检测NUDT15基因c.37_42dupGGAGTC突变的引物、方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了检测NUDT15基因外显子1的c.37_42dup GGAGTC碱基变异的引物，包括扩增c.37_42dup GGAGTC位点的引物；采用Sanger测序技术，快速检测到NUDT15的变异，从而协助临床判断巯嘌呤类药物治疗过程中引起的白细胞减少副作用的原因，调整药物剂量，避免副作用，实现个性化用药。利用本发明专利技术完成的检测结果准确，对巯嘌呤类药物的个性化用药具有指导意义。义。

【技术实现步骤摘要】
检测NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC突变的引物、方法和试剂盒


[0001]本专利技术属生命科学和生物
，特别涉及检测NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC突变的引物、方法和试剂盒的引物，采用普通PCR结合Sanger测序技术，可用于快速检测c.37_42dup GGAGTC突变。

技术介绍

[0002]NUDT15是nudix水解酶超家族的成员，它与参与8
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氧代
‑2′‑
脱氧鸟苷
‑
5'
‑
三磷酸(8
‑
oxo
‑
dGTP)水解的nudix水解酶1(MTH1)同源。携带NUDT15基因Arg139Cys纯合风险等位基因的患者对巯嘌呤非常敏感，仅耐受标准剂量的8％，并且这种NUDT15变异可单独解释22％的巯基嘌呤耐受性差异。然而，NUDT15在硫嘌呤的代谢中起的具体作用尚不清楚。但据推测，NUDT15可构成一种嘌呤特异性核苷酸二磷酸酶，使硫嘌呤活性代谢物TGTP和TdGTP去磷酸化，从而防止它们掺入DNA并抑制硫嘌呤的细胞毒性作用。因此携带NUDT15突变等位基因患者的硫嘌呤代谢受到影响，体内具有更高浓度的活性代谢物，并且由于代谢物的积累而产生毒性反应。
[0003]硫唑嘌呤(azathioprine，AZA)和6一巯基嘌呤(6
‑
mercaptopurine，6
‑
MP)是嘌呤类免疫抑制剂，主要通过干扰嘌呤代谢，影响嘌呤核苷酸的合成，进而抑制细胞DNA、RNA及蛋白质的合成。目前指南推荐其作为炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)，急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)及自身免疫性肝炎(auto immune hepatitis，AIH)等疾病的首选用药，但由于其对正常组织尤其是新陈代谢活跃的骨髓干细胞有很强的抑制作用，常出现以白细胞减少为主的骨髓抑制导致治疗中断。研究表明巯嘌呤药物所致白细胞减少与6
‑
TGNs的血药浓度密切相关，6
‑
TGNs血药浓度存在的个体差异又促使了对巯嘌呤药物相关代谢酶的研究，结果发现TPMT的基因突变会导致白细胞减少发生率的增加。但越来越多的研究显示TPMT的突变并不能解释存在于亚洲人群中高白细胞减少发生率及低TPMT突变频率之间矛盾的关系。这表明TPMT的基因检测可能并不适用于亚洲人群，同时也提示需要在亚洲人群中开展与AZA相关基因多态性的研究并寻找出可预示AZA不良反应的相关位点。
[0004]癌症治疗的最大挑战是最大限度地提高治疗的疗效和特异性，并尽量减少与治疗方案相关的毒性和耐药性。基于已经取得的大量研究成果，药物基因组学生物标志物在预测癌症治疗的安全性，毒性和疗效方面显示出其重要作用。尽管已经在细胞毒类化疗药物方面进行了大量的药物基因组学研究，但仍需要更多研究来确定最相关和用于临床实践的变异。目前研究表明在亚洲人群中NUDT15基因多态性与巯嘌呤类药物诱导的白细胞减少、早期白细胞减少以及严重白细胞减少的发生显著相关，建议对亚洲人群进行NUDT15基因型测定来预测巯嘌呤类药物诱导的白细胞减少的发生风险，为巯嘌呤类药物的个体化治疗提供有力的帮助。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种检测NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC突变的引物，采用PCR技术，可用于快速检测急性淋巴细胞白血病或自身免疫性肝炎(患者体内NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC的突变情况。
[0006]所述检测NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC突变情况的引物，包括：
[0007]扩增NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC的引物，其碱基序列为：
[0008]NUDT15 exon1F:TGTAAAACGACGGCCAGTATTACGCACCGCGGACAGCT
[0009]NUDT15 exon1R:AACAGCTATGACCATGAAGCAAGCACGGCGTGAGTT。
[0010]进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：
[0011]M13 F：TGTAAAACGACGGCCAGT
[0012]M13 R：AACAGCTATGACCATG。
[0013]本专利技术还提供了检测NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC位点突变情况的方法，包括以下步骤：
[0014]1.抽提外周血的基因组DNA；
[0015]2.用PCR扩增步骤1中提取的DNA；
[0016]3.对步骤2中的扩增产物进行测序；
[0017]4.对测序结果进行判断，确定NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC是否发生突变；
[0018]其中PCR扩增引物为：
[0019]扩增NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC的引物，其碱基序列为：
[0020]NUDT15 exon1F:TGTAAAACGACGGCCAGTATTACGCACCGCGGACAGCT
[0021]NUDT15 exon1R:AACAGCTATGACCATGAAGCAAGCACGGCGTGAGTT。
[0022]进一步地，测序引物碱基序列为：
[0023]M13 F：TGTAAAACGACGGCCAGT
[0024]M13 R：AACAGCTATGACCATG。
[0025]本专利技术还提供了一种检测NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC位点突变的试剂盒，所述试剂盒包括：
[0026](i)血液DNA抽提试剂；
[0027](ii)检测体系PCR扩增反应液：包括扩增NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC的引物，其碱基序列为：
[0028]NUDT15 exon1F:TGTAAAACGACGGCCAGTATTACGCACCGCGGACAGCT
[0029]NUDT15 exon1R:AACAGCTATGACCATGAAGCAAGCACGGCGTGAGTT
[0030](iii)测序体系试剂：包括测序引物，其碱基序列为：
[0031]M13 F：TGTAAAACGACGGCCAGT
[0032]M13 R：AACAGCTATGACCATG；
[0033](iv)阳性对照品和阴性对照品。
[0034]有益效果：本专利技术设计了扩增NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC的引物。采用PCR技术，构建了稳定的扩增体系。通过调整引物浓度、退火温度等反应条件，可使扩增效率达到最佳。本专利技术利用测序技术检测用药患者NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC突变情况的方法，可以将NUDT15基因c.37_42dup GGAGTC的突变快速准确检测出来，相比较本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测c.37_42dup GGAGTC碱基变异的引物，其特征在于，引物碱基序列为：NUDT15 exon1F:TGTAAAACGACGGCCAGTATTACGCACCGCGGACAGCTNUDT15 exon1R:AACAGCTATGACCATGAAGCAAGCACGGCGTGAGTT。2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，还包括测序引物，其碱基序列为：M13 F：TGTAAAACGACGGCCAGTM13 R：AACAGCTATGACCATG。3.如权利要求1所述的引物，其特征在于，引物序列NUDT15 exon1F和NUDT15 exon1R是扩增c.37_42dup GGAGTC碱基变异的引物。4.检测c.37_42dup GGAGTC碱基变异情况的方法，包括以下步骤：(1)抽提外周血基因组DNA；(2)用PCR扩增步骤(1)中提取的DNA；(3)对步骤2中的扩增产物进行测序；(4)对测序结果进行判断，确定c.37_42dup GGAGTC碱基变异情况；其中PCR扩增引物为：NUDT15 exon1F:TGTAAAACG...

【专利技术属性】
技术研发人员：王淑一，李允章，
申请(专利权)人：济南艾迪康医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：