利伐沙班中间体Ⅲ中杂质(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的检测方法技术

技术编号:32707947 阅读:20 留言:0更新日期:2022-03-20 08:03
本发明专利技术公开了利伐沙班中间体Ⅲ中杂质(S)

【技术实现步骤摘要】
利伐沙班中间体Ⅲ中杂质(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析
,涉及利伐沙班中间体Ⅲ中杂质(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的检测方法,具体涉及4-(4-((5S)-5-(氨基甲基)-2-氧代-1,3-噁烷基-3-基)苯基)吗啉-3-酮盐酸盐中基因毒性杂质(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的检测方法。

技术介绍

[0002]利伐沙班由拜耳(Bayer)和杨森(Janssen)联合开发,首先于2008年9月15日获加拿大卫生部批准上市,然后于2008年9月30日获欧洲药物管理局(EMA)批准上市,又于2011年7月1日获美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市。利伐沙班是一种选择性凝血因子Xa抑制剂。它既能够抑制单独的凝血因子Xa,也能抑制结合在凝血酶原复合物上面的凝血因子Xa。利伐沙班对血小板聚集没有直接效果,但是对由凝血酶引起的血小板聚集有间接作用。通过抑制凝血因子Xa,利伐沙班降低凝血酶的生成。
[0003]4-(4-((5S)-5-(氨基甲基)-2-氧代-1,3-噁烷基-3-基)苯基)吗啉-3-酮盐酸盐作为合成利伐沙班的关键中间体(以下简称利伐沙班中间体III),其杂质控制是保证利伐沙班安全性和有效性的重要因素之一,因此确定利伐沙班中间体Ⅲ中基因毒性杂质(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的检测方法具有重要意义。
[0004](S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐是在制备利伐沙班中间体Ⅲ过程中的降解产物,且降解产物无紫外吸收,因此如何准确测定基因毒性杂质(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐成为一个亟待解决的问题。
[0005]利伐沙班中间体Ⅲ及(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的结构式分别为:
[0006][0007]在现行版各国药典和文献中均未收载(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐相关的检测方法。为了有效分析药品质量,保证用药安全,需开发利伐沙班中间体Ⅲ中基因毒性杂质(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的检测方法,该方法需有较高的灵敏度,且(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐与相邻峰之间应能完全分离。

技术实现思路

[0008]有鉴于此,根据利伐沙班中间体Ⅲ及(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的结构特征,本专利技术的目的在于提供一种利伐沙班中间体Ⅲ中基因毒性杂质(S)-1-氨基-3-氯-2-丙
醇盐酸盐的检测方法。该方法首次将柱前在线衍生化的方法运用于利伐沙班中间体Ⅲ的检测中,以OPA作为衍生化试剂,硼酸盐作为缓冲液,采用高效液相色谱法,以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱,以磷酸氢二钾水溶液:乙腈为流动相,能对(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的残留浓度进行有效测定和控制,该方法专属性强,灵敏度高,方便快速、准确度高,对保证利伐沙班的安全性和可靠性,具有重要意义。
[0009]本专利技术的目的可通过以下技术方案实现:
[0010]一种4-(4-((5S)-5-(氨基甲基)-2-氧代-1,3-噁烷基-3-基)苯基)吗啉-3-酮盐酸盐中基因毒性杂质(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的检测方法,包括在进样前以邻苯二甲醛为衍生化试剂,硼酸盐为缓冲液,对供试品溶液或对照品溶液进行柱前在线衍生化;再采用高效液相色谱法检测衍生化物。
[0011]作为本专利技术的一种优选,所述邻苯二甲醛浓度为1~20mg/ml,优选10mg/ml;硼酸盐的pH值为8~11,优选10.2,所述的柱前在线衍生化方法为:吸取硼酸盐及待检测样品适量,混合液在清洗口充分混合,等待0.5~1min,吸取OPA与混合液在清洗口充分混合,等待0.5~1min,进样。
[0012]作为本专利技术的进一步优选,硼酸盐缓冲液取样量为0μl~8.0μl,优选4μl;邻苯二甲醛溶液取样量为2.0μl~8.0μl,优选4.0μl;待测样品或对照溶液的取样量为10~20μl,优选15μl。
[0013]作为本专利技术的一种优选,所述的高效液相色谱法的检测条件为:检测器:高效液相色谱仪-紫外可见光检测器;色谱柱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶;柱温为25℃~45℃,优选35℃;流动相为磷酸氢二钾水溶液:乙腈,流速为0.6ml/min~1.6ml/min,优选1.4ml/min。
[0014]作为本专利技术的进一步优选,所述的磷酸氢二钾水溶液的浓度为0.005mol/L~0.015mol/L、pH值为4.0~9.0,其中浓度优选0.01mol/L、pH优选6.5。
[0015]作为本专利技术的更进一步优选,所述的流动相中磷酸氢二钾水溶液与乙腈的比例为70:30~90:10,优选83:17。
[0016]作为本专利技术的进一步优选,所述的检测方法,包含以下步骤:
[0017]1)称取(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐适量,制备对照品溶液;
[0018]2)称取待检测的4-(4-((5S)-5-(氨基甲基)-2-氧代-1,3-噁烷基-3-基)苯基)吗啉-3-酮盐酸盐适量,制备供试品溶液;
[0019]3)取待检测的对照品溶液和供试品溶液,以邻苯二甲醛为衍生化试剂,硼酸盐为缓冲液,进行柱前在线衍生化;
[0020]4)采用高效液相色谱法分别对所述的对照品溶液、供试品溶液进行检测;检测条件为:
[0021]检测器:高效液相色谱仪-紫外可见光检测器;色谱柱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶;柱温为25℃~45℃,流动相为磷酸氢二钾水溶液:乙腈=70:30~90:10,流速为0.6ml/min~1.6ml/min,等度洗脱,其中,所述的磷酸氢二钾水溶液的浓度为0.005mol/L~0.015mol/L、pH值为4.0~9.0。
[0022]作为本专利技术的进一步优选,所述的高效液相色谱法的柱温为35℃;流动相为磷酸氢二钾水溶液:乙腈=83:17,流速为1.4ml/min。
[0023]结果计算:供试品溶液中如有(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐,按外标法以峰面积计算。
[0024]本专利技术的有益效果在于:
[0025](1)本专利技术首次将柱前在线衍生化的方式运用于利伐沙班中间体Ⅲ的检测中,以OPA作为衍生化试剂,硼酸盐作为缓冲液,样品前处理方式操作简单,检测具有高灵敏、快速有效、准确度高等特点,容易控制;
[0026](2)本专利技术提供的一种利伐沙班中间体Ⅲ中基因毒性杂质(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的检测方法,实现了杂质的有效控制,确保了产品的质量,并最终确定了产品的安全有效。
附图说明
[0027]图1为空白溶剂的高效液相色谱图;
[0028]图2为重复性试验中灵敏度溶液的高效液相色谱图;
[0029]图3为重复性试验中系统适用性溶液的高效液相色谱图;
[0030]图4为重复性试验中对照品溶液的高效液相色谱图;
[0031]图5为重复性试验中供试品溶液的高效液相色谱图;
[00本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种4-(4-((5S)-5-(氨基甲基)-2-氧代-1,3-噁烷基-3-基)苯基)吗啉-3-酮盐酸盐中基因毒性杂质(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的检测方法,其特征在于,包括在进样前以邻苯二甲醛为衍生化试剂,硼酸盐为缓冲液,对供试品溶液或对照品溶液进行柱前在线衍生化;再采用高效液相色谱法检测衍生化物。2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述邻苯二甲醛浓度为1~20mg/ml,优选10mg/ml;硼酸盐的pH值为8~11,优选10.2,所述的柱前在线衍生化方法为:吸取硼酸盐及待检测样品适量,混合液在清洗口充分混合,等待0.5~1min,吸取OPA与混合液在清洗口充分混合,等待0.5~1min,进样。3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,硼酸盐缓冲液取样量为0μl~8.0μl,优选4μl;邻苯二甲醛溶液取样量为2.0μl~8.0μl,优选4.0μl;待测样品或对照溶液的取样量为10~20μl,优选15μl。4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述的高效液相色谱法的检测条件为:检测器:高效液相色谱仪-紫外可见光检测器;色谱柱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶;柱温为25℃~45℃,优选35℃;流动相为磷酸氢二钾水溶液:乙腈,流速为0.6ml/min~1.6ml/min,优选1.4ml/min。5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述的磷酸氢...

【专利技术属性】
技术研发人员:孙杨张艳芬丁银花陈爱军
申请(专利权)人:南京恒生制药有限公司
类型:发明
国别省市:

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