂型。所述的抗炎组合物，优选的包括质量百分数1～99％的抗炎化合物Dalditone A，更优选抗炎化合物Dalditone A的质量百分数为60～90％。
[0014]和现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：1）本专利技术提供的抗炎活性化合物Dalditone A，其结构如式1所示。抗炎活性表明：Dalditone A具有显著的抗炎活性，抗炎活性化合物Dalditone A的NO(一氧化氮)抑制活性筛选试验表明，抗炎活性化合物Dalditone A对NO的生成表现出了明显的抑制活性，其半数抑制浓度(IC
50
值)为19.25μM，而阳性对照L
‑
NMMA(总NOS抑制剂)的半数抑制浓度(IC
50
值)为32.88μM。同时通过WESTRN BLOT（免疫印记）实验，发现Dalditone A能抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞引起的NO过量生成及iNOS和COX
‑
2 蛋白水平的过度表达、下调LPS刺激的RAW264.7细胞中NF
‑
κB通路中p
‑
IκBα及p
‑ꢀ
p65蛋白的过度表达，同时下调MAPK通路中p
‑
JNK, p
‑
EPK和p
‑
p38蛋白的过度表达本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗炎化合物Dalditone A，其特征在于，结构式如下所示：。2.权利要求1所述抗炎化合物Dalditone A的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）真菌培养：将真菌接种在大米培养基上，于室温培养30
±
2天；所述大米培养基由80g大米与50
‑
80ml质量浓度0.3%的盐水混合组成；2）粗浸膏的制备：将步骤1）所得产物置于甲醇中室温浸泡提取，减压浓缩，获得粗浸膏；3）乙酸乙酯部位浸膏的制备：粗浸膏水溶后，用乙酸乙酯萃取，减压浓缩，获得乙酸乙酯部位浸膏；4）硅胶柱层析：乙酸乙酯部位浸膏用硅胶柱拌样，依次用体积浓度为0%，10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%的石油醚
‑
乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集30%石油醚
‑
乙酸乙酯洗脱部分；5）分离纯化：30%石油醚
‑
乙酸乙酯洗脱部分减压浓缩后，用二氯甲烷溶解经Sephadex LH
‑
20凝胶色谱柱分离，洗脱剂为体积比1：1的二氯甲烷
‑
甲醇，所得组...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏金凤，陈岩，康文艺，王贵声，尹震花，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：