一种sST2化学发光检测试剂盒及其检测方法技术

本申请涉及生物技术领域，尤其涉及一种sST2化学发光检测试剂盒及其检测方法。所述试剂盒包括Ra组分和Rb组份，所述Ra组分包括生物素标记抗体

【技术实现步骤摘要】
一种sST2化学发光检测试剂盒及其检测方法


[0001]本申请涉及生物
，尤其涉及一种sST2化学发光检测试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]直接影响心脏疾病进展的ST2蛋白有两种：可溶性ST2和跨膜形式的ST2L。可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)是白介素Ⅰ受体家族成员之一。当可溶性ST2浓度降低时，ST2的配体IL
‑
33可与ST2L结合对心脏有保护作用；当可溶性ST2水平高时，可溶性ST2可竞争性与IL
‑
33结合，使IL
‑
33与ST2L结合减少，从而使Il
‑
33无法进入心脏保护的信号转导途径。因此，心脏持续承受压力，导致细胞死亡和组织纤维化，降低了心脏的功能，增加疾病的进展。
[0003]国内已申请的检测技术包括酶联免疫吸附法、胶体金免疫层析法、化学发光法。酶联免疫吸附法技术成熟(公开号：CN201510665932.2)，但灵敏度较差，使用前需要将样本稀释后测定，步骤复杂，时间消耗多，对检测人员专业性要求高，无法满足目前快速、高通量诊断的需求；胶体金免疫层析法检测快速(公开号：CN113533716A)，成本低，检测结果直观，但产品间差异较大，采用物理吸附的方法结合，抗体容易从金颗粒表面脱落，导致重现性较差；化学发光免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检验方法中最为重要的技术之一，它具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点，而基于吖啶酯的闪光型化学发光(公开号：CN112433048A)，具有反应迅速，强度高，背景低的优点，但吖啶酯在缓冲液中不稳定，易水解，同时所需仪器设备昂贵，不利于基层医疗机构推广，而基于碱性磷酸酶的辉光型化学发光具有光信号持续时间长、灵敏度高，线性范围宽等优点，是目前体外诊断试剂检测方法中的佼佼者。

技术实现思路

[0004]本申请提供了一种sST2化学发光检测试剂盒及其检测方法，以解决现有异硫氰酸荧光素放大体系的试剂盒精密度差的技术问题。
[0005]第一方面，本申请提供了一种sST2化学发光检测试剂盒，所述试剂盒包括Ra组分和Rb组份，所述Ra组分包括生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠，所述Rb组分包括碱性磷酸酶标记抗体。
[0006]可选的，所述生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠中，生物素标记物与磁珠的摩尔比为1：1
‑
100。
[0007]可选的，所述生物素标记物中，生物素与sST2抗体的摩尔比为1
‑
500:1。
[0008]可选的，所述生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠的制备方法包括：
[0009]将磁珠用缓冲液进行清洗和重悬，得到磁珠母液，所述磁珠包含链霉亲和素；
[0010]得到用有机溶剂溶解的生物素母液；
[0011]得到用所述缓冲液重悬的sST2抗体；
[0012]将所述生物素母液与抗体溶液进行混合并标记，得到生物素标记物，所述生物素标记物为被生物素标记的抗体；
[0013]将所述生物素标记物与所述磁珠母液进行混合并反应，后用所述缓冲液清洗并添加保护剂，得到物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠。
[0014]可选的，所述Ra组份还包括生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠稀释液，以稳定和保护所述生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠；所述生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠稀释液包括生物素化牛血清白蛋白。
[0015]可选的，所述碱性磷酸酶标记抗体的制备方法包括：
[0016]将sST2抗体与含活化剂的活化溶液混合并反应，得到活化抗体；
[0017]将含琥珀酰亚胺4
‑
(N
‑
马来酰亚胺甲基)环己烷
‑1‑
羧酸盐的SMCC溶液与碱性磷酸酶溶液混合并反应，得到活化碱性磷酸酶；
[0018]将所述活化抗体与所述活化碱性磷酸酶混合并反应，得到碱性磷酸酶标记抗体。
[0019]可选的，所述琥珀酰亚胺4
‑
(N
‑
马来酰亚胺甲基)环己烷
‑1‑
羧酸盐与所述碱性磷酸酶溶液中的碱性磷酸酶的摩尔比为1:1
‑
1000。
[0020]可选的，所述活化抗体与所述活化碱性磷酸酶的摩尔比为1:0.8
‑
2。
[0021]可选的，所述Rb组份还包括酶标记物稀释液，以使所述碱性磷酸酶标记抗体稳定。
[0022]第二方面，本申请提供了第一方面所述试剂盒的使用方法，所述方法包括：将Ra组分和Rb组份依次与sST2抗原混合并反应，加入后用化学发光免疫分析仪进行检测，以实现对sST2蛋白的检测。
[0023]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
[0024]本申请实施例提供的该试剂盒，待测样品中的抗原与试剂盒中的生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠结合成复合物，即抗原
‑
生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠，再与碱性磷酸酶标记抗体结合，会产生化学发光，可以用化学发光免疫分析仪进行检测发光情况，来判定待测样品中抗原情况达到检测的目的，生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠粒径有大有小，解决了现有单独使用小粒径磁珠磁性弱、大粒径磁珠精密度差的问题。
附图说明
[0025]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本专利技术的实施例，并与说明书一起用于解释本专利技术的原理。
[0026]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0027]图1为本申请实施例提供的一种生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠的制备方法的流程示意图；
[0028]图2为本申请实施例提供的一种碱性磷酸酶标记抗体的制备方法的流程示意图。
具体实施方式
[0029]为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是
本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0030]第一方面，本申请提供了一种sST2化学发光检测试剂盒，所述试剂盒包括Ra组分和Rb组分，所述Ra组分包括生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠，所述Rb组分包括碱性磷酸酶标记抗体。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种sST2化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括Ra组分和Rb组份，所述Ra组分包括生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠，所述Rb组分包括碱性磷酸酶标记抗体。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠中，生物素标记物与磁珠的摩尔比为1：1
‑
100。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记物中，生物素与sST2抗体的摩尔比为1
‑
500:1。4.根据权利要求1
‑
3任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠的制备方法包括：将磁珠用缓冲液进行清洗和重悬，得到磁珠母液，所述磁珠包含链霉亲和素；得到用有机溶剂溶解的生物素母液；得到用所述缓冲液重悬的sST2抗体；将所述生物素母液与抗体溶液进行混合并标记，得到生物素标记物，所述生物素标记物为被生物素标记的抗体；将所述生物素标记物与所述磁珠母液进行混合并反应，后用所述缓冲液清洗并添加保护剂，得到物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述Ra组份还包括生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包被磁珠稀释液，以稳定和保护所述生物素标记抗体
‑
链霉亲和素包...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔亚辉，来祥兵，华权高，甘华铭，舒芹，张韦，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：