一种在线富集纯化蒲公英中香叶木素的方法技术

本发明专利技术提供了一种在线富集纯化蒲公英中香叶木素的方法，包括：（a）MOF材料的合成；（b）MOF材料的衍生化；（c）整体柱的制备；（d）在线富集纯化香叶木素；（e）分离香叶木素。本发明专利技术中制备的MOF/聚合物整体柱，改善了传统聚合物整体柱比表面积小、孔隙率低的不足，增强了其对香叶木素的吸附性能，此材料能对香叶木素实现有效的分离和富集。同时，采用正相色谱和反相色谱相结合的方式，增强了香叶木素与杂质的分离效果，能够有效制得高纯度香叶木素。此方法具有操作简单、经济有效的优点。经济有效的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种在线富集纯化蒲公英中香叶木素的方法


[0001]本专利技术涉及香叶木素分离纯化
，具体地说是涉及一种在线富集纯化蒲公英中香叶木素的方法。

技术介绍

[0002]香叶木素(Diosmetin)是一种来自天然中草药中的黄酮类化合物，在柑橘类的水果中含量丰富，也存在于一些蔷薇科和十字花科的药用植物中。其具有抗炎、抗菌、抗氧化、抑制肿瘤细胞的增殖，诱导肿瘤细胞凋亡的作用，在多种疾病的治疗方面拥有广泛的应用。
[0003]香叶木素具有多种药理活性，应用前景十分广泛，其主要从药用植物中提取，但是中草药的提取液组分复杂，杂质较多，通常采用萃取、层析、重结晶等一系列方式来获取香叶木素。此种方式使用大量有机溶剂，污染较大，且成本较高。因此，开发一种便捷高效的新方法从天然药用植物中富集和分离香叶木素是十分有意义的。
[0004]高效液相色谱法（HPLC）是一种重要的分离分析技术，它是利用不同物质在流动相和固定相中具有不同的分配系数，当流动相流过固定相时，物质在其中进行反复多次的分配，从而使各物质得到分离。按照固定相和流动相的相对极性，可以分为正相色谱和反相色谱两种，由于两者的分离对象不同，对于成分复杂的样品来说，采用两者结合的方式往往能得到更好的分离效果。
[0005]聚合物整体柱虽然是用作固相萃取的常用材料，但其本身存在比表面积小，孔隙率低的不足。而MOFs材料用于固相萃取领域时亦存在孔隙不均匀，难回收，机械稳定性差等问题。为了解决上述问题，本专利技术研究一种MOF/聚合物复合材料，有望在提高聚合物整体柱的孔隙率和比表面积的同时也加强了MOFs材料的机械稳定性，为从天然药用植物中富集和分离香叶木素提供一种有效可行的方案。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种在线富集纯化蒲公英中香叶木素的方法，以解决现有香叶木素的分离纯化方法使用大量有机溶剂，污染较大，且成本较高的问题。
[0007]本专利技术技术方案为：一种在线富集纯化蒲公英中香叶木素的方法，包括以下步骤：（a）MOF材料的合成将2
‑
氨基对苯二甲酸和九水合硝酸铬加入到去离子水中，在130
‑
170℃下反应10
‑
14h，将所得反应液进行离心，所得固体经洗涤后置于无水乙醇中，然后在90
‑
110℃下钝化10
‑
14h，再经离心、干燥，得到MOF材料；（b）MOF材料的衍生化依次将2
‑
（7
‑
偶氮苯并三氮唑）
‑
N,N,N',N'
‑
四甲基脲六氟磷酸酯、甲基丙烯酸、三乙胺和MOF材料加入到N,N
‑
二甲基甲酰胺中，25
‑
35℃下搅拌反应8
‑
12h，将所得反应液进行离心，所得固体经洗涤、干燥后得到衍生化的MOF材料；（c）整体柱的制备
将衍生化的MOF材料、甲基丙烯酸缩水甘油酯（GMA）、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯（TMPTMA）、过氧化二苯甲酰（BPO）、二元致孔剂加入到反应器中，混合均匀并超声震荡0.5
‑
1.5h，之后加入N,N
‑
二甲基苯胺，混合均匀后倒入干净的空柱管中，密封，在25
‑
35℃水浴下反应3
‑
4h，取出经冲洗后得到MOF/聚合物整体柱；（d）在线富集纯化香叶木素将MOF/聚合物整体柱接入高效液相色谱仪中，在富集流动相下将蒲公英提取液注入，经MOF/聚合物整体柱进行富集并去除部分杂质，然后将C18分析柱接在MOF/聚合物整体柱后面，使用洗脱流动相将吸附在整体柱上的香叶木素洗脱并进行分析；（e）分离香叶木素将MOF/聚合物整体柱富集纯化后的洗脱液浓缩，浓缩液依次经反相色谱柱、正相色谱柱分离后，得到高纯度的香叶木素。
[0008]步骤（a）中，2
‑
氨基对苯二甲酸和九水合硝酸铬的质量比为1.80 g : 3.80 ~ 4.20 g。
[0009]步骤（a）中，在去离子水中加入氢氧化钠，所述氢氧化钠与2
‑
氨基对苯二甲酸的质量比为0.9 ~ 1.0 g : 1.80 g。
[0010]步骤（b）中，2
‑
（7
‑
偶氮苯并三氮唑）
‑
N,N,N',N'
‑
四甲基脲六氟磷酸酯、甲基丙烯酸、三乙胺、MOF材料和N,N
‑
二甲基甲酰胺的用量比为2.3 ~ 2.5 g : 0.50 ~ 0.60 mL : 1.30 ~ 1.40 mL : 0.45 ~ 0.50 g : 30 mL。步骤（a）和（b）中，洗涤操作为：用N,N
‑
二甲基甲酰胺（DMF）和无水乙醇分别洗涤2
‑
4次。
[0011]步骤（c）中，衍生化的MOF材料、甲基丙烯酸缩水甘油酯、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、过氧化二苯甲酰、二元致孔剂和N,N
‑
二甲基苯胺的用量比为0.002 g : 0.25 ~ 0.28 mL : 0.25 ~ 0.35 mL : 0.003 ~ 0.004 g : 1.7 mL : 25 ~ 35
ꢀµ
L。
[0012]步骤（c）中，所述二元致孔剂为聚乙二醇、正丙醇、异丙醇中的两种。
[0013]步骤（c）中，所述冲洗操作为：用甲醇先以0.1 mL/min的流速冲洗，然后逐渐升高流速至1.0 mL/min，并在此流速下继续冲洗30 min。
[0014]步骤（d）中，蒲公英提取液制备为：将蒲公英粉碎，置于水和乙醇的混合提取液中，在65
‑
75℃下提取50
‑
90min，过滤，取滤液进行浓缩，经0.45um滤膜过滤后得到蒲公英提取液。
[0015]步骤（d）中，所述富集流动相为乙腈/水，比例为15/85（v/v）~ 10/90（v/v），所述洗脱流动相为乙腈/水，比例为60/40（v/v）~ 65/35（v/v）；步骤（e）中，反相色谱柱为5 C18
‑
MS
‑Ⅱ
（250
ꢀ×ꢀ
10 mm i.d.），流动相为乙腈/水（40/60, v/v），正相色谱柱为HPLCONE 5SIL（250
ꢀ×ꢀ
10 mm i.d.），流动相为正己烷/异丙醇（80/20, v/v）。
[0016]本专利技术中制备的MOF/聚合物整体柱，改善了传统聚合物整体柱比表面积小、孔隙率低的不足，增强了其对香叶木素的吸附性能，此材料能对香叶木素实现有效的分离和富集。同时，采用正相色谱和反相色谱相结合的方式，增强了香叶木素与杂质的分离效果，能够有效制得高纯度香叶木素。此方法具有操作简单、经济有效的优点。
附图说明
[0017]图1是MOF材料（a）与使用方法1（b）和方法2（c）得到的衍生化MOF材料的红外光谱
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种在线富集纯化蒲公英中香叶木素的方法，其特征在于，包括以下步骤：（a）MOF材料的合成将2
‑
氨基对苯二甲酸和九水合硝酸铬加入到去离子水中，在130
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170℃下反应10
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14h，将所得反应液进行离心，所得固体经洗涤后置于无水乙醇中，然后在90
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110℃下钝化10
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14h，再经离心、干燥，得到MOF材料；（b）MOF材料的衍生化依次将2
‑
（7
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偶氮苯并三氮唑）
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N,N,N',N'
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四甲基脲六氟磷酸酯、甲基丙烯酸、三乙胺和MOF材料加入到N,N
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二甲基甲酰胺中，25
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35℃下搅拌反应8
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12h，将所得反应液进行离心，所得固体经洗涤、干燥后得到衍生化的MOF材料；（c）整体柱的制备将衍生化的MOF材料、甲基丙烯酸缩水甘油酯、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、过氧化二苯甲酰、二元致孔剂加入到反应器中，混合均匀并超声震荡0.5
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1.5h，之后加入N,N
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二甲基苯胺，混合均匀后倒入干净的空柱管中，密封，在25
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35℃水浴下反应3
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4h，取出经冲洗后得到MOF/聚合物整体柱；（d）在线富集纯化香叶木素将MOF/聚合物整体柱接入高效液相色谱仪中，在富集流动相下将蒲公英提取液注入，经MOF/聚合物整体柱进行富集并去除部分杂质，然后将C18分析柱接在MOF/聚合物整体柱后面，使用洗脱流动相将吸附在整体柱上的香叶木素洗脱并进行分析；（e）分离香叶木素将MOF/聚合物整体柱富集纯化后的洗脱液浓缩，浓缩液依次经反相色谱柱、正相色谱柱分离后，得到高纯度的香叶木素。2.根据权利要求1所述的在线富集纯化蒲公英中香叶木素的方法，其特征在于，步骤（a）中，2
‑
氨基对苯二甲酸和九水合硝酸铬的质量比为1.80 : 3.80 ~ 4.20 。3.根据权利要求1所述的在线富集纯化蒲公英中香叶木素的方法，其特征在于，步骤（a）中，在去离子水中加入氢氧化钠，所述氢氧化钠与2
‑
氨基对苯二甲酸的质量比为0.9 ~ 1.0 g : 1.80 g。4.根据权利要求1所述的在线富集纯化蒲公英中香叶木素的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘海燕，王杉，白立改，闫宏远，
申请(专利权)人：河北大学，
类型：发明
国别省市：