具有选择性可切割接头的双特异性结合构建体制造技术

描述了具有蛋白酶可切割接头的双特异性结合构建体的新形式及其制备方法。此外，还描述了在治疗性适应症中的用途。述了在治疗性适应症中的用途。述了在治疗性适应症中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有选择性可切割接头的双特异性结合构建体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年6月7日提交的美国临时申请号62/858,509和2019年6月7日提交的美国临时申请号62/858,630的优先权。出于所有目的，上述申请各自通过引用并入本文。
[0003]序列表的引用
[0004]本申请含有已经以ASCII格式电子递交的序列表并且该序列表特此通过引用以其全文并入。创建于2020年6月4日的所述ASCII副本名为A
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2406
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WO
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PCT_SL.txt且大小为164,621字节。


[0005]本专利技术属于蛋白质工程领域。

技术介绍

[0006]近年来，双特异性结合构建体已显示出治疗前景。例如，以双特异性T细胞衔接子形式靶向CD3和CD19两者的双特异性结合构建体在低剂量下显示出令人印象深刻的功效。Bargou等人(2008),Science[科学]321:974
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978。此形式包含通过柔性接头连接的两种scFv，其中一种靶向CD3，另一种靶向肿瘤抗原CD19。此独特的设计允许双特异性结合构建体使活化的T细胞接近靶细胞，导致靶细胞的细胞溶解性杀伤。参见例如，WO 99/54440A1(美国专利号7,112,324 B1)和WO 2005/040220(美国专利申请公开号2013/0224205A1)。后来的发展是与CD3∈链的N
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末端处的背景独立表位(context independent epitope)结合的双特异性结合构建体(参见WO 2008/119567；美国专利申请公开号2016/0152707A1)。
[0007]在生物制药工业中，分子会在接受治疗的患者中表现出不希望的、有害的副作用，特别是药物在施用于患者后具有活性的情况下。例如，在小分子药物中，这些副作用可以通过施用一旦代谢就变得有活性的无活性前药来最小化。介导细胞的细胞毒性的双特异性结合构建体会表现出这些不希望的副作用中的一些。因此，在本领域中需要具有有利的药代动力学特性及治疗功效以及提供有效的生产、增加的稳定性和最小化的副作用的形式的双特异性治疗剂。

技术实现思路

[0008]本文描述了双特异性结合构建体的几种新的形式。在一个实施例中，本专利技术提供了双特异性结合构建体，该双特异性结合构建体包含含有具有式VH1
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L1
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VH2
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L2
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VL1
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L3
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VL2的氨基酸序列的多肽链，其中VH1和VH2包含免疫球蛋白重链可变区，VL1和VL2包含免疫球蛋白轻链可变区，并且L1、L2和L3是接头，其中L1为至少10个氨基酸、L2为至少15个氨基酸、并且L3为至少10个氨基酸，其中L1或L3包含蛋白酶切割位点，并且其中该双特异性结合构建体可以与免疫效应细胞和靶细胞结合。
[0009]在另一个实施例中，本专利技术提供了双特异性结合构建体，该双特异性结合构建体包含含有具有式VH1
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L1
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Fc
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L2
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VH2
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L3
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VL1
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L4
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Fc
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L5
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VL2的氨基酸序列的多肽链，其中VH1和VH2包含免疫球蛋白重链可变区，VL1和VL2包含免疫球蛋白轻链可变区，Fc包含免疫球蛋白重链恒定结构域
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2和免疫球蛋白重链恒定结构域
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3，并且L1、L2、L3、L4、和L5是接头，其中L1为至少10个氨基酸、L2为至少10个氨基酸、L3为至少15个氨基酸、L4为至少10个氨基酸、并且L5为至少10个氨基酸，并且其中L1、L2、L4和L5进一步包含至少5个氨基酸的蛋白酶切割位点，并且其中该双特异性结合构建体可以与免疫效应细胞和靶细胞结合。
[0010]在另外的实施例中，本专利技术提供了编码本文所述的双特异性结合构建体的核酸，和包含这些核酸的载体。此外，本专利技术提供了包含本文所述的载体的宿主细胞。
[0011]在又其他实施例中，本专利技术提供了制造本文所述的双特异性结合构建体的方法，该方法包括(1)在表达双特异性结合构建体的条件下培养宿主细胞，以及(2)从细胞团或细胞培养上清液中回收双特异性结合构建体，其中该宿主细胞包含编码本文所述的双特异性结合构建体中的任一种的一种或多种核酸。
[0012]在其他实施例中，本专利技术提供了治疗癌症患者的方法，该方法包括向该患者施用治疗有效量的本文所述的双特异性结合构建体。
[0013]在其他实施例中，本专利技术提供了治疗患有感染性疾病的患者的方法，该方法包括向该患者施用治疗有效量的本文所述的双特异性结合构建体。
[0014]在其他实施例中，本专利技术提供了治疗患有自身免疫性、炎性、或纤维化病症的患者的方法，该方法包括向该患者施用治疗有效量的本文所述的双特异性结合构建体。
[0015]在另一个实施例中，本专利技术提供了包含本文所述的双特异性结合构建体的药物组合物。
附图说明
[0016]图1.HHLL形式A和B的示例性实施例的代表图，其指示蛋白酶切割位点、半胱氨酸钳、以及任选的CD3∈(对于形式A和B)和scFc部分(对于形式A)的位置。
[0017]图2.HHLL形式C和D的示例性实施例的代表图，并且指示蛋白酶切割位点、半胱氨酸钳、以及任选的CD3∈(对于形式C)、任选的HSA
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CD3
a.a 1
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6或1
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27
(对于形式D)、和scFc部分(对于形式C和D)的位置。
[0018]图3.HHLL形式E的示例性实施例的代表图，其指示蛋白酶切割位点、半胱氨酸钳、以及任选的scFc
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CD3∈部分的位置。
[0019]图4.指示双特异性构建体N4J的正确表达的色谱读数。
[0020]图5.指示双特异性构建体N7A的正确表达的色谱读数和SDS
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PAGE。
[0021]图6.指示双特异性构建体V1E(但分子量低于预期)的表达的色谱读数和SDS
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PAGE。
[0022]图7.指示双特异性构建体B1U的正确表达的色谱读数和SDS
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PAGE。
[0023]图8.指示双特异性构建体Z9P的正确表达的色谱读数和SDS
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PAGE。
[0024]图9.指示双特异性构建体O7H的正确表达的色谱读数和SDS
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PAGE。
[0025]图10.指示双特异性构建体W9A的正确表达的色谱读数和SDS
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PAGE。
[0026]图11.指示双特异性构建体B2P的正确表达的色谱读数本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双特异性结合构建体，该双特异性结合构建体包含含有具有式VH1
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L1
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VH2
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L2
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VL1
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L3
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VL2的氨基酸序列的多肽链，其中VH1和VH2包含免疫球蛋白重链可变区，VL1和VL2包含免疫球蛋白轻链可变区，并且L1、L2和L3是接头，其中L1为至少10个氨基酸、L2为至少15个氨基酸、并且L3为至少10个氨基酸，其中L1或L3包含蛋白酶切割位点，并且其中该双特异性结合构建体可与免疫效应细胞和靶细胞结合。2.一种双特异性结合构建体，该双特异性结合构建体包含含有具有式VH1
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L1
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scFc
子结构域1
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L2
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VH2
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L3
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VL1
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L4
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scFc
子结构域2
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L5
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VL2的氨基酸序列的多肽链，其中VH1和VH2包含免疫球蛋白重链可变区，VL1和VL2包含免疫球蛋白轻链可变区，scFc包含免疫球蛋白重链恒定结构域
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2和免疫球蛋白重链恒定结构域
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3的子结构域1或子结构域2，并且L1、L2、L3、L4、和L5是接头，其中L1为至少10个氨基酸、L2为至少10个氨基酸、L3为至少15个氨基酸、L4为至少10个氨基酸、并且L5为至少10个氨基酸，并且其中L1、L2、L4和L5进一步包含至少5个氨基酸的蛋白酶切割位点，并且其中该双特异性结合构建体可与免疫效应细胞和靶细胞结合。3.如权利要求1所述的双特异性结合构建体，其中该蛋白酶切割位点存在于L1和L3两者中。4.如权利要求1所述的双特异性结合构建体，其进一步包含至少一个半胱氨酸钳。5.如权利要求4所述的双特异性结合构建体，其中该半胱氨酸钳位于促进该VH1和VL1亚基、该VH2和VL2亚基、或这些scFc亚基之间的连接的位置。6.如权利要求2所述的双特异性结合构建体，其进一步包含至少一个半胱氨酸钳。7.如权利要求6所述的双特异性结合构建体，其中该半胱氨酸钳位于促进该VH1和VL1亚基、该VH2和VL2亚基、或这些scFc亚基之间的连接的位置。8.如权利要求1所述的双特异性结合构建体，其进一步包含半衰期延长部分。9.如权利要求8所述的双特异性结合构建体，其中该半衰期延长部分包含另外的接头和编码人IgG1、IgG2、或IgG4抗体的单链免疫球蛋白Fc区(scFc)。10.如权利要求9所述的双特异性结合构建体，其中该另外的接头包含蛋白酶切割位点。11.如权利要求10所述的双特异性结合构建体，其中该scFc多肽链包含抑制Fcγ受体(FcγR)结合的一种或多种改变和/或延长半衰期的一种或多种改变。12.如权利要求1或2所述的双特异性结合构建体，其中该VH1、VH2、VL1、和VL2都具有不同的序列。13.如权利要求1或2所述的双特异性结合构建体，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：美国安进公司，
类型：发明
国别省市：