一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV-1的靶基因、引物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的靶基因、引物及其应用


[0001]本专利技术属于病毒病原检测
更具体地，涉及一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
‑
1的靶基因、引物及其应用。

技术介绍

[0002]罗氏沼虾(Macrobrachiumrosenbergii)是一种原产于东南亚地区的大型淡水虾，具有生长快、食性广、肉质营养成分好以及养殖周期短等优点，自20世纪60年代开始人工养殖以来发展迅速。我国于1976年引进罗氏沼虾，目前已在广东、广西、湖南、湖北、江苏、上海、浙江等10多个省、市、自治区进行养殖，亩产可达70～100千克，经济效益可观。病害是限制罗氏沼虾养殖产业发展的重要因素，目前国内已报道的感染罗氏沼虾的病毒主要有5种，引起白斑综合征的白斑综合征病毒(white spot syndrome virus，WSSV)；引起肌肉白浊病(白尾病)的野田村病毒(MacrobrachiumRosenbergiiNodavirus，MrNV)；可能作为MrNV卫星病毒或辅助病毒的极小病毒(extra small virus
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like particles，XSV)；能感染罗氏沼虾肝胰腺上皮细胞的细小病毒样病毒(parvo
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like virus，HPV)；引起罗氏沼虾幼体综合征的一种双顺反子病毒
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罗氏沼虾太湖病毒(MacrobrachiumrosenbergiiTaihu virus，MrTV)。这些病毒目前都已建立了相应的检测方法，例如，中国专利CN 103409555A公开了一种罗氏沼虾野田村病毒RT
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LAMP
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LFD的检测试剂盒及其检测方法。
[0003]确立病原是水产疾病研究的重中之重，而随着研究的深入，越来越多的报道显示导致同种病毒性水产疾病的病原可能不只一种病毒。例如罗氏沼虾白尾病的病原为MrNV和XSV两种；又如青蟹“嗜睡症”的病原为青蟹呼肠孤病毒(mud crab reovirus，McRV)和青蟹双顺反子病毒(mud crab dicistrovirus，McDV)两种。最近还有报道称，用冷冻电镜在患病的青蟹中观察到了第三种病原
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蟹番茄矮缩病毒样病毒(McTV)的存在。而病毒的致病机制错综复杂，现有的病毒检测手段却连新病毒的检测都十分困难，水产疾病的研究对新病毒的快速检测及鉴定有着迫切需求。宏病毒组学可通过对环境中的病毒富集，测序，加以生物信息分析，初步拼接出病毒的基因组序列，并将其初步分类到各已知的病毒科属，已有多项研究表明，通过宏病毒组学方法能够得到传统方法难以发现的新病毒。
[0004]“铁壳”虾病是罗氏沼虾养殖中出现的又一重大问题，感染此症的罗氏沼虾表现为体表发黄，生长缓慢或停止生长，同时还会表现出双螯肢变蓝，变长这种性早熟的现象。2010年江苏高邮市的罗氏沼虾养殖产业受罗氏沼虾“铁壳”虾病的影响，造成了大面积严重减产。本专利技术专利技术人通过对表现出“铁壳”的罗氏沼虾体内的病毒进行富集，并通过宏基因组测序，发现了一种新的小RNA病毒，暂将其命名为(Macrobrachiumrosenbergiipicorna virus 1，MrPV
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1)。目前对该病毒的病理、传染源、传播途径和感染方式等尚无明确结论，亦无针对性治疗方法，为及时发现并对可能存在的潜在风险进行针对性处理，有必要针对病毒MrPV
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1建立准确、灵敏、特异的检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的靶基因、引物及其应用。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的靶基因。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供所述靶基因在制备检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的产品中的应用。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的引物。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供所述引物在制备检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的产品中的应用。
[0010]本专利技术的第五个目的是提供一种重组质粒。
[0011]本专利技术的第六个目的是提供一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的试剂盒。
[0012]本专利技术的上述目的通过以下技术方案实现：
[0013]本专利技术通过对十余尾感染“铁壳”虾病的罗氏沼虾体内的病毒进行富集，利用宏基因组测序，发现了一种新的小RNA病毒，暂命名为Macrobrachiumrosenbergiipicorna virus 1(MrPV
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1)，其基因组序列如SEQ ID NO.1所示。本专利技术根据测序所得基因组序列，以基因组中第11688～13171位的核苷酸序列为靶基因，设计并开发了相应的MrPV
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1的检测引物、试剂盒和方法。
[0014]本专利技术首先提供了一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的靶基因，所述靶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0015]本专利技术在所述靶基因的基础上设计的引物可检测出样本中是否存在罗氏沼虾小RNA病毒MrPV
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1，因此，本专利技术申请保护所述靶基因在制备检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的产品中的应用。
[0016]本专利技术还提供了一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的引物，所述引物用于扩增SEQ ID NO.2所示靶基因。
[0017]优选地，所述用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的引物为巢氏PCR引物，引物序列如SEQ ID NO.3～6所示，见实施例1。
[0018]优选地，所述用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的引物为荧光定量PCR引物，引物序列如SEQ ID NO.7～8所示，见实施例3。
[0019]本专利技术还提供了一种重组质粒，其含有SEQ ID NO.2所示靶基因序列。
[0020]优选地，所述重组质粒的载体为pMD
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19T，见实施例1。
[0021]本专利技术还提供了一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的试剂盒，其包含检测SEQ ID NO.2所示靶基因的试剂。
[0022]优选地，所述试剂为用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的引物。
[0023]优选地，所述试剂为用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的巢氏PCR引物，引物序列如SEQ ID NO.3～6所示。
[0024]优选地，所述试剂为用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的荧光定量PCR引物，引物序列如SEQ ID NO.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的靶基因，其特征在于，所述靶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.权利要求1所述靶基因在制备检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的产品中的应用。3.一种用于检测罗氏沼虾病毒MrPV
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1的引物，其特征在于，所述引物用于扩增权利要求1所述靶基因。4.根据权利要求3所述引物，其特征在于，所述引物为巢氏PCR引物，巢氏PCR引物的序列如SEQ ID NO.3～6所示。5.根据权利要求3所述引物，其特征在于，所述引物为荧...

【专利技术属性】
技术研发人员：何建国，缪琪瑾，翁少萍，周丹丹，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：