一种金龟子绿僵菌复壮方法技术

本发明专利技术属于植物保护领域，具体提供一种金龟子绿僵菌复壮方法，具体为选取生长状况良好的草地贪夜蛾幼虫，饥饿处理4

【技术实现步骤摘要】
一种金龟子绿僵菌复壮方法


[0001]本专利技术涉及培养基领域，确切地说是一种金龟子绿僵菌菌种复壮方法，应用于草地贪夜蛾等鳞翅目害虫的防控。

技术介绍

[0002]金龟子绿僵菌（Metarhiziumanisopliae）属于子囊菌门、肉座菌目、麦角菌科、绿僵菌属，是一种广谱性的杀虫真菌。在自然界中主要进行无性繁殖，由昆虫体壁进行主动入侵而感染不同昆虫，在昆虫血腔中可进行酵母状繁殖，产生大量虫菌体，同时可产生破坏素(destuxin，非核糖体多肽类毒素）等杀虫毒素，抑制昆虫免疫、加速杀虫。已经发现金龟子绿僵菌能够侵染鳞翅目、鞘翅目、同翅目、半翅目、直翅目和双翅目20多种害虫。
[0003]随着草地贪夜蛾在我国定殖，防治由应急防控迅速转为重要害虫的长期防控工作，生物防治具有不污染环境、持续控制效果好的特点，将发挥越来越重要的作用，研究表明金龟子绿僵菌对草地贪夜蛾具有较好的毒力，且不易产生抗药性，因此金龟子绿僵菌将是防治草地贪夜蛾的重要的资源。
[0004]而拥有优良的菌种是生物防治工作中最关键的一环。菌种的保藏及复壮是日常生产中非常重要的环节，而菌种在保藏或使用过程中，经过多代培养后会产生退化现象，表现为菌丝生长慢，呈稀疏的长毛状，菌苔薄，用接种针挑取孢子时往往挑到一层白色的薄皮，孢子产生时间推迟，产孢量减少，产生不育孢子，导致毒力降低。一般菌种经过转接7～8代后必须进行菌种复壮，使其恢复或提高原有的特性。
[0005]金龟子绿僵菌MetarhiziumanisopliaeNG
‑/>Ma040由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所生物防治团队从宁国玉米种植区调查发现田间有疑似感染虫生真菌的草地贪夜蛾僵虫中分离鉴定获得。保藏号为CGMCCNO.19273，2020年1月17日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。具体测序结果如下：18SrDNA序列：ATTATACAGCGAAACTGCGAATGGCTCATTATATAAGTTATCGTTTATTTGATAGTACCTTACTACTTGGATAACCGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCTAAAAATCCCGACTTCGGAAGGGATGTATTTATTAGATACAAAACCAATGCCCCTCGGGGCTCTCTGGTGATTCATGATAACTCGTCGAATCGCACGGCCTTGCGCCGGCGATGGTTCATTCAAATTTCTTCCCTATCAACTTTCGATGTTTGGGTAGTGGCCAAACATGGTGGCAACGGGTAACGGAGGGTTAGGGCTCGACCCCGGAGAAGGAGCCTGAGAAACGGCTACTACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGATACGGGGAGGTAGTGACAATAAATACTGATACAGGGCTCTTTTGGGTCTTGTAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGTGGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAATCTTGGGCCTGGCTGGCCGGTCCGCCTCACCGCGTGTACTGGTCCGGCCGGGTCTTTCACTCTGCGGAACCACATGCCCTTCAGTGGGTGTGGCGGGGAAGCAGGACTTTTACTTTGAAAAAATTAGAGTGCTCTAAGCAGGCCAATGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAAAATAGGACGCGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATGAATAGGGACAGTCGGGGGCATCAGTATTCAGTTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATCTACTGAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAGGAAC
GAAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAGGGATCGGACGATGTTATTTAGTTGACTCGTTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTGCTTGGGCTCCAGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGAAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGGGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTCACCAGGTCCAGACACAATGAGGATTGACAGATTGAGAGCTCTTTCTTGATTTTGTGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGCTTAATTGCGATAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGTCAGTATTGCTATGGCAGTACGCAGGCTTCTTAGAGGGAITS序列：TGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTAGTCCTACCTGATTCGAGGTCAACTATAAAAAGTTGGGGGGTTTTACGGCAGTGGACCGCGCCGGGCTCCTGTTGCGAGTGTTTTACTACTGCGCAGAGGAGGGCCACGGCGAGACCGCCAATTGATTTGAGGGACGGCTGTGCTGGAAAACCAGCCTCGCCGATCCCCAACACCAAGTCCACAGGGGACTTGAGGGGCGTAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCAGAATACTGACGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTCATTTTTTTTAACCACTCAGAAGATACTTATTAAAAAATTCAGAAGGTTTGGGTCCCCGGCGGGCGCGAAGTCCCGCCGAAGCAACAATTAAAGGTATAATTCACAGGGGTTGGGAGTTGGATAACTCGGTAATGATCCCTCCGCA金龟子绿僵菌MetarhiziumanisopliaeNG
‑
Ma040经过转接8代后，已表现出产孢量下降、徒长菌丝等现象。始终保持高产孢量、高毒力是决定金龟子绿僵菌菌株应用前景的重要因素。

技术实现思路

[0006]草地贪夜蛾作为金龟子绿僵菌MetarhiziumanisopliaeNG
‑
Ma040寄主，菌株可在草地贪夜蛾虫体上不断繁殖。为了保持金龟子绿僵菌MetarhiziumanisopliaeNG
‑
Ma040菌株毒力，本文在活虫复壮法、虫尸复壮法的基础上，尝试以饥饿处理后草地贪夜蛾幼虫本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种金龟子绿僵菌复壮方法，其特征在于，选取生长状况良好的草地贪夜蛾幼虫，饥饿处理4
‑
7天后挑取活虫，将金龟子绿僵菌MetarhiziumanisopliaeNG
‑
Ma040分生孢子用质量浓度0.01
‑
0.1%吐温
‑
80配成悬浮液，浓度调至1
‑
10
×
108个/mL，将饥饿处理后草地贪夜蛾幼虫在孢子悬浮液中浸10
‑
30s，滤纸吸干表面水分，在培养箱中培养，待出现草地贪夜蛾僵虫后进行孢子分离及纯化。2.根据权利要求1所述的金龟子绿僵菌复壮方法，其特征在于，所述草地贪夜蛾幼虫为3龄幼虫；所述饥饿处理为5天；所述吐温
‑
80的质量浓度为0.05%；所述孢子悬浮液浓度为1.0
×
108个/mL；所述的浸泡时间为20s。3.根据权利要求1所述的金龟子绿僵菌复壮方法，其特征在于，培养箱培养条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡飞，钱国华，吴飞龙，徐丽娜，胡本进，苏贤岩，徐婷婷，毕思佳，任学祥，陈浩梁，张勇，戚仁德，李瑞雪，周荣，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所，
类型：发明
国别省市：