一种重组融合蛋白及其制备治疗炎症性肠病药物的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组融合蛋白及其制备治疗炎症性肠病药物的应用，其具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。所述的重组融合蛋白用于制备治疗溃疡性结肠炎和/或克罗恩病药物的应用。通过氨基酸突变，筛选到了PDAP1

【技术实现步骤摘要】
一种重组融合蛋白及其制备治疗炎症性肠病药物的应用


[0001]本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种重组融合蛋白及其制备治疗炎症性肠病药物的应用。

技术介绍

[0002]溃疡性结肠炎是一种病因未明的慢病炎症性肠病，主要累及结肠和直肠。从全球来看，溃疡性结肠炎的发病率的患病率逐年增加。目前，中国溃疡性结肠炎患病率已超过11.6/10万，发病高峰年龄为20～49岁。此外，随着溃疡性结肠炎病变的持续进展、病程迁延不愈，患者的不良预后风险也在不断增加，如结直肠癌风险明显增高、结构性肠损伤、更易抑郁焦虑等。由于存在肠腔狭窄、肠蠕动障碍、肛门直肠功能障碍、发生癌变等风险，溃疡性结肠炎被认为是一种进行性疾病，其治疗策略也从对症治疗转变为促进黏膜愈合，研究表明组织学缓解与更低的住院、结肠切除、癌变风险相关。
[0003]目前，溃疡性结肠炎的治疗主要在于抑制肠道炎症，然而，现有的治疗手段包括氨基水杨酸、糖皮质激素、免疫抑制剂或生物制剂等，在安全性和有效性方面，都有不尽如人意之处。溃疡性结肠炎患者的10年累积复发率高达70％～80％，近50％的患者需要住院治疗，5年再住院率为50％，确诊后5年和10年的结肠切除率为10％～15％。因此，开发新的溃疡性结肠炎治疗药物具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种重组融合蛋白及其制备治疗炎症性肠病药物的应用，该重组融合蛋白通过基因工程方法获得，经过实验证实，该重组蛋白能够用于制备治疗炎症性肠病药物的应用。
[0005]具体技术方案包括：
[0006]一种重组融合蛋白，其具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
[0007]一种重组融合蛋白，其由如SEQ ID NO：2所示的基因序列编码得到。
[0008]一种重组融合蛋白，为人PDAP1
YDPE
重组融合蛋白，氨基端融合有6
×
His标签，羧基端含有4个氨基酸突变，突变氨基酸残基为K105Y、E106D、R109P和R110E。
[0009]本专利技术所述的重组融合蛋白用于制备治疗炎症性肠病药物的应用。
[0010]一种重组载体，将PDAP1
YDPE
融合基因片段利用限制性酶切位点NdeI/EcoRI将其插入pET
‑
22b(+)表达载体(Merck,NJ,USA)；
[0011]PDAP1
YDPE
融合基因片段如SEQ ID NO：2所示。
[0012]一种大肠杆菌，所述的大肠杆菌为Escherichia coli strain BL21(DE3)，其内转化有本专利技术所述的重组载体。
[0013]一种治疗溃疡性结肠炎的药物，含有本专利技术所述的重组融合蛋白。
[0014]一种治疗克罗恩病的药物，含有本专利技术所述的重组融合蛋白。
[0015]一种治疗炎症性肠病的药物，含有本专利技术所述的重组融合蛋白。
[0016]本专利技术的优点为：
[0017]本专利技术通过氨基酸突变，筛选到了PDAP1
YDPE
突变能够显著提高PDAP1蛋白的稳定性，并且采用重组PDAP1
YDPE
蛋白灌肠治疗能够显著缓解小鼠结肠炎症，提示重组PDAP1
YDPE
蛋白在炎症性肠病治疗中具有潜在的应用价值。
附图说明
[0018]附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
[0019]图1为pET
‑
22b
‑
PDAP1
YDPE
质粒图谱；
[0020]图2为人PDAP1
YDPE
重组融合蛋白纯度检测的SDS
‑
PAGE图；
[0021]图3为应用小鼠结肠炎模型对融合蛋白PDAP1
YDPE
进行药效学检测的给药方案图；
[0022]图4为小鼠结肠炎模型中应用PBS或融合蛋白PDAP1
YDPE
进行治疗后小鼠结肠图；
[0023]图5为小鼠结肠炎模型中应用PBS或融合蛋白PDAP1
YDPE
进行治疗后小鼠结肠长度统计图；
[0024]图6为小鼠结肠炎模型中应用PBS或融合蛋白PDAP1
YDPE
进行治疗后小鼠结肠组织炎症因子表达水平统计图；图6中Ifng、Il1b、Il6、Il8、Il10、Il17a和Tnf分别表示不同炎症因子。
具体实施方式
[0025]为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本专利技术作进一步地详细描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]炎症性肠病(IBD)为累及回肠、直肠、结肠的一种特发性肠道炎症性疾病。临床表现腹泻、腹痛，甚至可有血便。本病包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。溃疡性结肠炎是结肠黏膜层和黏膜下层连续性炎症，疾病通常先累及直肠，逐渐向全结肠蔓延,克罗恩病可累及全消化道，为非连续性全层炎症，最常累及部位为末端回肠、结肠和肛周。
[0027]PDAP1(PDGF
‑
associated protein，血小板源生长因子相关蛋白)；
[0028]DSS(Dextran sulfate sodium salt，硫酸葡聚糖钠盐)是葡聚糖的聚阴离子衍生物，由葡聚糖和氯磺酸的酯化反应形成。自1985年首次报道采用DSS制备出仓鼠溃疡性结肠炎模型以来，已有大量研究证明DSS结肠炎模型与人类溃疡性结肠炎相似。DSS结肠炎模型的组织学特点、临床表现、发病部位和细胞因子增殖情况都与人类溃疡性结肠炎极为相似。
[0029]UC(Ulcerative colitis，溃疡性结肠炎)是一种原因未明的直肠和结肠慢性炎性疾病。主要临床表现为腹泻、粘液脓血便、腹痛和里急后重等。病情轻重不等，多反复发作或长期迁延呈慢性经过。
[0030]PDAP1是由181个氨基酸组成的、分子量约为28kD的蛋白质。前期研究表明，在DSS诱导的结肠炎模型中，肠上皮细胞敲除PDAP1基因后小鼠的结肠炎显著加重，结肠炎细胞浸润、炎症因子释放、结肠通透性、肠上皮细胞凋亡等显著增加，表明PDAP1在UC损伤修复过程中发挥重要作用。研究还发现重组野生型PDAP1蛋白极易降解、稳定性差。质谱分析发现
PDAP1蛋白的不稳定位点，通过氨基酸突变，筛选到了PDAP1
YDPE
突变能够显著提高PDAP1蛋白的稳定性，并且采用重组PDAP1
YDPE
蛋白灌肠治疗能够显著缓解小鼠结肠炎症，提示重组PDAP1
YDPE
蛋白在UC治疗中具有潜在的应本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组融合蛋白，其特征在于，其具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。2.一种重组融合蛋白，其特征在于，其由如SEQ ID NO：2所示的基因序列编码得到。3.一种重组融合蛋白，其特征在于，为人PDAP1
YDPE
重组融合蛋白，氨基端融合有6
×
His标签，羧基端含有4个氨基酸突变，突变氨基酸残基为K105Y、E106D、R109P和R110E。4.权利要求1
‑
3任一所述的重组融合蛋白用于制备治疗炎症性肠病药物的应用。5.一种重组载体，其特征在于，将PDAP1
YDPE
融合基因片段利用限制性酶切位点NdeI/EcoRI将其插入pET

【专利技术属性】
技术研发人员：崔洪勇，汪世婕，陈志南，边惠洁，蒋建利，李玲，吴佼，魏巍，付欣，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：