用于检测脂肪分解活性的组合物、方法和试剂盒技术

本公开内容提供了用于检测脂肪分解活性的组合物、方法和试剂盒。在一些实施例中，该组合物包含水性测定样品和有机溶剂，其中有机溶剂包含4

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测脂肪分解活性的组合物、方法和试剂盒


[0001]本公开提供了用于检测和/或量化脂肪分解活性的组合物、方法和试剂盒。本文还提供了确定蛋白质制剂稳定性的方法。在一些实施例中，用于检测脂肪分解活性的组合物包含水性测定样品和有机溶剂，其中该有机溶剂包含4
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甲基伞形酮油酸酯(4MuO)。

技术介绍

[0002]细胞培养物可用于生成商业上重要的蛋白质，如治疗性蛋白质。除了靶蛋白质，细胞还产生宿主细胞蛋白质(HCPs)，例如脂肪酶，它们可以在靶蛋白质的生产池中找到，例如细胞培养上清液或细胞裂解液。可以包含各种色谱步骤(例如，在单克隆抗体生产的情况下的亲和色谱)的下游纯化过程通常能够除去绝大多数的HCP。然而，由于分离和纯化方法的自然原则，即基于平衡，可能无法100％除去HCP。工业和卫生当局接受的HCP限制在相对于活性蛋白质的量～1
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100ppm。HCP通常借助于酶联免疫吸附测定(ELISA)作为总参数进行测量和报告，如例如USP<1132>中所述，因此，这些通常包含一系列不同浓度的不同宿主来源的蛋白质。用ELISA方法量化的总HCP含量相同的药物物质可能有不同的HCP概况。这可能导致的情况是，轻微的工艺变化导致低浓度的特定HCP，如脂肪酶的增加，该增加应用总HCP测定可能无法检测到。因此，小部分的HCP可能存在于最终的蛋白质产品中，并且可能具有催化活性。残留的催化活性可能对产品质量具有有害影响，如赋形剂，例如表面活性剂，如聚山梨酯的稳定性，并最终对蛋白质产品的稳定性、质量和安全性具有有害影响。如果蛋白质是治疗性蛋白质，尤其是用于人类的治疗性蛋白质，则最小化或消除这些有害影响可能是最重要的。
[0003]蛋白质制剂中残留的脂肪酶活性，例如，由于在靶蛋白质的下游纯化过程期间的次优去除，可能导致一些赋形剂，例如表面活性剂的水解。后果可能包含，例如由于非极性的并且因此是不溶性的长链脂肪酸和其他降解剂从表面活性剂中释放出来导致的次可见和可见颗粒的形成，以及表面活性剂提供的稳定作用的丧失。表面活性剂降解也可能对蛋白质量具有不利影响，例如，产生导致蛋白质降解的过氧化物，或产生诱发蛋白质聚集的月桂酸。表面活性剂的降解也降低了它们在调配物中的浓度，有可能造成对蛋白质的保护不足，例如，对界面应力(例如摇动、冷冻/解冻等)的保护，并且也导致产品的安全性考虑的潜在差异，例如，由于降解的表面活性剂而导致的不同的体内责任。因此，由于赋形剂的水解，残留的脂肪酶活性可能导致最终蛋白质制剂的质量受到影响。赋形剂的降解产物，如例如聚山梨酯，也会给患者带来安全问题，如注射部位反应(参见例如，Singh等人，《药物科学杂志(J Pharm Sci)》107(11):2735
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2741(2018))。

技术实现思路

[0004]在一些实施例中，本公开提供了一种组合物，其包含：(a)包含蛋白质制剂的水性测定样品；和(b)有机溶剂，其中该有机溶剂进一步包含4
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甲基伞形酮油酸酯(4MuO)；其中该水性测定样品的pH为5.0至7.0；以及其中该水性测定样品为该组合物的约80％至约
99.9％，并且该有机溶剂为该组合物的约0.1％至约20％。
[0005]在一些实施例中，蛋白质制剂是细胞培养上清液。在一些实施例中，蛋白质制剂是部分纯化的蛋白质制剂。在一些实施例中，蛋白质制剂是纯化的蛋白质制剂。
[0006]在一些实施例中，蛋白质制剂包含治疗性蛋白质。
[0007]在一些实施例中，蛋白质制剂包含表面活性剂。在一些实施例中，表面活性剂是聚山梨酯。在一些实施例中，聚山梨酯是聚山梨酯
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20、聚山梨酯
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80或其组合。
[0008]在一些实施例中，蛋白质制剂进一步包含额外的宿主细胞蛋白质。
[0009]在一些实施例中，水性测定样品进一步包含缓冲剂、盐或两者。
[0010]在一些实施例中，盐是氯化钠、氯化钙或其组合。在一些实施例中，盐是氯化钠和氯化钙。在一些实施例中，氯化钠在水性测定样品中为约50mM至约400mM。在一些实施例中，氯化钠在水性测定样品中为约100mM至约200mM。在一些实施例中，氯化钙在水性测定样品中为约0.2mM至约10mM。在一些实施例中，氯化钙在水性测定样品中为约1.0mM至约2.0mM。
[0011]在一些实施例中，缓冲剂在约pH 6.0时具有缓冲能力。在一些实施例中，缓冲剂是Tris。在一些实施例中，缓冲剂是Bis
‑
Tris。在一些实施例中，缓冲剂在水性测定样品中为约2mM至约200mM。在一些实施例中，缓冲剂在水性测定样品中为约10mM至约100mM。在一些实施例中，缓冲剂在水性测定样品中为约40mM至约60mM。在一些实施例中，缓冲剂在水性测定样品中为约45mM至约55mM。
[0012]在一些实施例中，有机溶剂是醇、亚砜、腈或其组合。在一些实施例中，有机溶剂是二甲亚砜(DMSO)。在一些实施例中，有机溶剂包含乙腈。
[0013]在一些实施例中，有机溶剂包含醇。在一些实施例中，有机溶剂包含乙腈和异丙醇的混合物。在一些实施例中，有机溶剂是C1‑
C6醇。在一些实施例中，有机溶剂是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、仲丁醇、异丁醇、叔丁醇，或其组合。
[0014]在一些实施例中，组合物进一步包含脂肪酶抑制剂。在一些实施例中，脂肪酶抑制剂是(S)
‑2‑
甲酰氨基
‑4‑
甲基
‑
戊酸(S)
‑1‑
[[(2S,3S)
‑3‑
己基
‑4‑
氧代
‑2‑
氧杂环丁烷基]甲基]‑
十二烷基酯(奥利司他)。
[0015]在一些实施例中，脂肪酶抑制剂在有机溶剂中。在一些实施例中，脂肪酶抑制剂在组合物中为约1μM至约50μM。在一些实施例中，脂肪酶抑制剂在组合物中为约5μM至约25μM。
[0016]在一些实施例中，本公开提供了一种组合物，其包含：(a)水性测定样品，所述水性测定样品包含(i)纯化的蛋白质制剂；(ii)缓冲剂；和(iii)盐；以及(b)有机溶剂，其中该有机溶剂进一步包含4
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甲基伞形酮油酸酯(4MuO)；其中该水性测定样品的pH为5.0至7.0；并且其中该水性测定样品为该组合物的约80％至约99.9％，其中该有机溶剂为该组合物的约0.1％至约20％。
[0017]在一些实施例中，本公开提供了一种组合物，其包含：(a)约90％至约99.9％(vol/vol)的水性测定样品，所述水性测定样品包含(i)包含蛋白质和脂质的纯化蛋白质制剂；(ii)缓冲剂；(iii)约1.0mM至约2.0mM氯化钙；和(iv)约100mM至约200mM氯化钠；和(b)约10％至约0.1％(vol/vol)的有机溶剂，该有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、仲丁醇、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，其包含：a.包含蛋白质制剂的水性测定样品；和b.有机溶剂，其中所述有机溶剂进一步包含4
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甲基伞形酮油酸酯(4MuO)；其中所述水性测定样品的pH为5.0至7.0；并且其中所述水性测定样品为所述组合物的约80％至约99.9％，并且所述有机溶剂为所述组合物的约0.1％至约20％。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述蛋白质制剂是细胞培养上清液。3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述蛋白质制剂是部分纯化的蛋白质制剂。4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述蛋白质制剂是纯化的蛋白质制剂。5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述蛋白质制剂包含治疗性蛋白质。6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述蛋白质制剂包含表面活性剂。7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述表面活性剂是聚山梨酯。8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述聚山梨酯是聚山梨酯
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20、聚山梨酯
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80或其组合。9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述蛋白质制剂进一步包含额外的宿主细胞蛋白质。10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述水性测定样品进一步包含缓冲剂、盐或两者。11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述盐是氯化钠、氯化钙或其组合。12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述盐是氯化钠和氯化钙。13.根据权利要求11或12所述的组合物，其中所述氯化钠在所述水性测定样品中为约50mM至约400mM。14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述氯化钠在所述水性测定样品中为约100mM至约200mM。15.根据权利要求11至14中任一项所述的组合物，其中所述氯化钙在所述水性测定样品中为约0.2mM至约10mM。16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述氯化钙在所述水性测定样品中为约1.0mM至约2.0mM。17.根据权利要求10至16中任一项所述的组合物，其中所述缓冲剂在约pH 6.0时具有缓冲能力。18.根据权利要求10至16中任一项所述的组合物，其中所述缓冲剂是Tris。19.根据权利要求10至16中任一项所述的组合物，其中所述缓冲剂是Bis
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Tris。20.根据权利要求10至19中任一项所述的组合物，其中所述缓冲剂在所述水性测定样品中为约2mM至约200mM。21.根据权利要求20所述的组合物，其中所述缓冲剂在所述水性测定样品中为约10mM至约100mM。22.根据权利要求21所述的组合物，其中所述缓冲剂在所述水性测定样品中为约40mM至约60mM。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的组合物，其中所述有机溶剂是醇、亚砜、腈或其组合。24.根据权利要求23所述的组合物，其中所述有机溶剂是二甲亚砜(DMSO)。25.根据权利要求23所述的组合物，其中所述有机溶剂包含乙腈。26.根据权利要求23所述的组合物，其中所述有机溶剂包含醇。27.根据权利要求23所述的组合物，其中所述有机溶剂包含乙腈和异丙醇的混合物。28.根据权利要求23所述的组合物，其中所述有机溶剂是C1‑
C6醇。29.根据权利要求28所述的组合物，其中所述有机溶剂是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、仲丁醇、异丁醇、叔丁醇，或其组合。30.根据权利要求1至29中任一项所述的组合物，其中所述组合物进一步包含脂肪酶抑制剂。31.根据权利要求30所述的组合物，其中所述脂肪酶抑制剂是(S)
‑2‑
甲酰氨基
‑4‑
甲基
‑
戊酸(S)
‑1‑
[[(2S,3S)
‑3‑
己基
‑4‑
氧代
‑2‑
氧杂环丁烷基]甲基]
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十二烷基酯(奥利司他)。32.根据权利要求30或31所述的组合物，其中所述脂肪酶抑制剂在所述有机溶剂中。33.根据权利要求30至32中任一项所述的组合物，其中所述脂肪酶抑制剂在所述组合物中为约1μM至约50μM。34.根据权利要求33所述的组合物，其中所述脂肪酶抑制剂在所述组合物中为约5μM至约25μM。35.一种组合物，其包含：a.水性测定样品，所述水性测定样品包含i.纯化的蛋白质制剂；ii.缓冲剂；和iii.盐；和b.有机溶剂，其中所述有机溶剂进一步包含4
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甲基伞形酮油酸酯(4MuO)；其中所述水性测定样品的pH为5.0至7.0；并且其中所述水性测定样品为所述组合物的约80％至约99.9％，并且其中所述有机溶剂为所述组合物的约0.1％至约20％。36.一种组合物，其包含：a.约90％至约99.9％(vol/vol)的水性测定样品，所述水性测定样品包含i.包含蛋白质和脂质的纯化的蛋白质制剂；ii.缓冲剂；iii.约1.0mM至约2.0mM的氯化钙；和iv.约100mM至约200mM的氯化钠；以及b.约10％至约0.1％(vol/vol)的有机溶剂，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、仲丁醇、异丁醇、叔丁醇、二甲亚砜(DMSO)、乙腈，或其组合，进一步包含4
‑
甲基伞形酮油酸酯(4MuO)；其中所述水性测定样品的pH为5.0至7.0。37.一种检测水性测定样品中脂肪分解活性的方法，所述方法包括
a.将包含蛋白质制剂的水性测定样品与包含4
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甲基伞形酮油酸酯(4MuO)的有机溶剂组合；和b.通过荧光测量油酸酯和4
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甲基伞形酮(4Mu)的形成。38.一种检测水性测定样品中脂肪分解活性的方法，所述方法包括a.将包含蛋白质制剂的水性测定样品与包含4
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甲基伞形酮油酸酯(4MuO)的有机溶剂组合以形成测定组合物；b.将包含蛋白质制剂和脂肪酶抑制剂的对照样品与包含4
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甲基伞形酮油酸酯(4MuO)的有机溶剂组合以形成对照组合物；和c.通过荧光测量所述测定组合物和所述对照组合物中油酸酯和4
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甲基伞形酮(4Mu)的形成。39.一种确定蛋白质制剂稳定性的方法，其包括a.将包含蛋白质制剂的水性测定样品与包含4
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甲基伞形酮油酸酯(4MuO)的有机溶剂组合；b.通过荧光测量油酸酯和4
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甲基伞形酮(4Mu)的形成；和c.根据测量的荧光确定所述蛋白质制剂的稳定性。40.根据权利要求37至39中任一项所述的方法，其中所述水性测定样品的pH为5.0至7.0。41.根据权利要求37至40中任一项所述的方法，其中所述水性测定样品和所述有机溶剂以约80:20至约...

【专利技术属性】
技术研发人员：汉斯克里斯蒂安，
申请(专利权)人：隆萨有限公司，
类型：发明
国别省市：