一种α-淀粉酶抑制剂活力的检测方法技术

本发明专利技术属于生物科技技术领域，具体为一种α

【技术实现步骤摘要】
一种
α
‑
淀粉酶抑制剂活力的检测方法


[0001]本专利技术涉及生物科技
，具体为一种α
‑
淀粉酶抑制剂活力的检测方法。

技术介绍

[0002]现有的淀粉酶抑制剂活力的检测方法在使用的过程中存在着一下不足：
[0003]1、标准曲线的建立：采用葡糖糖标准曲线作为检测判定依据，由于α
‑
淀粉酶酶解淀粉的直接产物主要为麦芽糖、异麦芽糖、麦芽寡糖等，因此采用葡萄糖标准曲线作为检测依据存在不合理性，结果存在偏差；
[0004]2、显色方案的选取：利用淀粉溶液在碘
‑
碘化钾作用下显蓝色，在一定浓度范围内，660nm处的吸光值和淀粉的量呈线性关系的特点，再根据加入α
‑
淀粉酶抑制剂前后α
‑
淀粉酶分解淀粉量的差值，计算淀粉酶抑制剂的活力。此方法的不合理之处是如果待测样品中含有淀粉会影响活力测定结果，而且淀粉含量越高，所测得的活力相应就越高。而本方法采用的原理是：麦芽糖与3,5
‑
二硝基水杨酸(DNS)在高温下发生显色反应，颜色深浅(A540)与麦芽糖浓度存在对应关系，因此按生成物的量衡量抑制剂活力更为合理准确。
[0005]3、淀粉酶活力的标准限定：
[0006]作为淀粉酶抑制剂，其所抑制的目标淀粉酶活力值对抑制活力的测定存在很大影响，如所用的α
‑
淀粉酶活力较低则测试所得的抑制剂活力会很高，因此规范所要抑制的目标α
‑
淀粉酶的活力对检测结果的规范性很有必要。
[0007]α
‑
淀粉酶抑制剂活力(IU)定义为：在37℃/pH6.9下，在α
‑
淀粉酶催化淀粉水解的反应中，当反应体系的α
‑
淀粉酶活力为100IU时，1min内抑制1μg麦芽糖生成所需α
‑
淀粉酶抑制剂的量。
[0008]因此，根据将α
‑
淀粉酶实际活力统一折算到100IU后，再计算抑制剂活力更为合理。

技术实现思路

[0009]本部分的目的在于概述本专利技术的实施方式的一些方面以及简要介绍一些较佳实施方式。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。
[0010]鉴于现有淀粉酶抑制剂活力的检测方法中存在的问题，提出了本专利技术。
[0011]因此，本专利技术的目的是提供一种α
‑
淀粉酶抑制剂活力的检测方法，能够实现将α
‑
淀粉酶实际活力统一折算到100IU后，再计算抑制剂活力更为合理，保证了检测结果的准确性。
[0012]为解决上述技术问题，根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了如下技术方案：
[0013]一种α
‑
淀粉酶抑制剂活力的检测方法，其包括如下步骤：
[0014]步骤1：选用麦芽糖制作标准曲线；
[0015]步骤2：选用酶解过程的生成物衡量抑制剂活力更为合理准确，麦芽糖与3,5
‑
二硝基水杨酸(DNS)在高温下发生显色反应，颜色深浅(A540)与麦芽糖浓度存在对应关系；
[0016]步骤3：将淀粉酶活力值统一折算到100IU后再计算抑制剂活力值。
[0017]作为本专利技术所述的一种α
‑
淀粉酶抑制剂活力的检测方法的一种优选方案，其中：步骤1具体包容如下步骤：
[0018](1)取7只试管编号，分别加入麦芽糖标准溶液(1mg/mL)0，0.15，0.45，0.75，1.05，1.35，1.5mL，然后用去离子水将各试管中液体体积补足至1.5mL；
[0019](2)向各试管中加入1mLDNS后，于沸水浴中加入10min后冷却；
[0020](3)向各试管中加入10mL去离子水，振荡混匀后，于540nm波长下测定吸光度值，用去离子水调零。
[0021]作为本专利技术所述的一种α
‑
淀粉酶抑制剂活力的检测方法的一种优选方案，其中：所述步骤2的具体流程为：
[0022]将粉末样品与磷酸盐缓冲液(PBS)按1:500(m/V，g/mL)的比例制成液体样品(需分散完全，不用离心)；将0.25mLα
‑
淀粉酶液和0.25mL液体样品加入到0.5mLPBS中，于37℃水浴10min后，加入0.5mL可溶性淀粉溶液，精确反应5min后加入1mL3,5—二硝基水杨酸试剂(DNS)以终止反应；将反应液于沸水浴中加热10min后迅速置于冰水浴中冷却至室温，然后加入10mL去离子水，混合均匀后于540nm波长下测定吸光值；
[0023]其中，在测定过程中，设置空白管、空白对照管、抑制管和抑制对照管，空白管中不添加样品，空白对照管中不加α
‑
淀粉酶液和样品，抑制对照管中不加α
‑
淀粉酶液，体积不足处均以PBS补足。
[0024]作为本专利技术所述的一种α
‑
淀粉酶抑制剂活力的检测方法的一种优选方案，其中：所述步骤3具体包括：
[0025](1)设麦芽糖浓度标准曲线为：c＝f(A)。
[0026]其中，c
‑
麦芽糖浓度，mg/mL；A
‑
相应麦芽糖浓度下的吸光度值；
[0027](2)空白组中α
‑
淀粉酶活力(Φ)的计算公式如下：
[0028]Φ＝α
‑
淀粉酶活力(IU)＝(f(A1)
‑
f(A2))
×
1.5
×
1000/5
[0029]其中，1.5
‑
酶解反应体系的体积，mL；5
‑
酶解反应时间，min；
[0030](3)样品中α
‑
AI活力的计算公式如下：
[0031]α
‑
AI活力(IU/g)＝(f(A1)
‑
f(A2)
‑
f(A3)+f(A4))
×
1.5
×
100
×
V
×
100/(5
×
0.25
×
m
×
Φ)
[0032]其中，A1
‑
空白管吸光值；A2
‑
空白对照管吸光值；A3
‑
抑制管吸光值；A4
‑
抑制对照管吸光值；V
‑
制备液体样品时所用PBS的体积，mL；m
‑
制备液体样品时所取粉末样品的质量，g；1.5
‑
酶解反应体系的体积，mL；5
‑
酶解反应时间，min；0.25
‑
测定中所取液体样品的体积，mL；Φ
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种α
‑
淀粉酶抑制剂活力的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：选用麦芽糖制作标准曲线；步骤2：选用酶解过程的生成物衡量抑制剂活力更为合理准确，麦芽糖与3,5
‑
二硝基水杨酸(DNS)在高温下发生显色反应，颜色深浅(A540)与麦芽糖浓度存在对应关系；步骤3：将淀粉酶活力值统一折算到100IU后再计算抑制剂活力值。2.根据权利要求1所述的一种α
‑
淀粉酶抑制剂活力的检测方法，其特征在于：步骤1具体包容如下步骤：(1)取7只试管编号，分别加入麦芽糖标准溶液(1mg/mL)0，0.15，0.45，0.75，1.05，1.35，1.5mL，然后用去离子水将各试管中液体体积补足至1.5mL；(2)向各试管中加入1mLDNS后，于沸水浴中加入10min后冷却；(3)向各试管中加入10mL去离子水，振荡混匀后，于540nm波长下测定吸光度值，用去离子水调零。3.根据权利要求1所述的一种α
‑
淀粉酶抑制剂活力的检测方法，其特征在于：所述步骤2的具体流程为：将粉末样品与磷酸盐缓冲液(PBS)按1:500(m/V，g/mL)的比例制成液体样品(需分散完全，不用离心)；将0.25mLα
‑
淀粉酶液和0.25mL液体样品加入到0.5mLPBS中，于37℃水浴10min后，加入0.5mL可溶性淀粉溶液，精确反应5min后加入1mL3,5—二硝基水杨酸试剂(DNS)以终止反应；将反应液于沸水浴中加热10min后迅速置于冰水浴中冷却至室温，然后加入10mL去离子水，混合均匀后于540nm波长下测定吸光值；其中，在测定过程中，设置空白管、空白对照管、抑制管和抑制对照管，空白管中不添加样品，空白对照管中不加α
‑
淀粉酶液和样品，抑制对照管中不加α
‑
淀粉酶液，体积不足处均以PBS补足。4.根据权利要求1所述的一种α
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：于淼，让一峰，
申请(专利权)人：无锡华康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：