一种从非神经细胞转化制备保留年龄特征的抑制性中间神经元的方法技术

本发明专利技术涉及一种从非神经细胞转化制备保留发病阶段年龄及病理特征的抑制性中间神经元的方法。本发明专利技术的制备方法优化了关键的细胞直接转分化基因组合及调控表达水平的启动子，包装可以高效感染各种年龄供体源细胞的病毒，并采用合适的包被基质促进供体源细胞及转化后的神经细胞贴壁生长，并利用含有可以促进转分化的小分子化合物与生长因子的诱导分化培养液，在10

【技术实现步骤摘要】
一种从非神经细胞转化制备保留年龄特征的抑制性中间神经元的方法


[0001]本专利技术涉及癫痫、抑郁症、精神分裂的研究和治疗领域，更具体地，本专利技术涉及与之相关的一种从非神经细胞转化制备保留发病期年龄及病理特征的抑制性中间神经元的方法。

技术介绍

[0002]癫痫(epilepsy)是一种常见的神经系统疾病，其原因是因为大脑(主要是颞叶)神经元异常放电导致大脑短暂的功能障碍，可导致患者出现全身性或局部性发作，如突发精神活动中断、意识丧失、全身痉挛、口吐白沫、尿失禁、面色发青、瞳孔散大等症状，发作时间数秒至数十秒。癫痫发作会造成直接或间接的身体损伤，并给患者带来巨大的痛苦及严重的精神压力。
[0003]现阶段癫痫治疗方法主要包括药物治疗和手术治疗。癫痫的药物研究发展较慢，现广为应用的包括苯巴比妥(1912年开始使用)和苯妥英钠(1938年开始使用)等药物，虽沿用至今，效果良好，但也具有较多特定患者无效、副作用大等缺点。临床手术治疗被认为是比较直接的治疗方法，虽然有效，但有较大的风险，有时会造成患者术区神经功能的严重缺陷。
[000本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从非神经细胞转化制备保留发病期年龄及病理特征的抑制性中间神经元的方法，其包括如下步骤：1)构建含有细胞转分化基因组合的病毒载体，并通过转染细胞进行病毒包装；2)培养供体源细胞，并用经包装的病毒感染经培养的供体源细胞；3)在诱导分化培养液中诱导所述供体源细胞直接转分化为抑制性中间神经元；以及4)分离纯化所得的抑制性中间神经元，其中，所述细胞转分化基因组合包含以下基因的组合：(1)选自NGN1、NGN2和ASCL1中的至少一种基因；(2)选自DLX1、DLX2、DLX5、DLX6、LHX5和LHX6中的至少两种基因；以及任选的(3)选自SOX4和SOX11中的至少一种基因。2.权利要求1所述的方法，其中所述基因为来源于人、小鼠或其它任何种属的同源基因。3.权利要求1
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2中任一项所述的方法，其中所述病毒载体选自逆转录病毒载体、慢病毒载体或AAV病毒载体；和/或载体中调控表达水平的启动子选自CMV、CAG、EF1α、PGK、TRE Tight、TRE3G中的任何一种或多种，优选地，所述启动子选自CMV。4.权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中在病毒载体的构建过程中可通过不同来源的2A序列或IRES序列来连接上述基因，并可任选地进一步引入荧光报告基因。5.权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中所述供体源细胞为任何年龄的正常人或患者的皮肤成纤维细胞或其它非神经元细胞，例如干细胞、肺成纤维细胞、包皮成纤维细胞、胶质细胞，优...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘猛六，柳明杰，沈雁飞，
申请(专利权)人：宁波易赛腾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：