花色苷在冷冻保存精子中的应用、精子冷冻保存液制造技术

本申请属于精子保存技术领域，尤其涉及花色苷在冷冻保存精子中的应用、精子冷冻保存液。本申请第一方面提供了花色苷在体外冷冻保存精子中的应用，所述花色苷选自矢车菊素

【技术实现步骤摘要】
花色苷在冷冻保存精子中的应用、精子冷冻保存液


[0001]本申请属于精子保存
，尤其涉及花色苷在冷冻保存精子中的应用、精子冷冻保存液。

技术介绍

[0002]精子冷冻保存早在半个世纪前就开始了，并在发现甘油作为补充物后发展起来。在过去的几十年里，精子冷冻保存已经发展成为辅助生殖技术治疗的常规做法。重要的是，低温保存过程会导致精子损伤，包括过度脱水、质膜解体、顶体渗漏、线粒体损伤和DNA碎裂。
[0003]在人类精子冷冻损伤中，温度的快速变化对精子在冷冻
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解冻过程中产生化学和物理压力，并改变精子膜脂质成分，这被认为是多因素的。此外，精子低温保存过程中受到的氧化应激可引起DNA损伤。精子活性氧(ROS)的生理水平是正常精子功能所必需的，而过量的ROS会使有害物质积累，导致精子损伤。因此，降低精子氧化应激对防止超低温保存造成的额外损伤具有重要作用。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本申请提供了花色苷在冷冻保存精子中的应用、精子冷冻保存液，有效解决现有的冷冻精子在解冻过程中容易发生氧化应激而引起DNA碎裂以及活力降低的技术问题。
[0005]本申请第一方面提供了花色苷在体外冷冻保存精子中的应用。
[0006]另一实施例中，所述体外冷冻保存精子包括：将精子与精子冷冻培养基混合，然后按照精子冷冻保存法进行冷冻保存；其中，所述精子冷冻培养基包括花色苷和精子冷冻培养可接受物质。
[0007]另一实施例中，所述花色苷为矢车菊素
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Or/>‑
葡萄糖苷(cyanidin
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glucoside，以下简称C3G)、飞燕草素
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葡萄糖苷、天竺葵素
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葡萄糖苷、锦葵素
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葡萄糖苷、芍药素
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葡萄糖苷和牵牛色素
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葡萄糖苷中的一种或多种。
[0008]另一实施例中，所述花色苷在所述精子冷冻培养基中的浓度为50μM/L～200μM/L。
[0009]另一实施例中，所述矢车菊素
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葡萄糖苷在所述精子冷冻培养基中的浓度为50μM/L～200μM/L。
[0010]另一实施例中，所述花色苷在所述精子冷冻培养基中的浓度为50μM/L～100μM/L。
[0011]另一实施例中，所述矢车菊素
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葡萄糖苷在所述精子冷冻培养基中的浓度为50μM/L～100μM/L。
[0012]另一实施例中，所述矢车菊素
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O
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葡萄糖苷在所述精子冷冻培养基中的浓度为50μM/L。
[0013]另一实施例中，所述精子冷冻培养可接受物质包括人血白蛋白、重组人胰岛素和抗生素中的一种或多种。
[0014]具体的，所述人血白蛋白、所述重组人胰岛素和所述抗生素的用量为现有常规用量。
[0015]另一实施例中，所述应用包括所述花色苷在提高精子存活率和活力中的应用。
[0016]另一实施例中，所述应用包括所述花色苷在降低精子ROS水平、精子DNA碎片率DFI和精子核完整性HDS中的应用。
[0017]本申请第二方面提供了一种精子冷冻培养基，包括花色苷和精子冷冻培养可接受物质；
[0018]所述花色苷选自矢车菊素
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葡萄糖苷、飞燕草素
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葡萄糖苷、天竺葵素
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葡萄糖苷、锦葵素
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葡萄糖苷、芍药素
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葡萄糖苷和牵牛色素
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葡萄糖苷中的一种或多种。
[0019]另一实施例中，所述花色苷在所述精子冷冻培养基中的浓度为50μM/L～200μM/L。
[0020]另一实施例中，所述矢车菊素
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葡萄糖苷在所述精子冷冻培养基中的浓度为50μM/L～200μM/L。
[0021]由于精子的冷冻保存过程，包括冰晶的形成、冷冻保护介质的毒性和精子渗透压的变化，由于精子膜的破坏、线粒体氧化磷酸化的减少和ROS的过量产生，对精子质量产生了负面影响。ROS的释放和抗氧化酶活性的降低了精子活力，诱导精子DNA损伤。本申请针对现有技术中冷冻和解冻过程降低了精子的活力，增加了精子ROS的产生和DNA碎片的缺陷，发现了花色苷，尤其是C3G在冷冻保存精子中的新应用，以及C3G可作为精子冷冻保存液中的抗氧化剂，本申请发现在精子冷冻培养基中加入C3G，在精子解冻后能有效提高精子存活和前向运动比例，降低精子ROS水平、精子DNA碎片率DFI和精子核完整性HDS的产生，本申请发现了C3G是一种有效的精子低温保护剂，可改善人类精子低温保存过程中的氧化应激。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0023]图1为本申请实施例提供的体外下不同浓度C3G对低温保存精子解冻后存活率比较；其中，
a
P<0.05；
b
P<0.05与对照组(0μM/L C3G)相比；
[0024]图2为本申请实施例提供的体外下不同浓度C3G对低温保存精子解冻后活动率比较；其中，
a
P<0.05；
b
P<0.05与对照组(0μM/L C3G)相比；
[0025]图3为本申请实施例提供的体外下不同浓度C3G对低温保存精子解冻后精子ROS比较；其中，
a
P<0.05，
b
P<0.05与对照组(0μM/L C3G)；
c
P与添加C3G(50μM/L C3G)相比，P<0.05；
[0026]图4为本申请实施例提供的体外下不同浓度C3G对低温保存精子解冻后精子DFI比较；其中，
a
P<0.05，
b
P<0.05与对照组(0μM/L C3G)；
c
P与添加C3G(50μM/L C3G)相比，P<0.05；
[0027]图5为本申请实施例提供的体外下不同浓度C3G对低温保存精子解冻后精子HDS比较；其中，
a
P<0.05，
b
P<0.05与对照组(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.花色苷在体外冷冻保存精子中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述体外冷冻保存精子包括：将精子与精子冷冻培养基混合，然后按照精子冷冻保存法进行冷冻保存；其中，所述精子冷冻培养基包括花色苷和精子冷冻培养可接受物质。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述花色苷选自矢车菊素
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葡萄糖苷、飞燕草素
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葡萄糖苷、天竺葵素
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葡萄糖苷、锦葵素
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葡萄糖苷、芍药素
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葡萄糖苷和牵牛色素
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葡萄糖苷中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述花色苷在所述精子冷冻培养基中的浓度为50μM/L～200μM/L。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述花色苷在所述精子冷冻培养基中的浓度为50μM/L～100μM/L。6.根据权利要求1所述的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：白卫滨，白顺，李旭升，陈嘉莉，王晓涵，蒋鑫炜，蔡冬宝，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：