过氧化物酶体中修饰蛋白的表达制造技术

本文公开了包括用于在过氧化物酶体中制备蛋白质的方法和组合物以及制备用于在过氧化物酶体中产生蛋白质的细胞的方法。本文还公开了用于在过氧化物酶体中产生蛋白质的细胞，以及用于在含有本文所述过氧化物酶体的真核细胞中产生蛋白质的方法。细胞中产生蛋白质的方法。细胞中产生蛋白质的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】过氧化物酶体中修饰蛋白的表达
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2019年5月14日提交的美国临时申请第62/847,769号的权益，将所述美国临时申请在此通过引用以其整体并入。引用电子格式的序列表和表格
[0002]本申请是与2020年5月7日创建的标题为PBFAB001WO2SEQLIST.TXT的电子序列表(其大小为235KB)一起提交的。电子序列表中的信息在此通过引用以其整体并入。领域
[0003]本文提供了用于基因修饰细胞以产生例如可用于人工材料的蛋白质和蛋白质前体的方法和组合物。背景
[0004]本领域需要在细胞中产生和修饰蛋白质的改进方法。在细胞中产生和修饰的蛋白质可以以多种方式使用。概述
[0005]本文描述了用于产生蛋白质的方法，所述蛋白质可以充当材料的前体，如考虑了用于膜显影中产物的底物；用于丸剂的胶囊(药物和保健品中的明胶)；用于食品和合成肉的食品添加剂(例如所有明胶)和胶原，纺织品如合成皮革，美容产品和生物医学材料(支架、缝合线、移植物、扩增细胞、凝胶等)。这种方法的使用还可以提供从目前使用的标准制造方法减本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.在过氧化物酶体中产生修饰蛋白的方法，所述方法包括：提供细胞；将第一核酸引入到所述细胞中，其中所述第一核酸包含编码与过氧化物酶体靶向序列融合的异源蛋白的第一序列；以及将第二核酸引入到所述细胞中，其中所述第二核酸包含编码与过氧化物酶体靶向序列融合的异源修饰酶的第二序列。2.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞是真核细胞。3.如权利要求1
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2中任一项所述的方法，其中所述细胞是酵母细胞。4.如权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述细胞选自Arxula、假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母菌属(Kluyveromyces)、Komagataella、Ogataea、毕赤酵母属(Pichia)、酵母属(Saccharomyces)或耶氏酵母属(Yarrowia)。5.如权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二核酸包含启动子。6.如权利要求5所述的方法，其中所述启动子是组成型或诱导型的。7.如权利要求1
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6中任一项所述的方法，其中所述过氧化物酶体靶向序列包含SEQ ID NO:1(SLK)、SEQ ID NO:2(RLXXXXX(H/Q)L)或SEQ ID NO:3(LGRGRRSKL)所示的序列。8.如权利要求1
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7中任一项所述的方法，其中所述蛋白质包含标签。9.如权利要求8所述的方法，其中所述标签是可切割的。10.如权利要求1
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9中任一项所述的方法，其中所述方法还包括将第三核酸引入到所述细胞中，其中所述第三核酸包含编码与过氧化物酶体靶向序列融合的第二异源修饰酶的第三序列。11.如权利要求1
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10中任一项所述的方法，其中所述异源蛋白的分子量为1Da、5Da、10Da、20Da、30Da、40Da、50Da、60Da、70Da、80Da、90Da、100Da、200Da、300Da、400Da、500Da、600Da、700Da、800Da、900Da、1kDa、5kDa、10kDa、20kDa、30kDa、40kDa、50kDa、60kDa、70kDa、80kDa、90kDa、100kDa、110kDa、120kDa、130kDa、140kDa、150kDa、160kDa、170kDa、180kDa、190kDa、200kDa、210kDa、220kDa、230kDa、240kDa、250kDa、260kDa、270kDa、280kDa、290kDa或300kDa，或在由任何两个上述值限定的范围内的任何分子量大小，或高达300kDa。12.如权利要求1
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11中任一项所述的方法，其中所述酶产生修饰。13.如权利要求12所述的方法，其中所述修饰是羟基化、蛋白质折叠、氧化、蛋白质水解、磷酸化、去磷酸化和/或异构化。14.如权利要求1
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13中任一项所述的方法，其中所述酶包括脯氨酰羟化酶、赖氨酰氧化酶、蛋白伴侣或脯氨酰异构酶。15.如权利要求1
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14中任一项所述的方法，其中所述酶选自脯氨酰异构酶、蛋白质二硫化物异构酶、羟基转移酶或脯氨酰羟化酶。16.如权利要求1
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15中任一项所述的方法，其中所述蛋白质包括胶原、明胶或丝蛋白。17.如权利要求1
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16中任一项所述的方法，其中所述核酸经密码子优化用于真核细胞如酵母细胞中的蛋白表达。18.如权利要求1
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17中任一项所述的方法，其中所述酶包括脯氨酰羟化酶或脯氨酰异构酶。19.如权利要求1
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18中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是胶原，所述胶原被修饰，
产生I型异三聚体、I型α同三聚体或III型同三聚体胶原。20.如权利要求1
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19中任一项所述的方法，其中所述异源蛋白包含Col1A1或Col1A2。21.如权利要求1
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20中任一项所述的方法，其中所述酶包括脯氨酰
‑4‑
羟化酶。22.如权利要求21所述的方法，其中所述脯氨酰
‑4‑
羟化酶被基因修饰以具有PDI结构域的缺失。23.如权利要求1
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22中任一项所述的方法，其中所述酶被基因修饰以改善表达和导入所述过氧化物酶体中。24.如权利要求1
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23中任一项所述的方法，其中所述蛋白质被基因修饰以改善表达和导入所述过氧化物酶体中。25.如权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：吉纳维夫，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：