一种稀有细胞捕获装置及其制备方法制造方法及图纸

本发明专利技术公开了一种稀有细胞捕获装置及其制备方法。该制备方法，包括如下步骤：A、提供巯基化试剂；B、将所述巯基化试剂和含有马来酰亚胺基团的高分子化合物或含有双键基团的高分子化合物混合均匀形成涂层组合物，所述含有马来酰亚胺基团的高分子化合物或所述含有双键基团的高分子化合物与所述巯基化试剂中的巯基化物的重量比为1:2至6:1；C、将基材浸没于所述涂层组合物中，取出，待溶液成胶，晾干凝胶，形成涂层；D、将捕获物连接到所述涂层上，所述捕获物能够特异性地和目标细胞结合。本发明专利技术能够降低背景细胞、蛋白的非特异性吸附，提高所捕获的靶细胞的纯度。捕获的靶细胞的纯度。捕获的靶细胞的纯度。

【技术实现步骤摘要】
一种稀有细胞捕获装置及其制备方法
[0001]本申请是于2021年8月11日提交的申请号为2021109160631，名称为《一种适于捕获稀有细胞的涂层组合物、装置及方法》的申请的分案申请。


[0002]本专利技术属于生物
，涉及一种稀有细胞捕获装置及其制备方法。

技术介绍

[0003]稀有细胞是指生物样本中存在的数量稀少却具有重要生物学功能或临床检测意义的细胞。稀有细胞的传统捕获方法有CellSearch类的免疫捕获富集、物理富集等。在稀有细胞的富集过程中，背景/杂细胞干扰稀有细胞的捕获及判断，同时影响到捕获到稀有细胞的纯度。目前，一些捕获筛等捕获装置上添加有物理涂层和化学涂层来提高细胞的捕获效率，其中，物理涂层的结合强度低；而化学涂层不可逆，捕获的稀有细胞释放困难；另一方面，在捕获靶细胞的同时，背景细胞也会吸附到捕获筛上，所捕获的稀有细胞的纯度较低；此外，捕获装置会对稀有细胞有不同程度的损伤；这些因素都会影响捕获细胞的活性及下游应用。
[0004]上海邦先医疗科技有限公司于2020年提出了一种捕获筛，参见CN111175503A，该捕获筛包括筛网骨架和设置于所述筛网骨架上的捕获物，所述捕获物能够与目标细胞或生物分子特异性结合，所述筛网骨架具有金属原子，所述的筛网骨架和所述捕获物之间通过巯基化物质连接，其中巯基化物质与所述筛网骨架通过反应形成金属
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硫键而结合，巯基化物质与所述捕获物通过反应形成酰胺键而结合；所述巯基化物质为巯基化海藻酸钠和巯基化透明质酸中的一种或两种的组合。该捕获筛能够方便地将捕获的细胞洗脱，但是用于富集稀有细胞时，背景细胞也会吸附到捕获筛上，捕获的目标稀有细胞的纯度较低。

技术实现思路

[0005]针对上述技术问题中的至少一个，本专利技术的目的是提供一种稀有细胞捕获装置及其制备方法，能够降低背景细胞、蛋白的非特异性吸附，提高所捕获的靶细胞的纯度。
[0006]根据本专利技术的第一个方面，一种稀有细胞捕获装置的制备方法，包括如下步骤：
[0007]A、提供巯基化试剂；
[0008]B、将所述巯基化试剂和含有马来酰亚胺基团的高分子化合物或含有双键基团的高分子化合物混合均匀形成涂层组合物，所述含有马来酰亚胺基团的高分子化合物或所述含有双键基团的高分子化合物与所述巯基化试剂中的巯基化物的重量比为1:2至6:1；
[0009]C、将基材浸没于所述涂层组合物中，取出，待溶液成胶，晾干凝胶，形成涂层；
[0010]D、将捕获物连接到所述涂层上，所述捕获物能够特异性地和目标细胞结合。
[0011]优选地，所述基材为筛网、板或微流控芯片；和/或，所述捕获物包括蛋白、核酸中的至少一种。
[0012]优选地，所述基材为金属筛网或塑料筛网；和/或，所述捕获物包括抗体。
[0013]优选地，所述巯基化物包括巯基化透明质酸钠或巯基化海藻酸钠。
[0014]更优选地，所述巯基化物的巯基化率为5
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45％，所述巯基化物的分子量为5
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200kDa；和/或，步骤A中，将透明质酸钠和/或海藻酸钠溶于缓冲溶液中，加入含氨基的二硫代化合物和羧基活化剂搅拌反应，然后加入二硫键还原剂，制得所述巯基化试剂；和/或，所述巯基化试剂的固含量为1
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20％。
[0015]优选地，所述含有马来酰亚胺基团的高分子化合物包括选自双马来酰亚胺基
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聚乙二醇和四臂聚乙二醇
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马来酰亚胺中的一种或两种。
[0016]优选地，所述含有双键基团的高分子化合物包括甲基丙烯酰化明胶、甲基丙烯酰化透明质酸、甲基丙烯酰化海藻酸钠和甲基丙烯酰化葡聚糖中的一种或多种的组合。
[0017]优选地，步骤B中，将所述含有马来酰亚胺基团的高分子化合物或所述含有双键基团的高分子化合物配制为水溶液，和所述巯基化试剂混合均匀形成涂层组合物。
[0018]优选地，所述制备方法具体实施如下：制备巯基化透明质酸钠或所述巯基化海藻酸钠；将巯基化透明质酸钠或所述巯基化海藻酸钠的溶液和四臂聚乙二醇
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马来酰亚胺或双键化明胶的水溶液混合均匀形成涂层组合物；将不锈钢筛网或塑料筛网浸没于所述涂层组合物中，所述筛网的孔径为10μm
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50μm，取出，待溶液成胶，晾干凝胶，形成覆于筛网上的涂层；将能够和免疫细胞特异性结合的抗体覆于至涂层上。
[0019]根据本专利技术的第二个方面，一种由上述制备方法制得的稀有细胞捕获装置。
[0020]优选地，所述含有马来酰亚胺的高分子化合物或双键基团的高分子化合物和所述巯基化物的重量比为1：1至6：1之间，进一步为1：1至5：1之间，更进一步为1：1至4：4之间。将含有马来酰亚胺或双键基团的高分子化合物和巯基化物的重量比控制为1:2至6:1之间，能够有效降低背景细胞的吸附，且不会对目标稀有细胞造成损伤。
[0021]优选地，所述含有马来酰亚胺基团的高分子化合物包括选自双马来酰亚胺基
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聚乙二醇和四臂聚乙二醇
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马来酰亚胺中的一种或两种。
[0022]优选地，所述含有双键基团的高分子化合物包括甲基丙烯酰化明胶、甲基丙烯酰化透明质酸、甲基丙烯酰化海藻酸钠和甲基丙烯酰化葡聚糖中的一种或多种的组合。
[0023]优选地，所述巯基化物包括巯基化透明质酸钠或巯基化海藻酸钠。该涂层可被裂解，从而便于将捕获到的细胞从基材上洗脱下来，且不会损伤到细胞，具有较高的洗脱效率。
[0024]优选地，所述巯基化物的巯基化率为5
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45％，所述巯基化物的分子量为5
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200kDa。
[0025]更优选地，所述巯基化物的巯基化率为15
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25％，所述巯基化物的分子量为9
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39kDa。
[0026]可选地，所述基材包括筛网、板或微流控芯片。所述基材的材质不受限制，只要能够提供供涂层组合物涂覆的表面即可，包括但不限于金属、塑料、玻璃、陶瓷等。
[0027]在一具体且优选的实施例中，所述基材为筛网。更优选地，所述筛网的孔径为10μm
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50μm。进一步地，所述筛网的孔径为10μm
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20μm，适于免疫细胞的捕获。
[0028]在一更优选的实施例中，所述筛网为不锈钢筛网。
[0029]在另一更优选的实施例中，所述筛网为由塑料形成的塑料筛网，包括但不限于尼龙筛网、聚对苯二甲酸乙二醇酯筛网等。
[0030]优选地，所述捕获物包括蛋白、核酸中的至少一种。更优选地，所述蛋白包括抗体。
进一步地，所述抗体包括EPCAM抗体、CD3抗体中的至少一种。稀有细胞等被捕获物能够与抗体特异性结合而被抗体等捕获物捕获到装置中，然后通过对涂层裂解，将捕获到的稀有细胞从基材上洗脱下来，用于后续分析、下游应用等。
[0031]优选地，所述涂层组合物包括本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种稀有细胞捕获装置的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：A、提供巯基化试剂；B、将所述巯基化试剂和含有马来酰亚胺基团的高分子化合物或含有双键基团的高分子化合物混合均匀形成涂层组合物，所述含有马来酰亚胺基团的高分子化合物或所述含有双键基团的高分子化合物与所述巯基化试剂中的巯基化物的重量比为1:2至6:1；C、将基材浸没于所述涂层组合物中，取出，待溶液成胶，晾干凝胶，形成涂层；D、将捕获物连接到所述涂层上，所述捕获物能够特异性地和目标细胞结合。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述基材为筛网、板或微流控芯片；和/或，所述捕获物包括蛋白、核酸中的至少一种。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述基材为金属筛网或塑料筛网；和/或，所述捕获物包括抗体。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述巯基化物包括巯基化透明质酸钠或巯基化海藻酸钠。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述巯基化物的巯基化率为5
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45％，所述巯基化物的分子量为5
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200kDa；和/或，步骤A中，将透明质酸钠和/或海藻酸钠溶于缓冲溶液中，加入含氨基的二硫代化合物和羧基活化剂搅拌反应，然后加入二硫键还原剂，制得所述巯基化试剂；和/或，所述巯基化试剂的固含量为1
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【专利技术属性】
技术研发人员：颜菁，
申请(专利权)人：江苏汇先医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：