一种小黄鱼促生长饲料添加剂的制备、饲料添加和应用方法技术

本发明专利技术涉及水产饲料生物添加剂技术领域，具体涉及一种采用基因编辑的生物反应器蚕蛹制备的小黄鱼促生长饲料添加剂及其制备方法、饲料和应用。一种小黄鱼促生长饲料添加剂，该饲料添加剂按质量份数计包括生物反应器蚕蛹100份，所述的生物反应器蚕蛹表达有小黄鱼生长激素与转铁蛋白的融合蛋白质，该饲料添加剂还包括以下的组分：枸橼酸钠0.1

【技术实现步骤摘要】
一种小黄鱼促生长饲料添加剂的制备、饲料添加和应用方法


[0001]本专利技术涉及水产饲料生物添加剂
，具体涉及一种采用基因编辑的生物反应器蚕蛹制备小黄鱼促生长饲料添加剂及饲料添加和应用方法。

技术介绍

[0002]小黄鱼(Pseudosciaena polyactis Bleeker)，是我国4大海产经济鱼类之一，广泛分布于中国东海、黄海和渤海以及朝鲜半岛西岸的近海海域，其肉质细嫩鲜美，营养价值高，深受消费者喜爱，但受过度捕捞及海洋环境变化等影响，小黄鱼资源受到严重破坏，虽然伏季休渔制实施以来，资源有所恢复，但仍处于十分脆弱的状态。近年来，随着小黄鱼人工繁殖技术的成熟，人工养殖小黄鱼数量在逐年增加，为解决资源保护与需求矛盾提供了一个更优的解决方案。
[0003]“苗种培育、环境调节、病害防控、饲料开发”是支撑现代水产养殖业健康可持续发展的支柱，其中高效饵料研究是水产养殖增产的基础。目前尚无专门针对小黄鱼生长发育的专用饲料，随着小黄鱼营养学研究的深入，其营养需求参数正逐步完善，在专用饲料研发中，除了满足小黄鱼的营养需求外，如能开发具有促生长功能的饲料添加剂，赋予小黄鱼配合饲料更多的营养价值、保健功效和提升养殖小黄鱼养殖效益等功能，将对推动小黄鱼养殖业健康发展有着积极的作用。
[0004]大量研究显示，无论是天然生长激素还是外源表达的生长激素，通过注射、浸泡或投喂等不同的方式作用于鱼体，均能促进受体鱼的生长速度加快、食欲增强、饵料转化效率提高等。到目前为止，已在包括细菌、真菌、藻类、昆虫以及哺乳动物细胞等多种宿主中，外源表达鱼类生长激素蛋白质并进行添食试验，但由于口服活性蛋白质在肠道易被降解，蛋白质脂溶性差，难以透过肠道黏膜进入循环系统等原因，导致口服活性蛋白质的生物利用度低，促生长效果并不稳定，或存在表达质粒生物安全风险等问题，限制了外源活性蛋白质在水产中的应用。
[0005]申请人申请的中国专利技术专利(公开号：CN112159819A，公开日：20210101)公开了小黄鱼生长激素生物反应器家蚕品系的构建方法，该方法包括：(1)合成小黄鱼生长激素与转铁蛋白融合基因；(2)获得piggBAC转基因质粒pLX
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Red
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PcGH
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TF；(3)转基因质粒导入家蚕受精卵；(4)获得G1代蚕卵；(5)筛选标记基因阳性个体；(6)验证小黄鱼生长激素在家蚕中高效表达；(7)鉴定遗传稳定性；(8)建立小黄鱼生长激素生物反应器家蚕品系。申请人利用小黄鱼生长激素和转铁蛋白基因，设计了编码小黄鱼生长激素和转铁蛋白融合蛋白质的杂合基因，融合蛋白除了兼具生长激素和转铁蛋白活性外，还可提高活性蛋白质的口服生物利用度。利用家蚕转基因技术，将杂合基因导入家蚕基因组中，构建了遗传稳定、可高效表达小黄鱼促生长融合蛋白质的生物反应器家蚕新品系。通过常规蚕桑生产流程，低成本规模化生产含小黄鱼促生长活性蛋白质的蚕蛹，作为小黄鱼饲料添加剂原料。
[0006]由于水产饲料加工工艺复杂，生产条件苛刻，原料长时间处于高温、高压、高湿环境，导致活性蛋白质等热敏组分在饲料加工工程中失活；水溶性的活性蛋白质，涂布于饲料
表面后，在水中易溶失，导致在被水产动物觅食之前就溶解损失；鱼类肠道中大量存在的蛋白质水解酶，可降解失活蛋白质分子等问题。因此如何减少活性蛋白质分子变性、降解，提高活性蛋白质分子穿越肠道障碍，进入循环系统并作用于靶器官，是实现添加剂促生长效应的基础。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是针对生物反应器生产的小黄鱼促生长活性蛋白质分子，口服后在鱼肠道中吸收差，易被肠道蛋白酶降解失活，以及活性蛋白质分子不耐高温，不能在饲料制粒前添加，后喷涂易在水中溶失等问题，本专利技术的目的是提供一种小黄鱼促生长饲料添加剂。本专利技术通过筛选适合粘合剂，提高活性蛋白质和商品颗粒料的粘附，减少活性蛋白质分子在水中的溶失；筛选适合口服佐剂并确定工作浓度，以提高活性蛋白质肠道透过性，减少降解，提高添加剂生物利用度，从而实现添加剂的促生长效应。
[0008]为了实现上述的目的，本专利技术采用了以下的技术方案：
[0009]一种小黄鱼促生长饲料添加剂，该饲料添加剂按质量份数计包括生物反应器蚕蛹100份，所述的生物反应器蚕蛹表达有小黄鱼生长激素与转铁蛋白的融合蛋白质，该饲料添加剂还包括以下的组分：
[0010]枸橼酸钠
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0.1
‑
0.5份
[0011]粘合剂
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2.0
‑
10.0份。
[0012]作为优选，所述的枸橼酸钠和粘合剂的质量分数如下：
[0013]枸橼酸钠
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0.1
‑
0.3份
[0014]粘合剂
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3.0
‑
6.0份。
[0015]作为优选，所述的粘合剂选用丙烯酰胺粘合剂和/或增效多糖粘合剂。
[0016]作为优选，所述的增效多糖粘合剂选用羧甲基纤维素钠，海藻多糖，海藻酸，黄原胶和淀粉中的一种或多种混合。
[0017]作为优选，所述的小黄鱼生长激素与转铁蛋白融合基因的序列如SEQ ID No.1所示。
[0018]进一步，本专利技术还公开了所述的饲料添加剂的制备方法，该方法包括以下的步骤：
[0019]1)冷冻保存的生物反应器蚕蛹，于低温1
‑
5℃中解冻2
‑
3小时，放入组织匀浆器中匀浆制成蛹浆；
[0020]2)佐剂配制及混匀：将枸橼酸钠制备成溶液，并将蛹浆、枸橼酸钠溶液混合均匀；
[0021]3)粘合剂混匀：粘合剂粉剂与步骤2制备的混和物混合，不断搅拌直至芡浆状。
[0022]进一步，本专利技术还公开了一种小黄鱼促生长饲料，该饲料包括小黄鱼饲料颗粒料和所述的饲料添加剂，饲料添加剂粘附于小黄鱼饲料颗粒料，饲料添加剂的添加量为小黄鱼饲料颗粒料质量的0.1
‑
15.0％；优选为1.0
‑
5.0％。
[0023]进一步，本专利技术还公开了所述的饲料的制备方法，该方法包括以下的步骤：
[0024]1)冷冻保存的生物反应器蚕蛹，于低温1
‑
5℃中解冻2
‑
3小时，放入组织匀浆器中匀浆制成蛹浆；
[0025]2)佐剂配制及混匀：将枸橼酸钠制备成溶液，并将蛹浆、枸橼酸钠溶液混合均匀；
[0026]3)粘合剂混匀：粘合剂粉剂与步骤2制备的混和物混合，不断搅拌直至芡浆状；
[0027]4)称取商品颗粒料，放于搅拌锅中，开机搅拌，逐步倒入步骤3)制备的芡浆，再搅拌10
‑
15分钟，使充分拌匀；拌匀后本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小黄鱼促生长饲料添加剂，该饲料添加剂按质量份数计包括生物反应器蚕蛹100份，其特征在于，所述的生物反应器蚕蛹表达有小黄鱼生长激素与转铁蛋白的融合蛋白质，该饲料添加剂还包括以下的组分：枸橼酸钠
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1
‑
0.5份粘合剂
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2.0
‑
10.0份。2.根据权利要求1所述的一种小黄鱼促生长饲料添加剂，其特征在于，枸橼酸钠和粘合剂的质量分数如下：枸橼酸钠
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0.1
‑
0.3份粘合剂
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3.0
‑
6.0份。3.根据权利要求1或2所述的一种小黄鱼促生长饲料添加剂，其特征在于，小黄鱼生长激素与转铁蛋白融合基因的序列如SEQ ID No.1所示。4.根据权利要求1或2所述的一种小黄鱼促生长饲料添加剂，其特征在于，粘合剂选用丙烯酰胺粘合剂和/或增效多糖粘合剂。5.根据权利要求4所述的一种小黄鱼促生长饲料添加剂，其特征在于，增效多糖粘合剂选用羧甲基纤维素钠，海藻多糖，海藻酸，黄原胶和淀粉中的一种或多种混合。6.权利要求1
‑
5任意一项权利要求所述的饲料添加剂的制备方法，其特征在于，该方法包括以下的步骤：1）冷冻保存的生物反应器蚕蛹，于低温1
‑
5℃中解冻2
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【专利技术属性】
技术研发人员：翁宏飚，王彦华，沈卫锋，楼宝，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：