抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术属于免疫学技术领域，尤其涉及抗人白介素

【技术实现步骤摘要】
抗人白介素
‑
10高亲和力兔单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术属于免疫学
，尤其涉及抗人白介素
‑
10高亲和力兔单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]人白介素
‑
10蛋白(简称“人白介素
‑
10”，或IL
‑
10)是一种由多种细胞产生的多功能细胞因子，在炎症反应和免疫调节中具有多种作用。IL
‑
10抑制炎症反应和细胞免疫反应，加强与适应性免疫和清除功能相关的耐受性，抑制由单核细胞和巨噬细胞产生的促炎因子。IL
‑
10具有双向调节作用，不仅影响免疫系统，而且可以通过调节生长因子、细胞因子影响许多病理生理过程，包括血管生成、肿瘤形成和感染，慢性炎性肠病、类风湿性关节炎，银屑病、HCV感染、HIV感染等，IL
‑
10都发挥着重要作用。在正常人的血清中，IL
‑
10蛋白水平较低，参考范围为(38.6
±
10.6)ng/ml。因此开发一种高灵敏度的IL
‑
10蛋白检测方法学，具有非常重要的意义。

技术实现思路

[0003]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了抗人白介素
‑
10高亲和力兔单克隆抗体及其应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。
[0004]本专利技术提供了一对结合人人白介素
‑
10蛋白的高亲和力兔单克隆抗体A和B，该抗体能够和重组表达的人人白介素
‑
10结合，也能与细胞分泌的人人白介素
‑
10，也能和人血清中的人白介素
‑
10蛋白结合。抗体A和重组表达人人白介素
‑
10结合的亲和常数为9.62X10
‑
11
M，抗体B和重组表达人人白介素
‑
10结合的亲和常数为9.68X10
‑
12
M。
[0005]本专利技术是这样实现的，抗人白介素
‑
10高亲和力兔单克隆抗体，所述兔单克隆抗体为兔单克隆抗体A或兔单克隆抗体B；
[0006]所述兔单克隆抗体A的轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；
[0007]所述兔单克隆抗体B的轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:15，SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20。
[0008]本专利技术提供的抗体，轻链恒定区为κ链，重链恒定区为IgG1型。
[0009]进一步地，所述兔单克隆抗体A轻链可变区序列为SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B轻链可变区序列为SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
[0010]进一步地，所述兔单克隆抗体A重链可变区序列为SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B重链可变区序列为SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。
[0011]进一步地，所述兔单克隆抗体A轻链序列为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B轻链序列为SEQ ID NO:11所示氨基酸。
[0012]进一步地，所述兔单克隆抗体A重链氨基酸序列为SEQ ID NO:2；所述兔单克隆抗体B重链序列为SEQ ID NO:12所示氨基酸。
[0013]本专利技术还提供了如上述的抗人白介素
‑
10高亲和力兔单克隆抗体在建立非诊断目的的人白介素
‑
10的酶联免疫检测方法中的应用。
[0014]进一步地，所述酶联免疫检测方法为双抗夹心法酶联免疫检测方法。
[0015]进一步地，所述双抗夹心法酶联免疫检测方法中，捕获抗体为兔单克隆抗体A，检测抗体为经生物素标记的兔单克隆抗体B。
[0016]本专利技术还提供了如上述的抗人白介素
‑
10高亲和力兔单克隆抗体在制备用于检测人白介素
‑
10的试剂或试剂盒中的应用。
[0017]进一步地，所述人白介素
‑
10包括重组表达的人白介素
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10，或细胞分泌的人IL
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10蛋白，或人血清中的IL
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10蛋白。
[0018]综上所述，本专利技术的优点及积极效果为：
[0019]本专利通过成功开发了一对高亲和力的抗人IL
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10蛋白兔单克隆抗体，进一步开发了一种高灵敏度和特异性针对IL
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10蛋白的双抗夹心法酶联免疫检测方法，在临床诊断和科研应用上具有重要的意义。
[0020]本专利技术中所获得抗人人白介素
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10蛋白的兔单克隆抗体A和B的亲和力，其中兔抗人人白介素
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10蛋白单克隆抗体B的亲和力达到了10
‑
12
M，为首个亲和力达到pM(10
‑
12
)级别的抗人人白介素
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10蛋白单克隆抗体。
[0021]本专利技术中所制备的抗人人白介素
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10蛋白的兔单克隆抗体A和B，通过蛋白相互作用非标技术验证证明其结合于人人白介素
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10表面的不同抗原决定簇，可以用于建立针对人人白介素
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10蛋白的双抗夹心酶联免疫检测方法。
[0022]本专利技术所提供的基于所述的抗人人白介素
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10蛋白兔单克隆抗体所建立的人人白介素
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10双抗夹心酶联免疫检测方法，捕获抗体为本专利技术中的人人白介素
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10兔单克隆抗体A，检测抗体为经生物素标记的本专利技术中的人人白介素
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10兔单克隆抗体B，标准样品为体外重组表达的人人白介素
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10蛋白，检测灵敏度为125pg/ml(125ng/L)，所建立的方法可以用于人人白介素
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10蛋白的高灵敏度检测。
[0023]本专利技术所提供的基于所述的抗人人白介素
‑
10蛋白兔单克隆抗体所建立的人人白介素
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10双抗夹心酶联免疫检测方法具有高特异性，和与人人白介素
‑
10相似的其他人白介素系列蛋白，和鼠及大鼠来源的人白介素
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10蛋白也没有交叉反应。
附图说明
[0024]图1是人IL
‑
10兔单克隆抗体A和B的亲和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗人白介素
‑
10高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体为兔单克隆抗体A或兔单克隆抗体B；所述兔单克隆抗体A的轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；所述兔单克隆抗体B的轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:15，SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20。2.根据权利要求1所述的抗人白介素
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10高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于：所述兔单克隆抗体A轻链可变区序列为SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B轻链可变区序列为SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的抗人白介素
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10高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于：所述兔单克隆抗体A重链可变区序列为SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B重链可变区序列为SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的抗人白介素
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10高亲和力兔单...

【专利技术属性】
技术研发人员：娄阳，陈嘉琛，贤加欢，彭晓旺，吴海，
申请(专利权)人：优睿赛思武汉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：