新的AAV文库制造技术

本发明专利技术提供了一种AAV文库，其包含具有对应于AAV8的第585至597或598位氨基酸或AAV9的第583至595或596位氨基酸的氨基酸序列的AAV变体，并且还提供了其多核苷酸、宿主细胞。本发明专利技术还提供了一种产生和筛选AAV文库的方法及其用途。用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新的AAV文库
[0001]与相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年10月16日提交的PCT申请号PCT/CN2019/111527的利益和优先权，所述申请的全部内容为所有目的通过参考并入本文。


[0003]本专利技术涉及基因疗法，特别是涉及腺相关病毒(AAV)和AAV文库。

技术介绍

[0004]已显示，转导效率和组织趋向性由AAV衣壳决定。衣壳在从与细胞表面受体的初始结合到细胞内转运和进入细胞核的整个病毒生命周期中发挥作用，而这些过程都决定了AAV进行基因转移的能力。基于AAV衣壳文库的筛选已被用于选择具有增强的转导效率和对靶细胞和组织的特异性的AAV衣壳。
[0005]所述方法包括遗传多样化以产生文库，以及能够富集有助于实现用户限定的目标的关键突变或基序的重复的多轮筛选或选择。对于AAV来说，这种方法包括产生病毒粒子文库，其含有具有很大遗传多样性的cap开放阅读框(ORF)中的突变。然后向所述AAV文库施加选择压力，以促进能够在所述压力下存活的变体的出现，然后将其回收并作为富集的子文库用于下一轮选择。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种AAV文库，其包含大量AAV变体，其中每个AAV变体包含含有一个或多个氨基酸替换的变体AAV衣壳蛋白，所述衣壳蛋白包含对应于天然AAV 8或AAV9衣壳蛋白的VR VIII区的替换氨基酸序列。2.权利要求1所述的AAV文库，其中所述衣壳蛋白在对应于SEQ ID NO：1的第585至597或585至598位氨基酸的氨基酸处包含替换氨基酸序列，或在对应于SEQ ID NO：43的第583至595或583至596位氨基酸的氨基酸处包含替换氨基酸序列。3.权利要求2所述的AAV文库，其中所述AAV变体是AAV血清型8。4.权利要求2所述的文库，其中在所述氨基酸处的替换序列对应于SEQ ID NO：1的第585至598位氨基酸：式I：X1X2X3X4X5X6X7X8X9X
10
X
11
X
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X
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X
14
，其中X1是Asn或Tyr，X2是Leu或Asn或Gln或Lys或His或Phe，X3是Gln或Asn，X4是Gln或Asn或Ser或Ala或Asp或Gly，X5是Gln或Thr或Ala或Gly或Ser或Asn，X6是Asn或Ala或Ser或Asp或Thr或Gln，X7是Thr或Ser或Ala或Arg或Glu或Gly，X8是Ala或Gln或Asp或Gly或Arg或Thr，X9是Pro或Ala或Thr，X
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是Gln或Thr或Ala或Ile或Ser或Asp，X
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是Ile或Ala或Thr或Val或Thr或Ser或Tyr，X
12
是Gly或Gln或Ser或Ala或Glu，X
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是Thr或Ala或Leu或Asp或Ser或Asn或Val或Trp或Met，X
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是Val或Asp，所述序列不包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列。5.权利要求3或4所述的文库，其中所述AAV变体包含选自SEQ ID NO：3
‑
42的替换序列。6.权利要求2所述的AAV文库，其中所述AAV变体是AAV血清型9。7.权利要求2所述的AAV文库，其中在所述氨基酸处的替换序列对应于SEQ ID NO：43的第583至596位氨基酸：式I：X1X2X3X4X5X6X7X8X9X
10
X
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X
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X
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X
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，其中X1是Asn或Tyr，X2是L...

【专利技术属性】
技术研发人员：冀群升，陆渊，林卿，陈意雄，
申请(专利权)人：上海药明康德新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：