用透明质酸增强AAV介导的眼组织转导制造技术

本文公开了rAAV颗粒的组合物和用于施用具有增强的转导特性的rAAV颗粒的方法。具有增强的转导特性的rAAV颗粒的方法。具有增强的转导特性的rAAV颗粒的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用透明质酸增强AAV介导的眼组织转导
[0001]关于联邦资助研究的声明
[0002]本专利技术是在政府支持下完成的，由美国国立卫生研究院授予的授权号为EY024280。政府对本专利技术享有一定的权利。
[0003]相关申请
[0004]本申请要求于2019年6月27日提交的美国临时申请号62/867,596的权益，其通过引用整体并入本文。
[0005]专利技术背景
[0006]通过使用病毒来递送治疗性遗传物质，已经实现了基因疗法领域的重大进展。由于其低免疫原性和有效转导非分裂细胞的能力，腺相关病毒(AAV)作为高效的基因疗法的病毒载体吸引了相当大的关注。已经证明AAV可以感染多种细胞和组织类型，并且在过去十年中取得了重大进展以使这种病毒系统适用于人基因疗法。这十年来，眼组织的AAV治疗一直是许多研究的重点，并且最近FDA已经批准少数AAV疗法用于患者。
[0007]专利技术概述
[0008]本文描述了将货物(cargo)递送至受试者的眼的方法。在一些实施方案中，受试者有此需要。在一些实施方案中，该方法包括向受试者的眼施用rAAV颗粒。在一些实施方案中，rAAV颗粒包含(a)与透明质酸(HA)混合的衣壳和(b)货物。在一些实施方案中，rAAV颗粒包含(a)与透明质酸(HA)混合的衣壳和(b)货物中的一种或两种。在一些实施方案中，货物递送至眼。在一些实施方案中，HA与rAAV颗粒衣壳直接接触。在一些实施方案中，rAAV衣壳至少部分地经HA包被。这些方法可以用于几种眼部疾病的基于基因疗法的治疗。在一些实施方案中，经玻璃体内施用rAAV颗粒。在一些实施方案中，衣壳包含一个或多个表面暴露的带正电荷残基的贴片(patch)。在一些实施方案中，衣壳的血清型是rAAV2或其变体。在一些实施方案中，衣壳的血清型是rAAV6或其变体。在一些实施方案中，该方法进一步包括在施用rAAV颗粒至眼之前将衣壳与HA预温育。在一些实施方案中，衣壳与包含HA的缓冲液预温育。在一些实施方案中，缓冲剂包含浓度为0.1％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.6％、0.75％或1.0％重量/体积的HA。在一些实施方案中，rAAV颗粒以约1x10
10 vg/ml、5x10
10 vg/ml、1x10
11 vg/ml、5x10
11 vg/ml、1x10
12 vg/ml、2x10
12 vg/ml、3x10
12 vg/ml、4x10
12 vg/ml、约5x10
12 vg/ml、约1x10
13 vg/ml或约5x10
13 vg/ml的滴度施用至受试者的眼。在一些实施方案中，rAAV颗粒以小于5x10
11 vg/ml的滴度施用至受试者的眼。在一些实施方案中，货物包括包含异源核酸序列的多核苷酸。在一些实施方案中，异源核酸序列可操作地连接至调节序列，该调节序列指导异源核酸序列在感光细胞、视网膜色素上皮细胞、视网膜神经节细胞、双极细胞、M
ü
ller胶质细胞或星形胶质细胞中的表达。在一些实施方案中，调节序列选自下组：土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)、多腺苷酸化信号序列、内含子/外显子连接/剪接信号及其任何组合。在一些实施方案中，异源核酸序列编码治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂是神经营养因子。在一些实施方案中，神经营养因子选自下组：脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养蛋白
‑
3、睫状神经营养因子(CNTF)、肝配蛋白、胶质细胞系源神经营养因子(GDNF)及其组合。在一些实施方案
中，治疗剂是光遗传学致动器(optogenetic actuator)。在一些实施方案中，光遗传学致动器选自下组：细菌视紫红质、嗜盐菌视紫红质、通道视紫红质、微生物感觉视紫红质、哺乳动物视紫红质、锥视蛋白、视黑蛋白及其组合。在一些实施方案中，施用货物以治疗下组的疾病：视网膜色素变性、勒伯尔氏先天性黑矇、年龄相关性黄斑变性(AMD)、湿性AMD、干性AMD、葡萄膜炎、best病、stargardt病、usher综合征、地图状萎缩、糖尿病性视网膜病、视网膜劈裂、色盲、无脉络膜、bardet biedl综合征、糖原贮积病及其组合。在一些实施方案中，rAAV颗粒包含AAV7m8、AAV
‑
DJ、AAV2/2
‑
MAX、AAVSHh10、AAVSHh10Y、AAV3、AAV3b或AAVLK03衣壳。在一些实施方案中，衣壳序列与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。
[0009]在某些实施方案中，本文描述了包括将rAAV颗粒与透明质酸共同施用的方法。在一些实施方案中，具有透明质酸的rAAV颗粒通过玻璃体内注射施用至哺乳动物的一只或两只眼。在一些实施方案中，AAV颗粒包含衣壳，该衣壳包含一个或多个表面暴露的带正电荷残基的贴片。在一些实施方案中，衣壳的血清型是AAV2或其变体。在一些实施方案中，衣壳的血清型是AAV6或其变体。在一些实施方案中，rAAV颗粒包含AAV7m8、AAV
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DJ、AAV2/2
‑
MAX、AAVSHh10、AAVSHh10Y、AAV3、AAV3b或AAVLK03衣壳。在一些实施方案中，rAAV颗粒的衣壳在施用至哺乳动物的一只或两只眼之前与透明质酸(HA)预温育。在一些实施方案中，衣壳与包含HA的缓冲液预温育。在一些实施方案中，衣壳与HA预温育至少约5分钟、约15分钟、约30分钟、约45分钟、约60分钟或约75分钟的持续时间。在一些实施方案中，衣壳预温育约15分钟的持续时间。在一些实施方案中，衣壳与浓度为至少约0.1％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.6％、0.75％、1.0％、1.5％、2.5％、3.0％、3.5％、4％、5％或10％重量/体积的HA预温育。在一些实施方案中，rAAV颗粒以约1x10
10 vg/ml、5x10
10 vg/ml、1x10
11 vg/ml、5x10
11 vg/ml、1x10
12 vg/ml、2x10
12 vg/ml、3x10
12 vg/ml、4x10
12 vg/ml、约5x10
12
vg/ml、约1x10
13 vg/ml或约5x10
13 vg/ml的滴度施用。在一些实施方案中，rAAV颗粒以小于5x10
11 vg/ml的滴度施用。在一些实施方案中，玻璃体内注射以约200μL、约175μL、约本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.将货物(cargo)递送至受试者的眼的方法，所述方法包括向所述受试者的眼施用rAAV颗粒，所述颗粒包含：(a)与透明质酸(HA)混合的衣壳和(b)货物，其中所述货物递送至所述眼。2.权利要求1所述的方法，其中所述衣壳包含一个或多个表面暴露的带正电荷的氨基残基的贴片(patch)。3.权利要求1或2所述的方法，其中所述衣壳的血清型是AAV2或其变体。4.权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述衣壳包含在如SEQ ID NO:2中所示的野生型AAV2衣壳的氨基酸残基处的非天然氨基酸取代，其中所述非天然氨基酸取代包括Y272F、Y444F、T491V、Y500F、Y700F、Y704F或Y730F中的一种或多种。5.权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述衣壳是AAV2G9衣壳。6.权利要求1或2所述的方法，其中所述衣壳包含如SEQ ID NO:2中所示的野生型AAV2衣壳的非天然氨基酸取代，其中所述非天然氨基酸取代包括：(a)Y444F；(b)Y444F+Y500F+Y730F；(c)Y272F+Y444F+Y500F+Y730F；(d)Y444F+Y500F+Y730F+T491V；或(e)Y272F+Y444F+Y500F+Y730F+T491V，或在如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10中分别所示的野生型AAV1、AAV3、AAV4、AAV5、AAV7、AAV9或AAV10衣壳蛋白中的任一种中与其对应的等同氨基酸位置处。7.权利要求1或2所述的方法，其中所述衣壳的血清型是AAV6或其变体。8.权利要求1、2和7中任一项所述的方法，其中所述衣壳包含在如SEQ ID NO:6中所示的野生型AAV6衣壳的氨基酸残基处的非天然氨基酸取代，其中所述非天然氨基酸取代包括Y445F、Y705F、Y731F、T492V和S663V中的一种或多种。9.权利要求1
‑
3和7中任一项所述的方法，其中所述衣壳包含如SEQ ID NO:6中所示的野生型AAV6衣壳的非天然氨基酸取代，其中所述非天然氨基酸取代包括：(a)Y445F；(b)Y705F+Y731F；(c)T492V；(d)Y705F+Y731F+T492V；(e)S663V；或(f)S663V+T492V。10.权利要求1或2所述的方法，其中所述衣壳选自由AAV7m8衣壳、AAV
‑
DJ衣壳、AAV2/2
‑
MAX衣壳、AAVSHh10衣壳和AAVSHh10Y衣壳组成的组。11.权利要求1或2所述的方法，其中所述衣壳选自由AAV3衣壳、AAV3b衣壳和AAVLK03衣壳组成的组。12.权利要求1或2所述的方法，其中所述衣壳包含在如SEQ ID NO:1中所示的野生型AAV1衣壳的氨基酸残基531处的非天然氨基酸取代，其中所述非天然氨基酸取代是E531K。13.权利要求1或2所述的方法，其中所述衣壳是AAV7BP2衣壳。
14.权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述衣壳包含在如SEQ ID NO:8中所示的野生型AAV8衣壳的氨基酸残基533和/或733处的非天然氨基酸取代，其中所述非天然氨基酸取代是E533K和/或Y733F。15.权利要求1
‑
14中任一项所述的方法，其中在所述施用步骤之前将所述衣壳与所述HA预温育。16.权利要求1
‑
15中任一项所述的方法，其中所述衣壳与包含所述HA的缓冲液预温育。17.权利要求15
‑
16中任一项所述的方法，其中所述衣壳与所述HA预温育约5分钟、约15分钟、约30分钟、约45分钟、约60分钟或约75分钟的持续时间。18.权利要求17所述的方法，其中所述衣壳预温育约15分钟的持续时间。19.权利要求15
‑
18中任一项所述的方法，其中所述衣壳与浓度为0.1％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.6％、0.75％或1.0％重量/体积的所述HA预温育。20.权利要求1
‑
19中任一项所述的方法，其中所述rAAV颗粒以约1x10
10
vg/ml、5x10
10
vg/ml、1x10
11
vg/ml、5x10
11
vg/ml、1x10
12
vg/ml、2x10
12
vg/ml、3x10
12
vg/ml、4x10
12
vg/ml、约5x10
12
vg/ml、约1x10
13
vg/ml或约5x10
13
vg/ml的滴度施用至所述受试者的眼。21.权利要求1
‑
20中任一项所述的方法，其中所述rAAV颗粒以小于5x10
11
vg/ml的滴度施用至所述受试者的眼。22.权利要求1
‑
22中任一项所述的方法，其中所述rAAV颗粒通过玻璃体内注射施用。23.权利要求22所述的方法，其中所述玻璃体内注射以约200μL、约175μL、约160μL、约145μL、约130μL、约115μL、约100μL、约90μL、约80μL、约70μL、约60μL、约55...

【专利技术属性】
技术研发人员：SE博耶，SL博耶，
申请(专利权)人：佛罗里达大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：