一种拟南芥csn5a/csn5b双突变体的培育鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种拟南芥csn5a/csn5b双突变体的培育鉴定方法，属于分子育种和生物技术领域。包括以下步骤：1)获取拟南芥csn5a、csn5b单突变体种子；2)种子消毒并接种于1/2MS培养基培养至萌发；3)采集拟南芥叶片提取DNA，利用LP和RP，LBb1.3和RP组合的双引物法，进行PCR扩增，鉴定csn5a纯合突变体、csn5b纯合突变体；4)收集种子，重复步骤2)和3)，扩繁后获得稳定的纯合突变体M2代，进行正反向遗传杂交；5)收集F1代种子，重复步骤2)和3)，鉴定csn5a/csn5b双突变体。本申请操作简单，重复性好，效率高，成本低。本低。本低。

【技术实现步骤摘要】
一种拟南芥csn5a/csn5b双突变体的培育鉴定方法


[0001]本专利技术属于分子育种和生物
，具体涉及一种拟南芥csn5a/csn5b双突变体的培育鉴定方法。

技术介绍

[0002]拟南芥(Arabidopsis thaliana)属于十字花科(Crucifer)拟南芥属(Arabidopsis)，为两性花，雌雄同花(hermaphroditism)，典型的自花授粉植物，也是重要的模式树种，具有个体小、生殖周期短、种子量大等特点。此外，拟南芥基因组大小适中，基因纯合度高，且存在丰富的突变体材料，是开展植物功能基因组研究的理想材料。在拟南芥中鉴定T
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DNA/转座子插入突变一直是功能基因组学研究的热点，使用特定引物定向PCR识别基因两个插入突变，通过基因分型确定不会导致致命性或不育症的纯合突变株。
[0003]拟南芥中研究近三十年的“明星基因”COP9(COP9 signalosome，简称CSN)最初由耶鲁大学邓兴旺实验室在黑暗下筛选拟南芥组成型光形态建成表型的突变体时发现的。CSN多功能性体现在应对外源刺本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种拟南芥csn5a/csn5b双突变体的培育鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)获取拟南芥csn5a、csn5b单突变体种子；2)种子消毒，接种于1/2MS培养基，培养至萌发，将萌发的幼苗移栽到营养土基质中生长，直至拟南芥莲座叶长大；3)采集拟南芥叶片提取总DNA，以提取的DNA为模板，利用LP和RP，LBb1.3和RP组合的双引物法，进行PCR扩增，鉴定T
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DNA插入csn5a纯合突变体、T
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DNA插入csn5b纯合突变体；T
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DNA特异引物LBb1.3的引物的核苷酸序列为：5
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ATTTTGCCGATTTCGGAAC
‑3’
；csn5a的LP引物的核苷酸序列为：5
’‑
AGACCCATGATCTCGATTGTG
‑3’
；csn5a的RP引物的核苷酸序列为：5
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TGGATGTAGGACCTGAATGTTG
‑3’
；csn5b的LP引物的核苷酸序列为：5
’‑
TGGATGT AGGACCTGAATGTTG
‑3’
；csn5b的RP引物的核苷酸序列为：5
’‑
CATTACCCAGCAGTGGAGAA
‑3’
；LP和RP组合引物扩增野生型基因组，LBb1.3和RP组合引物扩增T
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DNA插入，当LBb1.3和RP组合引物扩增产物有条带而LP和RP组合引物扩增产物无条带，则判断为T
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DNA插入csn5a纯合突变体或T
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DNA插入csn5b纯合突变体；4)对鉴定出的csn5a纯合突变体与csn5b纯合突变体成熟后收集种子，重复步骤2)和3)，扩繁后获得稳定的纯合突变体M2代，以csn5a纯合突变体作为母本，csn5b纯合突变体作为父本或者csn5b纯合突变体作为母本，csn5a纯合突变体作为父本杂交，进行正反向遗传杂交；5)待杂交成功的角果成熟后，收集F1代种子，重复步骤2)和3)，鉴定csn5a/csn5b双突变体，当同时具备csn5a纯合突变体与csn5b纯合突变体的扩增产物结果时，为拟南芥csn5a/csn5...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆静，陈赢男，尹佟明，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：