本发明专利技术公开了一种具有免疫调节活性的鳕鱼肽及其应用，属于生物医药领域。本发明专利技术以鳕鱼为原料，通过以下步骤：鳕鱼磨碎、酶解、喷雾干燥、分离制备、脱醇、脱盐、冷冻干燥，开发了一种醇溶性鳕鱼肽。本发明专利技术通过实验发现醇溶性鳕鱼肽在一定剂量下显示出促进RAW264.7细胞释放NO的能力；500μg/mL醇溶性鳕鱼肽处理细胞释放NO的量比空白组高出31.41％；且本发明专利技术以鳕鱼为原材料，安全性高。本发明专利技术采用鳕鱼为原料开发以生物活性肽为主的酶解物，原料丰富，来源广泛，制备工艺流程简便，可满足大规模工业化生产；其对于鳕鱼生物活性肽在功能性食品、保健食品或者药品中的开发利用具有重要的意义。意义。意义。
【技术实现步骤摘要】
一种具有免疫调节活性的鳕鱼肽及其应用
[0001]本专利技术涉及一种具有免疫调节活性的鳕鱼肽及其应用，属于生物医药领域。
技术介绍
[0002]免疫力与机体健康息息相关，免疫稳态对人类健康非常重要。在正常生理条件下，免疫系统负责维持免疫稳态平衡。免疫系统失衡可导致免疫缺陷疾病、感染性疾病、超敏性疾病、自身免疫性疾病和恶性肿瘤。适应性免疫对潜在危险的外来抗原具有高度特异性，分为细胞介导免疫和抗体介导免疫两种类型。目前，用于治疗免疫缺陷疾病的药物，如左旋咪唑，有很多副作用，因此寻找一种无副作用的增强免疫力的产品非常重要。RAW264.7细胞是构成机体免疫系统中免疫细胞的重要成员之一，它在免疫防卫、免疫维稳和免疫监察中都有不可忽视的作用，是最先做出免疫应答的细胞种类之一。被激活的巨噬细胞具有吞噬能力，并通过分泌具有各种功能的免疫活性物质，在免疫应答中占据不可忽视的地位。小鼠脾淋巴细胞分离自脾脏组织；脾脏是机体最大的免疫器官，占全身淋巴组织总量的25％，含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，是机体细胞免疫和体液免疫的中心。成熟淋巴细胞需依赖抗原刺激而分化增殖，继而发挥其免疫功能。
[0003]鳕鱼是当今世界产量最高的鱼种之一，主要生产于加拿大、冰岛、挪威、俄罗斯、日本、朝鲜等国。而在我国，鳕鱼的主要产地则分布于黄海北部、山东东南部以及东南沿海的相关地带。鳕鱼是一种深海鱼。其高蛋白、低脂肪的营养价值，在看重饮食质量的西方人眼中，被誉为“餐桌上的营养师”、“液体黄金”，是比黄金珍贵的宝藏。研究表明，鱼蛋白水解物具有多种生物活性，如抗氧化活性、抗高血压、抗糖尿病和抗菌活性。活性肽可通过酶解工艺从蛋白质序列中释放出来，发挥多种生物功能或生理效应。近年来，研究者从太子参蛋白、玉米醇溶蛋白、牛初乳乳清蛋白、厚壳贻贝蛋白等的水解物中发现了具有免疫调节活性的肽，但由于技术的限制以及工艺成本高等因素，限制了其进行工业化生产和利用。
[0004]因此，开发一种提取工艺简便，且具有潜在免疫调节活性的多肽对于增强免疫的保健食品和药品的开发具有重要意义。
技术实现思路
[0005]本专利技术目的在于克服现有技术的缺点，提供一种具有免疫调节活性的醇溶性鳕鱼肽的制备方法，以促进RAW264.7细胞释放NO含量、促进小鼠脾细胞增殖，增强免疫调节功能。
[0006]本专利技术提供了一种鳕鱼肽粉，所述鳕鱼肽粉是按照下述方法制备得到的：
[0007]S1、鳕鱼磨碎：将鳕鱼加水磨碎，得到鳕鱼混合液；
[0008]S2、酶解：将步骤S1得到的鳕鱼混合液加碱后调pH值至8.0～8.5，升温使温度达到55～58℃，按照0.19～0.21％比例加入碱性蛋白酶，搅拌均匀，酶解1.8～2.2h，再升温灭酶10～15min，冷却至65℃以下后，首先进行压滤，然后通过振动筛网离心、膜过滤分离，最后浓缩得到鳕鱼酶解液；
[0009]S3、喷雾干燥：将步骤S2得到的鳕鱼酶解液进行喷雾干燥，得到鳕鱼肽粉；
[0010]S4、分离制备：将步骤S3得到的鳕鱼肽粉按照质量比为(1：18)～(1：22)的比例加到质量分数为75～85％的乙醇中，20～30℃搅拌1～2h，在7500～8500g转速下离心20～30min，取上清液，得到醇溶性鳕鱼肽；
[0011]S5、脱醇：将步骤S4中所述的醇溶性鳕鱼肽用旋转蒸发仪除去乙醇至原体积的3～5％，得脱醇的醇溶性鳕鱼肽；
[0012]S6、脱盐：将步骤S5中所述的脱醇的醇溶性鳕鱼肽按照体积比为1:(5～7)的比例加去离子水，分别进行渗透脱盐处理，待盐分除去后，即得到鳕鱼肽，将其冷冻干燥后保存。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，步骤S1为：将鳕鱼按照质量比为1:(1.5～2.0)的比例加水磨碎，得到鳕鱼混合液；
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，步骤S2中，灭酶温度为85℃以上。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，步骤S2中，振动筛网的规格为120目。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，所述醇溶性鳕鱼肽分子量分布于200～3000Da之间，含氮量为80～90％。
[0017]在本专利技术的一种实施方式中，步骤S5中所述旋转蒸发的温度设定为50～60℃，转速设定为60～80rpm。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，步骤S6中所述渗透脱盐方法包括脱醇的醇溶性鳕鱼肽倒入100～200Da透析袋中，于2～8℃下，透析24～48h。
[0019]本专利技术提供了一种产品，所述产品中含有上述鳕鱼肽。
[0020]在本专利技术的一种实施方式中，所述产品为食品、药品或保健品。
[0021]在本专利技术的一种实施方式中，所述食品为含有上述鳕鱼肽的蛋白粉、糖果、饮料。
[0022]在本专利技术的一种实施方式中，所述药品含有上述鳕鱼肽、药物载体和/或药用辅料。
[0023]本专利技术提供了一种上述鳕鱼肽在制备具有免疫调节活性的产品中的应用。
[0024]在本专利技术的一种实施方式中，所述产品为药品或保健品。
[0025]在本专利技术的一种实施方式中，所述药品含有上述鳕鱼肽、药物载体和/或药用辅料。
[0026]本专利技术提供了一种上述鳕鱼肽在制备促进RAW264.7细胞释放NO的产品中的应用。
[0027]在本专利技术的一种实施方式中，所述产品为药品或保健品。
[0028]在本专利技术的一种实施方式中，所述药品含有上述鳕鱼肽、药物载体和/或药用辅料。
[0029]本专利技术提供了一种上述鳕鱼肽在制备促进小鼠脾淋巴细胞增殖的产品中的应用。
[0030]在本专利技术的一种实施方式中，所述产品为药品或保健品。
[0031]在本专利技术的一种实施方式中，所述药品含有上述鳕鱼肽、药物载体和/或药用辅料。
[0032]有益效果
[0033]1、本专利技术以鳕鱼为原料开发了一种具有促进RAW264.7细胞释放NO、促进小鼠脾淋巴细胞增殖的醇溶性鳕鱼肽，本专利技术拓展了海洋生物在开发增强免疫力的保健品和药品的开发中的用途。
[0034]2、本专利技术与现有技术相比，本专利技术获得鳕鱼肽的方法更为简单，且获得的鳕鱼肽拥有较强的免疫调节活性。
[0035]3、本专利技术通过实验发现醇溶性鳕鱼肽在一定剂量下显示出促进RAW264.7细胞释放NO的能力；500μg/mL醇溶性鳕鱼肽处理细胞释放NO的量比空白组高出31.41％，与空白组相比有显著性差异(p<0.05)，且本专利技术以鳕鱼为原材料，安全性高。
[0036]4、本专利技术首次采用醇溶提取的方法开发了一种鳕鱼免疫调节活性肽的提取工艺，且免疫调节活性效果相当，具有方法可选择性。
[0037]5、本专利技术采用鳕鱼为原料开发以生物活性肽为主的酶解物，原料丰富，来源广泛，制备工艺流程简便，可满足大规模工业化生产；其对于鳕鱼生物活性肽在功能性食品、保健食品或者药品中的开发利用具有重要的意义。
附图说明
[0038]图1：普通鳕鱼肽、醇溶性鳕鱼肽、醇不本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种鳕鱼肽粉，其特征在于，所述鳕鱼肽粉是按照下述方法制备得到的：S1、鳕鱼磨碎：将鳕鱼加水磨碎，得到鳕鱼混合液；S2、酶解：将步骤S1得到的鳕鱼混合液加碱后调pH值至8.0～8.5，升温使温度达到55～58℃，按照0.19～0.21％比例加入碱性蛋白酶，搅拌均匀，酶解1.8～2.2h，再升温灭酶10～15min，得到鳕鱼酶解液；S3、喷雾干燥：将步骤S2得到的鳕鱼酶解液进行喷雾干燥，得到鳕鱼肽粉；S4、分离制备：将步骤S3得到的鳕鱼肽粉按照质量比为(1：18)～(1：22)的比例加到质量分数为75％～85％的乙醇中，20～30℃搅拌1～2h，在7500～8500g转速下离心20～30min，取上清液，得到醇溶性鳕鱼肽；S5、脱醇：将步骤S4中所述的醇溶性鳕鱼肽用旋转蒸发仪除去乙醇至原体积的3～5％，得脱醇的醇溶性鳕鱼肽；S6、脱盐：将步骤S5中所述的脱醇的醇溶性鳕鱼肽按照体积比为1:(5～...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜明，袁禛，程述震，王震宇，吴超，徐献兵，董禹，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：
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