基于半导体聚合物点的高灵敏度microRNA荧光原位杂交定量标记探针及其制备方法技术

一种基于半导体聚合物点的高灵敏度microRNA荧光原位杂交定量标记探针及其制备方法，属于microRNA定量标记检测技术领域。所述的microRNA荧光原位杂交定量标记探针，由半导体聚合物点和靶标microRNA特异性反义互补序列构成；半导体聚合物点是采用半导体聚合物和功能聚合物通过纳米沉淀法在水中制备得到。功能聚合物在这里是为了调整半导体聚合物点的尺寸和表面电位，并可以用来防止半导体聚合物点在高浓度下的聚集；功能聚合物在半导体聚合物点中质量含量较低。靶标microRNA特异性反义互补序列可以根据不同的应用选择不同的特异性序列，可以通过偶联反应直接连接在半导体聚合物点的表面。聚合物点的表面。聚合物点的表面。

【技术实现步骤摘要】
基于半导体聚合物点的高灵敏度microRNA荧光原位杂交定量标记探针及其制备方法


[0001]本专利技术属于microRNA定量标记检测
，具体涉及一种基于半导体聚合物点的高灵敏度microRNA荧光原位杂交定量标记探针及其制备方法，该荧光探针适用于医学基础实验(包括细胞涂片、细胞染色、定量标记)和临床实验室检查(例如组织切片、鼻咽拭子和外分泌液)的检测。

技术介绍

[0002]MicroRNAs是一类小的非编码RNA，涉及几乎所有的遗传中心法则过程和人类生物学行为，也在多种疾病的病理活动中发挥着重要作用，如基因转录、蛋白质翻译、外泌体分泌等。疾病或癌症特异性microRNA的表达水平往往随着病情的进展呈现出规律性的变化趋势，因而在细胞或组织中设计和准确定位具有良好特异性和识别度的microRNA敏感性纳米荧光探针对癌症患者的早期诊断、个体化治疗、预后评估等都具有重大意义。
[0003]常用的microRNA检测技术主要可分为两个大类：核酸扩增法和原位标记法，在微量microRNA领域基于PCR(聚合酶链反应)的核酸扩增法应用更为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于半导体聚合物点的microRNA荧光原位杂交定量标记探针的制备方法，其步骤如下：(1)将半导体聚合物和功能聚合物溶于3～5mL四氢呋喃中，其中半导体聚合物的浓度为40～50μg/mL，功能聚合物的浓度为8～12μg/mL；然后用220nm的有机系滤头进行过滤，再在超声的情况下，将过滤后得到的混合溶液快速注射到10～20mL无核苷酸酶水中并且继续超声1～5分钟；(2)在惰性气体的保护下，将步骤(1)得到的溶液加热至85～95℃保持2～6小时除去四氢呋喃，冷却至室温后用220nm的水系滤头进行过滤除去大的颗粒，得到半导体聚合物点水溶液；通过调整初始溶液的浓度和注射体积，使制得的半导体聚合物点的尺寸为20nm～30nm；(3)将步骤(2)制得的半导体聚合物点水溶液用无核苷酸酶水将半导体聚合物点的浓度稀释至30～40ppm，取1mL稀释后的半导体聚合物点水溶液，依次加入1M、pH＝6.5的4
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羟乙基哌嗪乙磺酸水溶液20～40μL、5％质量分数的聚乙二醇水溶液20～40μL、100μM的靶标microRNA特异性反义互补序列水溶液50μL、5mg/mL的1
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(3
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二甲氨基丙基)
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乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液20μL～40μL，室温下搅拌4～6小时，使得microRNA特异性反义互补序列与半导体聚合物点发生偶联反应；之后将上述溶液盛于截留分子量100kDa的透析袋中，透析处理48～72小时，然后将透析袋中的溶液用20mM的4
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羟乙基哌嗪乙磺酸水溶液定容至1mL，即得到基于半导体聚合物点的microRNA荧光原位杂交定量标记探针。2.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹升燕，张泽，吴雨阳，孟子辉，秦伟平，佘萍，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：