使用GATA1基因疗法用于治疗DBA的组合物和方法技术

本文描述的是与用于治疗Diamond

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用GATA1基因疗法用于治疗DBA的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]根据35 U.S.C.
§
119(e)，本申请要求2019年6月10日提交的美国临时申请号62/859,369的权益，以引用的方式将其内容整体并入本文。
[0003]政府支持
[0004]本专利技术是在由美国国立卫生研究院授予的基金号：R1 DK103794和R33 HL120791的政府支持下完成的。美国政府对本专利技术享有一定的权利。
[0005]序列表
[0006]本申请包含已以ASCII格式用电子方式提交的序列表，并在此以引用的方式将其整体并入。所述ASCII副本创建于2020年6月3日，名为701039
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094470WOPT_SL.txt，大小为188,598字节。


[0007]本文描述的技术涉及用于治疗Diamond
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Blackfan贫血的GATA
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1基因疗法的组合物和方法及其用途。

技术介绍

[0008]Diamond
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Blackfan贫血(DBA)是一组罕见的遗传性骨髓衰竭综合征(IBMFS)之一，其特征在于红细胞衰竭、存在先天异常和癌症易感性。DBA通常在儿童生命的第一年被诊断出来。患有DBA的儿童无法制造足够的红血细胞，该细胞将氧携带至身体的所有其它细胞。在患有DBA的儿童中，许多将会变成红血细胞的细胞在其发育之前死亡。除了为遗传性骨髓衰竭综合征之外，DBA还被归类为核糖体病，因为在超过50％的病例中，该综合征似乎是由小亚基或大亚基相关的核糖体蛋白二者之一的单倍不足(haploinsufficiency)引起的。
[0009]DBA的特征在于红血(红系)细胞及其前体的产生特异性减少，而其它造血谱系没有缺陷。在过去十年中，核糖体蛋白基因RPS19的突变的阐明和随后9个其它核糖体蛋白基因的突变的发现产生了DBA是核糖体生物发生紊乱的假设。然而，尽管在这些病例中对所有核糖体蛋白和其它候选基因进行了系统测序，但有约50％的DBA病例具有尚未鉴别的分子突变。
[0010]GATA
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1基因位于X染色体并编码调控红细胞发育的转录因子。最近，在Diamond
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Blackfan贫血(DBA)患者中发现了GATA
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1中的功能丧失突变。然而，目前还没有专门针对红系细胞中的GATA
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1增强的治疗。因此，需要直接针对红系细胞中GATA
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1功能障碍的治疗方法以提供有效的治疗。

技术实现思路

[0011]最近的研究表明，红系细胞中GATA
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1增强可能对Diamond
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Blackfan贫血(DBA)具有治疗作用。然而，在体内增加包括GATA
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1在内的治疗性蛋白质的谱系特异性表达仍然具有挑战性。尝试用现有技术增加GATA1表达必然增加细胞(例如HSC)中GATA1的表达，在此情
况下，它对受试者是极大的危害，否定了任何可能的治疗效果。
[0012]如本文所述，本专利技术人鉴别出专门在早期红系祖细胞中而不是在造血干细胞中增加GATA1的谱系特异性表达的组合物和方法，以作为用于治疗Diamond
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Blackfan贫血的基因治疗方法。DBA的特征在于红血(红系)细胞及其前体的产生特异性减少，而其它造血谱系没有缺陷。
[0013]在任意实施方式的一个方面，本文描述了核酸序列，所述核酸序列包含至少一个异源调控序列以及编码GATA结合因子1(GATA1)多肽的序列，所述异源调控序列选自于造血增强子元件和用于HSC限制性miRNA的miRNA结合位点。
[0014]在任意方面的一些实施方式中，所述核酸序列包含至少一个造血增强子元件。
[0015]在任意方面的一些实施方式中，所述增强子元件包含与选自于由以下序列所组成的组中的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列：SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：38和/或SEQ ID NO：39。
[0016]在任意方面的一些实施方式中，所述增强子元件包含选自于由以下所组成的组的基因的增强子元件：Kell金属内肽酶(KEL)；5'氨基乙酰丙酸合酶2(ALAS2)；和血型糖蛋白A(GYPA)。
[0017]在任意方面的一些实施方式中，所述核酸序列包含用于至少一个HSC限制性miRNA的至少一个miRNA结合位点。
[0018]在任意方面的一些实施方式中，用于至少一个HSC限制性miRNA的至少一个miRNA结合位点选自于由以下所组成的组：用于miR10aT、miR125、miR155、miR130aT、miR142T、miR196bT、miR99、miR126miR126、miR181、miR193、miR223T、miR542和let7e的miR结合位点。
[0019]在任意方面的一些实施方式中，所述核酸序列包含至少一个造血增强子元件以及用于至少一个HSC限制性miRNA的至少一个miRNA结合位点。
[0020]在任意方面的一些实施方式中，包含：a.异源5'UTR，所述异源5'UTR包含：i.除GATA1以外的造血转录因子的5'UTR序列，ii.至少20个核苷酸的序列，和/或iii.1
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25个上游密码子uAUG；和/或b.造血增强子微小基因(minigene)。
[0021]在任意实施方式的一个方面，本文描述了包含5'UTR和编码GATA结合因子1(GATA1)多肽的序列的核酸序列，所述5'UTR包含：i.除GATA1以外的造血转录因子的5'UTR序列；ii.至少20个核苷酸的序列；和/或iii.1
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25个上游密码子uAUG。
[0022]在任意方面的一些实施方式中，所述5'UTR包含选自于由以下所组成的组的基因的5'UTR：Runt相关转录因子1(RUNX1)、LIM Domain Only 2(LMO2)或ETS变体6(ETV6)。
[0023]在任意方面的一些实施方式中，所述核酸序列进一步包含至少一个造血增强子元件、用于HSC限制性miRNA的miRNA结合位点和/或造血增强子微小基因(G1HEM)。
[0024]在任意实施方式的一个方面，本文描述了包含造血增强子微小基因(G1HEM)、编码GATA结合因子1(GATA1)多肽的序列的核酸序列。
[0025]在任意方面的一些实施方式中，造血增强子微小基因(mG1HEM)包含与核苷酸序列SEQ ID NO：13具有至少80％同源性的序列。
[0026]在任意方面的一些实施方式中，所述核酸序列进一步包含5'UTR、和/或至少一个造血增强子元件、和/或用于HSC限制性miRNA的至少一个miRNA结合位点，所述5'UTR包含：i.除本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种核酸序列，所述核酸序列包含a.至少一个异源调控序列，所述异源调控序列选自于造血增强子元件和用于HSC限制性miRNA的miRNA结合位点；以及b.编码GATA结合因子1(GATA1)多肽的序列。2.如权利要求1所述的核酸序列，所述核酸序列包含至少一个造血增强子元件。3.如权利要求2所述的核酸序列，其中，所述增强子元件包含与选自于由以下序列所组成的组中的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列：SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：38和/或SEQ ID NO：39。4.如权利要求2所述的核酸序列，其中，所述增强子元件包含选自于由以下所组成的组的基因的增强子元件：Kell金属内肽酶(KEL)；5'氨基乙酰丙酸合酶2(ALAS2)；和血型糖蛋白A(GYPA)。5.如权利要求1
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4中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列包含用于至少一个HSC限制性miRNA的至少一个miRNA结合位点。6.如权利要求1
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5中任一项所述的核酸序列，其中，所述用于至少一个HSC限制性miRNA的至少一个miRNA结合位点选自于由用于以下的miR结合位点所组成的组：miR10aT、miR125、miR155、miR130aT、miR142T、miR196bT、miR99、miR126miR126、miR181、miR193、miR223T、miR542和let7e。7.如权利要求1
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6中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列包含至少一个造血增强子元件以及用于至少一个HSC限制性miRNA的至少一个miRNA结合位点。8.如权利要求1
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7中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列进一步包含：a.异源5'UTR，所述异源5'UTR包含：i.除GATA1以外的造血转录因子的5'UTR序列，ii.至少20个核苷酸的序列，和/或iii.1
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25个上游密码子uAUG；和/或b.造血增强子微小基因。9.一种核酸序列，所述核酸序列包含：a.5'UTR，所述5'UTR包含：i.除GATA1以外的造血转录因子的5'UTR序列，ii.至少20个核苷酸的序列，和/或iii.1
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25个上游密码子uAUG；b.编码GATA结合因子1(GATA1)多肽的序列。10.如权利要求1
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9中任一项所述的核酸序列，其中，所述5'UTR包含选自于由以下所组成的组的基因的5'UTR：Runt相关转录因子1(RUNX1)、LIM Domain Only 2(LMO2)或ETS变体6(ETV6)。11.如权利要求1
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10中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列进一步包含至少一个造血增强子元件、用于HSC限制性miRNA的miRNA结合位点和/或造血增强子微小基因(G1HEM)。12.一种核酸序列，所述核酸序列包含a.造血增强子微小基因(G1HEM)；b.编码GATA结合因子1(GATA1)多肽的序列。
13.如权利要求12所述的核酸序列，其中，所述造血增强子微小基因(mG1HEM)包含与核苷酸序列SEQ ID NO：13具有至少80％同源性的序列。14.如权利要求12
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13中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列进一步包含5'UTR、和/或至少一个造血增强子元件、和/或用于HSC限制性miRNA的至少一个miRNA结合位点，所述5'UTR包含：i.除GATA1以外的造血转录因子的5'UTR序列；ii.至少20个核苷酸的序列；和/或iii.1
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25个上游密码子uAUG。15.如权利要求14所述的核酸序列，其中，所述除GATA1以外的造血转录因子的5'UTR序列为选自于由以下所组成的组的基因的5'UTR序列：Runt相...

【专利技术属性】
技术研发人员：维杰，
申请(专利权)人：儿童医疗中心有限公司，
类型：发明
国别省市：