一种高表达重组生物蛋白API及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种高表达重组生物蛋白API及其制备方法和应用，涉及毕赤酵母基因工程表达技术领域。本发明专利技术将溶菌酶

【技术实现步骤摘要】
一种高表达重组生物蛋白API及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及毕赤酵母基因工程表达
，具体涉及一种高表达重组生物蛋白API及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]为了发展畜牧业，我国从20世纪80年代开始在养殖业中广泛使用抗生素，但长期使用抗生素严重影响动物、人类、生态的健康发展。在畜牧业中使用抗生素可增加肠道病原菌的耐药性，导致肠道微生物紊乱。畜禽饲喂抗生素后，可导致畜产品中抗生素超标，导致人们食用后使人体产生耐药菌株、过敏致癌和致突变等作用。此外，抗生素还可打破环境中的微生物平衡，加速超级细菌产生的速度。因此，针对在畜牧业中使用抗生素产生的严重危害，2020年农业农村部第194公告中发布开始全面禁止使用除中草药外的促生长药物饲料添加剂，即抗生素禁止在饲料中添加。
[0003]自抗生素禁止在饲料中添加以来，从生态环境可持续性发展出发，开发绿色无公害、无毒副作用、无药物残留且能促进动物生长的饲料添加剂成为畜牧业研究目标。目前在畜禽养殖生产中推广较多的抗生素替代品主要有抗菌肽、酸化剂、微生物制剂、中草药和中药提取物等本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高表达重组生物蛋白API，其特征在于，该生物蛋白API的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种如权利要求1所述的高表达重组生物蛋白API的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将溶菌酶
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抗菌肽融合表达基因进行优化，优化后的基因为API融合基因，所述API融合基因如SEQ ID NO.2所示，并在API融合基因后面通过XbaI限制性内切酶位点加入了一段增强子序列，所述增强子序列如SEQ ID NO.3所示；(2)通过XhoI和XbaI限制性内切酶位点将API融合基因与增强子序列的合成片段连接到pPICZαA载体中，然后将构建的API
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pPICZαA载体转入毕赤酵母X
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33，再进行阳性转化子筛选；(3)基因诱导表达：对筛选得到的阳性转化子先后采用BMGY和BMMY培养基摇瓶表达方式筛选高表达转化子，再将筛选得到的高表达转化子转入发酵罐无机盐基础培养基BSM中进行增值和发酵诱导表达培养，增值培养过程在BSM中加20g/L甘油，诱导发酵培养过程在BSM中加3.0％甲醇；诱导发酵条件为：DO值控制在30％，pH控制在5.0～6.0，发酵温度控制在29～30℃，诱导试剂为甲醇，诱导72～75h。3.如权利要求2所述的高表...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵华，汤加勇，贾刚，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：