一种生产PHB的自絮凝运动发酵单胞菌的构建方法及其应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，尤其涉及一种生产PHB的自絮凝运动发酵单胞菌的构建方法及其应用。本发明专利技术以运动发酵单胞菌ZM4为出发菌株，首先利用基因工程手段引入外源PHB合成的三个必需基因phaA，phaB，phaC，与四环素诱导型启动子一起构成操纵子Ptet

【技术实现步骤摘要】
一种生产PHB的自絮凝运动发酵单胞菌的构建方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种生产PHB的自絮凝运动发酵单胞菌的构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]石油工业生产的塑料具有良好的柔韧性和轻盈等特性，已成为人们生活中不可缺少的商品。然而，石油来源的塑料生物降解性低、回收和分类复杂，存在严重的环境污染，尤其是对海洋生态系统。聚
‑
β
‑
羟丁酸(Poly
‑
β
‑
hydroxybutyric,PHB)是一类由微生物合成的高分子聚酯，具有生物可降解性和生物相容性，因而被认为是环境友好型材料，广泛应用于农业、环保、生物化工、医药、医用材料等领域。
[0003]PHB的生物合成主要是通过微生物自身代谢，其中最主要的是微生物发酵法，也是研究最为广泛的方法。但是现阶段，大多数的微生物发酵过程是需氧的，需要耗费大量的能量供氧。运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)作为一种兼性厌氧革兰氏阴性菌，具有许多独特的生理特点和优异的工业生产特性，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生产PHB的自絮凝运动发酵单胞菌的构建方法，其特征在于，将序列分别如SEQ ID NO.1
‑
SEQ ID NO.3所示的phaC、phaA和phaB，3个外源基因序列按照Ptet
‑
phaC
‑
RBS
‑
phaA
‑
RBS
‑
phaB的顺序串联得到Ptet
‑
phaCAB操纵子，序列如SEQ ID NO.4所示；利用基因编辑手段，将ZM4基因组上的ZMO0038基因用Ptet
‑
phaCAB替换，得到菌株ZMPt；删除菌株ZMPt中ZMO1082基因第181位的核苷酸胸腺嘧啶，得到絮凝菌株ZMPt
‑
Flo。2.根据权利要求1所述的一种生产PHB的自絮凝运动发酵单胞菌的构建方法，其特征在于：用引物wf
‑
phaC
‑
F与phaB
‑
R扩增Ptet
‑
phaCAB操纵子上的phaCAB片段；将基因ZMO0367 zwf片段与phaCAB片段连接，得到zwf
‑
phaCAB片段；将zwf
‑
phaCAB片段与Pgap启动子连接形成Pgap
‑
zwf
‑
phaCAB操纵子；将Pgap
‑
Zwf
‑
phaCAB操纵子与pEZ
‑
15A反扩载体片段组装得到pEZ
‑
Pg
N2
；将pEZ
‑
Pg
N2
转入ZMPt
‑
Flo中，得到ZMPt
‑
Flo
N2
；zwf
‑
phaC
‑
F：AAAGAGGAGAAAGGATCTCCCATGGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨世辉，何桥宁，李扬，
申请(专利权)人：湖北大学，
类型：发明
国别省市：