一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选制造技术

本发明专利技术公开了一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选。本发明专利技术借助重组蛋白技术实现BcchiA1在枯草芽孢杆菌中的高效分泌型表达，解决了大部分微生物几丁质酶分泌量不足的问题。此外，本发明专利技术涉及公开高酶活几丁质酶突变体BcchiA1(Y10A)和BcchiA1(Y10A/E327A)，酶活性比野生型BcchiA1分别提高了2.49倍、3.46倍。3.46倍。

【技术实现步骤摘要】
一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选


[0001]本专利技术涉及一株高效分泌表达环状芽孢杆菌几丁质酶重组菌的构建以及几丁质酶突变体的高通量筛选，属基因工程


技术介绍

[0002]几丁质是由N
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乙酰
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D
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葡糖胺(NAG)通过β
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1,4糖苷键连接的线性高聚物，是自然界中分布最广泛的氨基多糖，尤其作为节肢动物外骨骼以及真菌细胞壁的结构组分。几丁质具有良好的生物相容性、广谱抗菌性、无毒副作用等特性，故在生物医疗、食品、环保以及化妆品行业应用前景广阔。然而，几丁质的高结晶度和溶性差的特性对于进一步提升应用价值无疑是一个严峻挑战。
[0003]几丁寡糖，聚合度低于20，是几丁质的主要降解产物之一。因溶解度较几丁质大幅改善，因此在免疫调节、抗菌、抗肿瘤、细胞修复等方面表现突出。目前，几丁寡糖主要通过化学、物理和生物酶法三种途径降解几丁质获得。其中，生物酶法因环境友好、反应条件温和、降解过程易控、副产物少等优点备受青睐，该方法主要依靠几丁质酶完成。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种几丁质酶突变体，其特征在于，所述几丁质酶突变体的氨基酸序列在SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的第10位Tyr突变为Ala。2.根据权利要求1所述的几丁质酶突变体，其特征在于，所述几丁质酶突变体的氨基酸序列在SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的第10位Tyr突变为Ala和第327位Glu突变为Ala。3.根据权利要求1所述的几丁质酶突变体，其特征在于，所述几丁质酶突变体的核酸序列在SEQ ID No.1所示的核酸序列的第28
‑
30位tat突变为gca。4.根据权利要求3所述的几丁质酶突变体，其特征在于，所述几丁质酶突变体的核酸序列在SEQ ID No.1所示的核酸序列的第28
‑
30位tat突变为gca和第979
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981位gag突变为gca。5.一种重组表达质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：张大伟，王思佳，付刚，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：