磷脂酰-琼胶寡糖及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种磷脂酰

【技术实现步骤摘要】
磷脂酰
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琼胶寡糖及其制备方法
[0001]

[0002]本专利技术涉及一种磷脂酰
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琼胶寡糖，及其制备方法，属于磷脂酰糖苷


技术介绍

[0003]海洋是一座宝库，是众多天然生物活性物质的潜在来源。在所有的组织中，磷脂作为生命的基础物质，由亲水性头基和疏水性尾部组成，由于二者连接方式的不同，又可以将其划分为甘油磷脂和鞘脂，其中，磷脂酰胆碱（PC）在甘油磷脂中的含量最为丰富。
[0004]磷脂不仅能够参与细胞膜的形成并维持其生物功能性，还在细胞胶束和细胞器中发挥着重要的作用，例如，部分磷脂是各种抗炎化合物的前体，可以调节全身炎症，对慢性疾病提供保护。磷脂可以在多种条件下被修饰，如氢化、乙酰化、磺化和酶促修饰，前三种化学修饰的方法多应用于膜物理性能的改善，而酶促修饰是对亲水性头基或疏水性脂肪酰基链的修饰，如磷脂酶 D（phospholipaseD，PLD）介导的转磷脂酰化反应。在动物模型中的多项研究表明，经修饰后的磷脂具有更高的生物利用度和生物活性，尤其是在对血浆和肝脏脂质水平的影响方面。
[0005]磷脂修饰后的一个重要产物是磷脂酰糖苷，糖基化后的磷脂大多富含脂筏或微域，并在各种细胞过程中发挥重要作用。在啮齿动物的大脑中，磷脂酰葡萄糖苷(PtdGlc)的表达受发育调节。PtdGlc在大鼠脑发育早期的径向神经胶质中表达最强烈，被认为是干细胞良好的细胞表面标记物。溶血磷脂酰葡萄糖苷(LPGlc)可以通过激活脊髓感觉轴突的 AG 类蛋白偶联受体 (GPR) 55，在中枢神经系统发育过程中充当延长轴突的指导线索。
[0006]目前在磷脂酰糖苷方面的研究多集中于葡萄糖、果糖、甘露糖、棉子糖，在琼胶寡糖方面还未曾有深入的研究。
[0007]琼胶寡糖，是以琼脂为原料制备的聚合度在2～20之间的海洋功能性低聚糖。琼胶寡糖的制备方法主要有化学降解法和生物酶降解法两种。化学法的应用较多，但仍存在一些不足，如产物组成不均一、操作复杂、容易造成环境污染等。生物酶降解法是采用特异性的琼脂糖酶水解琼脂糖链上的糖苷键从而获得特定的琼胶寡糖，具有催化效率高、产物专一性好、反应条件温和、无污染等优点。

技术实现思路

[0008]针对上述现有技术，本专利技术提供了一种新型的磷脂酰糖苷——磷脂酰
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琼胶寡糖，本专利技术还提供了其制备方法。本专利技术的制备方法，反应路线短，步骤简单，收率高，合成过程中不涉及有毒化学品，并且转酯产物的稳定性高。
[0009]本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种磷脂酰
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琼胶寡糖，是通过以下方法制备得到的：磷脂酰胆碱与琼胶寡糖于双相反应体系中经磷脂酶D催化发生转磷脂酰化作用，合成磷脂酰
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琼胶寡糖；所述琼胶寡糖
选自D
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半乳糖、新琼二糖；所述磷脂酶D选自PLDr34。
[0010]进一步地，所述磷脂酰胆碱上的脂肪酸链分别为C16:0的软脂酸和C18:2的亚油酸。
[0011]进一步地，所述磷脂酰胆碱溶于有机溶剂，作为有机相；所述有机溶剂选自甲醚、乙醚、环戊基甲醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯或丁酸乙酯；所述磷脂酰胆碱的浓度为10～100 mg/mL。
[0012]进一步地，所述琼胶寡糖溶于水溶液中，作为水相；所述水溶液选自pH值为4.0～6.0的柠檬酸
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柠檬酸钠缓冲溶液。
[0013]所述琼胶寡糖，可通过生物酶解法制备得到，也可通过化学降解法制备得到。
[0014]进一步地，所述新琼二糖，是由本专利技术的专利技术人所在课题组筛选获得的β琼胶酶AgWH50B（Accession Number：KY417136）和/或β琼胶酶AgWH50C（Accession Number：KC913197）降解琼脂糖制得的。具体的制备方法可以如下：以1%的琼脂糖溶液（g/ml）为底物，加入2.0 g 的AgWH50B粗酶，在37℃水浴反应12 h，沸水浴10 min，然后加入1.5 g 的AgWH50C粗酶，在37℃水浴反应12 h，沸水浴10 min，离心取上清，浓缩、干燥，即得新琼二糖。新琼四糖可通过以下方法制备得到：以1～2%的琼脂糖溶液（g/ml）为底物，加入2.0 g的 AgWH50B粗酶，在37℃水浴反应12 h，沸水浴10 min，离心取上清，浓缩、干燥，即得新琼四糖。
[0015]进一步地，所述双相反应体系中，磷脂酰胆碱和琼胶寡糖和的摩尔比为1:45～55，优选1:50；所述有机相和水相的体积比为1:0.8～1.2，优选1:1；所述磷脂酶D的加酶量为1.0～1.5 U，优选1.4 U。
[0016]进一步地，所述催化发生转磷脂酰化作用的具体反应条件为：反应体系于37～42 ℃水浴反应8～12 h；反应结束后离心取上清，此时产物磷脂酰
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琼胶寡糖溶于上层有机相中，经氮吹后，制得磷脂酰
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琼胶寡糖。
[0017]本专利技术的磷脂酰
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琼胶寡糖，是一种新的磷脂酰糖苷，磷脂可用于脂质体材料的制备，转酯产物具有包封功能，因此，可以预测，本专利技术的磷脂酰
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琼胶寡糖在封装和运输方面具有良好的应用前景，可作为活性物质（比如药物载体，脂质体膜材等）应用于脂质体的制备，药物递送等方面。
[0018]本专利技术探索了磷脂酰胆碱与琼胶寡糖发生转磷脂酰化作用的发生条件，将筛选出来具有更高底物偏好性的琼胶寡糖经过转磷脂酰化作用连接到磷脂酰胆碱上，合成了一种新型磷脂酰糖苷——磷脂酰
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琼胶寡糖，为其他磷脂酰糖苷的合成提供了合理的指导，具有一定的研究前景。本专利技术的制备方法为双酶法合成，大大降低了生产成本。
[0019]本专利技术使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。
附图说明
[0020]图1：磷脂酰胆碱与不同聚合度的琼胶寡糖发生转酯反应的TLC结果图，其中，PC代表磷脂酰胆碱，1、2、3、4分别代表PC与D
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半乳糖、新琼二糖、新琼四糖、1
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15 AOS的转酯反应结果。
[0021]图2：磷脂酰胆碱的化学结构图。
[0022]图3：磷脂酰
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D半乳糖的化学结构图。
g的1
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15琼胶寡糖（其它条件相同），得上清液B、上清液C、上清液D。
[0039]（二）对上述制备的上清液A、上清液B、上清液C、上清液D进行薄层色谱分析：（1）取0.5mm毛细管体积的样品进行点样，每次点样后用吹风机吹干。
[0040]（2）将点好样品的硅胶板置于含有展层剂的展层缸中，展层剂配方为氯仿：甲醇：冰醋酸：水=50:25:6:2(v：v：v：v)。
[0041]（3）约20 min后取出硅胶板，吹风机吹干后，放入碘缸中，稍后观察实验结果。
[0042]从薄层色谱分析结果图（如图1所示）可以看出，在以不同聚合度的琼胶寡糖为原料发生的转磷脂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磷脂酰
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琼胶寡糖的制备方法，其特征在于：磷脂酰胆碱与琼胶寡糖于双相反应体系中经磷脂酶D催化发生转磷脂酰化作用，合成磷脂酰
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琼胶寡糖；所述琼胶寡糖选自D
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半乳糖、新琼二糖；所述磷脂酶D选自PLDr34。2.根据权利要求1所述的磷脂酰
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琼胶寡糖的制备方法，其特征在于：所述磷脂酰胆碱上的脂肪酸链分别为C16:0的软脂酸和C18:2的亚油酸。3.根据权利要求1所述的磷脂酰
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琼胶寡糖的制备方法，其特征在于：所述磷脂酰胆碱溶于有机溶剂，作为有机相；所述有机溶剂选自甲醚、乙醚、环戊基甲醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯或丁酸乙酯；所述磷脂酰胆碱的浓度为10～100 mg/mL。4.根据权利要求1所述的磷脂酰
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琼胶寡糖的制备方法，其特征在于：所述琼胶寡糖溶于水溶液中，作为水相；所述水溶液选自pH值为4.0～6.0的柠檬酸
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柠檬酸钠缓冲溶液。5.根据权利要求1所述的磷脂酰
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【专利技术属性】
技术研发人员：毛相朝，张海洋，吴虹艳，孙建安，贺晨曦，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：