带有病毒灭活的纯化目标物质的方法技术

本发明专利技术涉及一种从包含至少一种杂质的待处理流体开始纯化目标物质的方法，所述方法包括以下步骤：

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】带有病毒灭活的纯化目标物质的方法


[0001]本专利技术涉及包括病毒灭活的用于纯化目标物质的色谱方法。

技术介绍

[0002]通常通过细胞培养(细菌或真核细胞)生产抗体和其他物质。然后必须通过各种技术纯化由此生产的目标物质，以消除生产环境中存在的杂质。为此，通常这些物质(特别是抗体)要经受捕获步骤(例如通过亲和色谱法)以及一个或多个精制步骤(例如通过离子交换色谱法)。所述纯化方法通常还包括病毒灭活步骤。
[0003]例如，文献US9,149,738公开了一种用于纯化分子的方法，该方法使用至少三个相互连接成圈并包含亲和或离子交换基质的分离单元，其中循环进行：第一柱装载有待纯化的样品，同时与第二柱流体连通，同时，第三柱洗脱并再生。然后可以通过在线暴露于酸性pH或使用缓冲液储集器对纯化的分子进行病毒灭活步骤，接着进行流通色谱步骤。
[0004]文献WO2012/078677描述了一种用于纯化生物分子的连续方法，包括捕获步骤和病毒灭活步骤，其中，将所述捕获步骤的流收集在容器中，在该容器中通过用酸滴定来调节其pH。然后，将溶液放置失活所需时间，然后转移到另一个容器，在该容器中重新调节其pH值以转移到下一个单元，例如阳离子交换色谱柱。
[0005]文献EP2763771和US8,536,316描述了纯化方法，其中在将柱负载了待处理样品之后并在目标分子洗脱之前，通过将病毒灭活缓冲液过柱来进行的。在其他方法中，例如在文献WO2009/045897中记载的那些，病毒灭活是通过在酸性条件下洗脱保留在第一色谱柱上的目标分子并且通过将酸性洗出液在储集器中保持一定的时间来进行的。
[0006]文献EP3130384描述了一种纯化分子的方法，包括结合和洗脱色谱步骤和流通纯化步骤(活性炭、阴离子交换色谱和阳离子交换色谱)。结合和洗脱色谱步骤之后可以是病毒灭活，其中病毒灭活剂被在线引入到包括静态混合器的连接管线中，或使用缓冲液储集器。
[0007]文献US9,527,010描述了一种用于纯化生物分子的系统，该系统包括两个串联的色谱装置，与连接所述两个色谱装置的导管偶联以测量如pH、电导率或物种浓度的性质的传感器，允许作为所述性质的值的函数向连接两个色谱装置的导管中注入流体的装置，以及过滤器，以消除第二色谱装置的下游的病毒。
[0008]需要一种包括病毒灭活的有效的纯化方法，该方法可以在单个设备中实施并由单个计算机程序控制，从而允许设备的总体尺寸减小、纯化更快和纯化质量更好。

技术实现思路

[0009]首先，本专利技术涉及一种用于在设备中从包含至少一种杂质的待处理流体中纯化目标物质的方法，所述设备包括：
[0010]–
第一分离单元，包括至少一个色谱柱、流体入口和流体出口；
[0011]–
第二分离单元，包括至少一个色谱柱、流体入口、流体出口和绕过第二分离单元
的所述至少一个色谱柱的旁路管线；
[0012]–
与第一分离单元的流体出口和第二分离单元的流体入口流体连接的第一储集器；以及
[0013]–
与第二分离单元的至少一个流体入口和流体出口流体连接的第二储集器；
[0014]其中，该方法包括以下步骤：
[0015]–
提供待处理流体的流；
[0016]–
在所述第一分离单元中通过色谱步骤处理待处理流体的流；
[0017]–
在所述第一储集器中收集富含目标物质的馏分；
[0018]–
对富含目标物质的馏分进行病毒灭活，其中，所述病毒灭活包括：
[0019]将在第一储集器中收集的富含目标物质的馏分经由旁路管线通过第二分离单元；
[0020]将病毒灭活溶液经由旁路管线通过第二分离单元；
[0021]将富含目标物质的馏分与病毒灭活溶液混合；以及
[0022]在第二储集器中收集富含目标物质的馏分与病毒灭活溶液的混合物；
[0023]从而获得耗尽活性病毒的馏分；
[0024]–
在第二分离单元中通过色谱步骤处理耗尽活性病毒的馏分；以及
[0025]–
在第二分离单元的出口处收集更加富含目标物质的馏分。
[0026]在一些实施方式中，在第一分离单元中通过色谱步骤对待处理流体的流的处理是亲和色谱处理。
[0027]在一些实施方式中，在第二分离单元中通过色谱步骤对耗尽活性病毒的馏分的处理是通过离子交换色谱的处理，优选是通过阴离子交换色谱的处理。
[0028]在一些实施方式中，使在第一储集器中收集的富含目标物质的馏分经由旁路管线通过第二分离单元的步骤和使病毒灭活溶液经由旁路管线通过第二分离单元的步骤是同时的，其中，将富含目标物质的馏分与病毒灭活溶液混合的步骤在第二分离单元的旁路管线中在线进行。
[0029]在一些实施方式中，使在第一储集器中收集的富含目标物质的馏分经由旁路管线通过第二分离单元的步骤和使病毒灭活溶液经由旁路管线通过第二分离单元的步骤是相继的，其中，将富含目标物质的馏分与病毒灭活溶液混合的步骤在第二储集器中进行。
[0030]在一些实施方式中，将在第二储集器中收集的富含目标物质的馏分和病毒灭活溶液的混合物在第二储集器中储集至少15分钟，优选20至45分钟的持续时间，更优选地伴随着搅拌。
[0031]在一些实施方式中，富含目标物质的馏分的病毒灭活进一步包括：
[0032]a)将在第二储集器中收集的富含目标物质的馏分和病毒灭活溶液的混合物经由旁路管线通过第二分离单元；
[0033]b)在第二分离单元出口处将混合物收集在第二储集器中；
[0034]其中步骤a)和b)任选地重复一次或多次或连续进行；以及
[0035]c)任选地将混合物储集在第二储集器中，优选地伴随着搅拌；
[0036]其中任选重复或任选连续进行的步骤a)和b)，以及任选的步骤c)一起，优选进行至少15分钟的持续时间，更优选20至45分钟的持续时间。
[0037]在一些实施方式中，所述第二分离单元进一步包括pH传感器和/或温度传感器，优选在线传感器，其中，富含目标物质的馏分的病毒灭活进一步包括测量和任选地调节通过第二分离单元的富含目标物质的馏分和病毒灭活溶液的混合物的pH和/或温度。
[0038]在一些实施方式中，病毒灭活溶液是酸性溶液。
[0039]在一些实施方式中，富含目标物质的馏分和酸性溶液的混合物具有小于或等于5，优选小于或等于4的pH。
[0040]在一些实施方式中，该方法包括在第二分离单元中通过色谱步骤处理耗尽活性病毒的馏分的步骤之前向耗尽活性病毒的馏分添加碱性溶液的步骤。
[0041]在一些实施方式中，向耗尽活性病毒的馏分添加碱性溶液是在第二分离单元中在线进行的。
[0042]在一些实施方式中，向耗尽活性病毒的馏分添加碱性溶液是在第二储集器中进行，优选通过使碱性溶液经由旁路管线通过第二分离单元。
[0043]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于在设备中从包含至少一种杂质的待处理流体中纯化目标物质的方法，所述设备包括：
–
第一分离单元(1)，包括至少一个色谱柱、流体入口和流体出口；
–
第二分离单元(2)，包括至少一个色谱柱、流体入口(10)、流体出口(11)和绕过第二分离单元(2)的所述至少一个色谱柱的旁路管线(9)；
–
与第一分离单元(1)的流体出口和第二分离单元(2)的流体入口(10)流体连接的第一储集器(4)；以及
–
与第二分离单元(2)的至少一个流体入口(10)和流体出口(11)流体连接的第二储集器(5)；其中，该方法包括以下步骤：
–
提供待处理流体的流；
–
在所述第一分离单元(1)中通过色谱步骤处理待处理流体的流；
–
在所述第一储集器(4)中收集富含目标物质的馏分；
–
对富含目标物质的馏分进行病毒灭活，其中，所述病毒灭活包括：将在第一储集器(4)中收集的富含目标物质的馏分经由旁路管线(9)通过第二分离单元(2)；将病毒灭活溶液经由旁路管线(9)通过第二分离单元(2)；将富含目标物质的馏分与病毒灭活溶液混合；以及在第二储集器(5)中收集富含目标物质的馏分与病毒灭活溶液的混合物；从而获得耗尽活性病毒的馏分；
–
在第二分离单元(2)中通过色谱步骤处理耗尽活性病毒的馏分；以及
–
在第二分离单元(2)的出口处收集更加富含目标物质的馏分。2.根据权利要求1所述的方法，其中，通过第一分离单元(1)中的色谱步骤对待处理流体的流的处理是亲和色谱处理。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在第二分离单元(2)中通过色谱步骤对耗尽活性病毒的馏分的处理是通过离子交换色谱的处理，优选是通过阴离子交换色谱的处理。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，使在第一储集器(4)中收集的富含目标物质的馏分经由旁路管线(9)通过第二分离单元(2)的步骤和使病毒灭活溶液经由旁路管线(9)通过第二分离单元(2)的步骤是同时的，其中，将富含目标物质的馏分与病毒灭活溶液混合的步骤在第二分离单元(2)的旁路管线(9)中在线进行。5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，使在第一储集器(4)中收集的富含目标物质的馏分经由旁路管线(9)通过第二分离单元(2)的步骤和使病毒灭活溶液经由旁路管线(9)通过第二分离单元(2)的步骤是相继的，其中，将富含目标物质的馏分与病毒灭活溶液混合的步骤在第二储集器(5)中进行。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，将在第二储集器(5)中收集的富含目标物质的馏分和病毒灭活溶液的混合物在第二储集器(5)中储集至少15分钟，优选20至45分钟的持续时间，更优选地伴随着搅拌。7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述富含目标物质的馏分的病毒灭活进一步包括：
a)将在第二储集器(5)中收集的富含目标物质的馏分和病毒灭活溶液的混合物经由旁路管线(9)通过第二分离单元(2)；b)在...

【专利技术属性】
技术研发人员：热罗姆，
申请(专利权)人：诺瓦塞普设备处理公司，
类型：发明
国别省市：