一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法技术

技术编号:33241523 阅读:147 留言:0更新日期:2022-04-27 17:45
本发明专利技术公开了一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法,属于植物基因工程技术领域。本发明专利技术首次利用CRISPR/Cas9基因编辑系统,对HD

【技术实现步骤摘要】
一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法


[0001]本专利技术涉及植物基因工程
,更具体的说是涉及一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法。

技术介绍

[0002]西瓜(Citrullus lanatus),为葫芦科(Cucurbitaceae)西瓜属(Citrullus),是世界上种植比较广泛的一种重要的葫芦科作物,更是一种水果型经济作物,因其种植面积和年消费量而被评为世界第五大水果。目前,商品种杂交纯度的鉴定一直是我国西瓜产业中亟待解决的技术难题,若无法及时地把母本自交苗从杂交苗中去除,将会给西瓜生产带来严重损失。
[0003]西瓜叶形变异作为一种理想形态标记,可用于直观、快速、准确的鉴定杂交种的纯度,降低伪杂种在作物生产中带来的损失。目前,在其他作物中叶缘裂刻基因功能有相关报道,包括油菜叶缘裂刻基因(BnLL1);羽衣甘蓝控制裂叶关键基因(Bo9g184610);拟南芥叶缘裂刻相关基因(LMI1)等。西瓜的裂叶基因还未见基因功能鉴定的报道。
[0004]因此,提供一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法,其特征在于,具体步骤如下:(1)根据Cla97C04G076510的CDS序列设计基因编辑的靶位点,包含两个靶点Target1和Target2;Target1序列:5
’‑
GTGGAAGGTGAACAAAGTA
‑3’
;SEQ ID NO.2;Target2序列:5
’‑
GCTAAGAGAACAAGCAACG
‑3’
;SEQ ID NO.3;(2)构建CRISPR/Cas9编辑载体

以中间载体pCBC

DT1T2为模板,利用引物Target1F/Target2R进行PCR扩增,回收目的片段;

利用限制性内切酶BsaI

HF对CRISPR/Cas9载体pBSE402进行酶切,回收酶切后的载体pBSE402;

将步骤

回收的目的片段与步骤

酶切后的载体pBSE402进行同源重组连接,...

【专利技术属性】
技术研发人员:魏春华张显闫星岳贞张勇马建祥李好杨建强
申请(专利权)人:西北农林科技大学
类型:发明
国别省市:

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