KCNJ16基因突变体及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及KCNJ16基因突变及其应用。所述KCNJ16基因突变与野生型KCNJ16基因相比，具有以下突变：c.637(exon6)G>T。本发明专利技术为肾小管酸中毒(低钾、高氯、酸中毒)、内分泌腺体病(甲状腺功能减退、甲状旁腺功能减退)和听力下降疾病的诊断和治疗提供了良好的理论和实践基础。提供了良好的理论和实践基础。提供了良好的理论和实践基础。

【技术实现步骤摘要】
KCNJ16基因突变体及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及KCNJ16基因突变体及其应用。

技术介绍

[0002]内分泌腺体疾病包括甲状腺功能减退和甲状旁腺功能减退。
[0003]其中，甲状腺功能减退是甲状腺激素合成及分泌减少、或其生理效应不足所致机体代谢降低机体代谢功能降低的疾病，其临床表现为：面色苍白，眼睑和颊部虚肿，表情淡漠，全身皮肤干燥、增厚、粗糙多脱屑，非凹陷性水肿，毛发脱落，手脚掌呈萎黄色，体重增加，少数病人指甲厚而脆裂；记忆力减退，智力低下，嗜睡，反应迟钝，多虑，头晕，头痛，耳鸣，耳聋，眼球震颤，共济失调，腱反射迟钝，跟腱反射松弛期时间延长，重者可出现痴呆，木僵，甚至昏睡；心动过缓，心输出量减少，血压低，心音低钝，心脏扩大，可并发冠心病，但一般不发生心绞痛与心衰，有时可伴有心包积液和胸腔积液；厌食、腹胀、便秘；肌肉软弱无力、疼痛、强直，可伴有关节病变如慢性关节炎；女性月经过多，久病闭经，不孕；男性阳痿，性欲减退；病情严重时，由于受寒冷、感染、手术、麻醉或镇静剂应用不当等应激可诱发黏液性水肿昏迷或称“甲减危象”，表现为低体温(T〈35℃)，呼吸减慢，心动过缓，血压下降，四肢肌力松弛，反射减弱或消失，甚至发生昏迷，休克，心肾功能衰竭；表情呆滞，发音低哑，颜面苍白，眶周浮肿，两眼距增宽，鼻梁扁塌，唇厚流涎，舌大外伸四肢粗短、鸭步；身材矮小，智慧低下，性发育延迟。
[0004]甲状旁腺功能减退是指甲状旁腺素产生减少或作用缺陷造成的低钙血症、高磷血症为主要症状的疾病。甲状旁腺功能减退的临床表现为：神经肌肉应激性增加，初期主要有麻木、刺痛和蚁走感，严重者呈手足搐搦，甚至全身肌肉收缩而有惊厥发作，一般当血游离钙浓度≤0.95mmol/L(3.8mg/dl)，或血总钙值≤1.88mmol/L(7.5mg/dl)时常出现症状；癫痫发作，其类型有大发作、小发作、精神运动性发作和癫痫持续状态；外胚层组织营养变性，如低钙性白内障、出牙延迟、牙发育不全、磨牙根变短、龋齿多、甚至缺牙、皮肤角化过度、指(趾)甲变脆、粗糙和裂纹及头发脱落等；骨骼改变，病程长、病情重者可有骨骼疼痛，以腰背和髋部多见。骨密度正常或增加；胃肠道功能紊乱，有恶心、呕吐、腹痛和便秘等；心血管异常，低血钙刺激迷走神经可导致心肌痉挛而突然死亡，患者心率增速或心律不齐；转移性钙化，多见于脑基底节(苍白球、壳核和尾状核)，常对称性分布；典型患者常有所谓AHO体型(身材矮粗、体型偏胖、脸圆、颈短、盾状胸)，指、趾骨畸形(多为第4、5掌骨或跖骨)。
[0005]内分泌腺体疾病给患者及家庭带来了极大的危害。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种基因突变及其应用。
[0007]为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0008]本专利技术的目的在于保护一种基因突变，其与野生型KCNJ16基因相比，具有以下突变：c.637(exon6)G>T。
[0009]本专利技术的目的还在于保护一种核酸，其与野生型KCNJ16基因相比，所述核酸具有以下突变：c.637(exon6)G>T。
[0010]本专利技术的目的还在于保护一种蛋白质，其与野生型KCNJ16基因表达的蛋白质的氨基酸序列相比，所述蛋白质的氨基酸序列具有以下突变：p.E213
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X，206。
[0011]本专利技术的目的还在于保护检测如上所述基因突变或如上所述核酸或如上所述蛋白质的试剂在制备试剂盒或设备中的应用，所述试剂盒或设备用于检测肾小管酸中毒症、内分泌腺体疾病或听力疾病，所述试剂包括特异性针对所述基因突变、所述核酸和所述蛋白质中的至少一种的所述抗体、探针、引物及质谱检测试剂的至少一种。
[0012]本专利技术的目的还在于保护生物模型在筛选药物中的应用，所述生物模型至少携带以下任意一种：如上所述基因突变；如上所述核酸；如上所述蛋白质；所述生物模型为细胞模型或动物模型。
[0013]本专利技术的目的还在于保护特异性改变如上所述基因突变或如上所述核酸的试剂在制备药物中的应用，所述药物用于治疗肾小管酸中毒症、内分泌腺体疾病或听力疾病。
[0014]本专利技术的目的还在于保护检测肾小管酸中毒症、内分泌腺体疾病或听力疾病的试剂盒，所述试剂盒中包括检测如上所述基因突变的试剂，和/或，如上所述核酸的试剂，和/或，检测如上所述蛋白质的试剂。
[0015]本专利技术的有益效果在于：
[0016]本专利技术为肾小管酸中毒(低钾、高氯、酸中毒)、内分泌腺体病(甲状腺功能减退、甲状旁腺功能减退)和听力下降疾病的诊断和治疗提供了良好的理论和实践基础。
附图说明
[0017]图1为小鼠测序结果，其中，Query为野生型基因组序列，Subject为突变后实际测序结果。Mutation为突变位点；
[0018]图2为小鼠听力检测结果，其中，A为KCNJ16(E213X)点突变小鼠的构建流程，B为三种基因型小鼠12周龄时的大体照片，C为免疫印迹法检测Kir5.1蛋白羧基端(Kir5.1
‑
C)、氨基端(Kir5.1
‑
N)的表达，以β肌动蛋白(ACTB)为内参；D为蛋白印迹条带的灰度分析，*表示与WT组比较，P值小于0.05；E为小鼠听性脑干诱发电位(ABR)检测三周小鼠的听力阈值，Wild type allele为野生型，Targeted allele为目标等位基因，Point mutation allele为点突变等位基因，Exon为KCNJ16的外显子，WT、HE、HO分别为野生型、杂合子、纯合子，下同；
[0019]图3为骨密度检测结果，采用微CT扫描技术进行测量，其中，A为小鼠股骨的二维及三维图像，B为骨密度(BMD)测量值的比较，C为骨小梁分离度(Tb.Sp)的比较，D为骨表面积组织体积比值(BS/TV)的比较，E为骨小梁数量(Tb.N)的比较，F为骨小梁厚度(Tb.Th)的比较。
具体实施方式
[0020]所举实施例是为了更好地对本专利技术的内容进行说明，但并不是本专利技术的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述
技术实现思路
对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。
[0021]实施例1
[0022]突变基因
[0023]2018年9月，专利技术人在临床工作中发现了一例KCNJ16基因(NM_001270422.1)无义突变(p.E213
→
X，206)的家系，经检测，该突变基因含有以下突变：c.637(exon6)G>T，其中，检测方法为基因全外显子测序，基因全外显子测序委托广州金域医学检验中心完成。
[0024]该家系中4个纯合突变患者主要临床表现均为肾小管酸中毒(低钾、高氯、酸中毒)、内分泌腺体病(甲状腺功能减退、甲状旁腺功能减退)和听力下降，而其余13个杂合突变的家系成员无明显临床表现。
[0025]KCNJ16基因编码整流性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因突变，其特征在于，与野生型KCNJ16基因相比，具有以下突变：c.637(exon6)G>T。2.一种核酸，其特征在于，与野生型KCNJ16基因相比，所述核酸具有以下突变：c.637(exon6)G>T。3.一种蛋白质，其特征在于，与野生型KCNJ16基因表达的蛋白质的氨基酸序列相比，所述蛋白质的氨基酸序列具有以下突变：p.E213
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X，206。4.检测权利要求1所述基因突变或权利要求2所述核酸或权利要求3所述蛋白质的试剂在制备试剂盒或设备中的应用，所述试剂盒或设备用于检测肾小管酸中毒症、内分泌腺体疾病或听力疾病，所述试剂包括特异性针对...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡炯宇，张均辉，张喻平，邓芳，张琼，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：