一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法，包括以下步骤：A、选取广玉兰花的茎段部位作为外植体；B、对外植体进行消毒处理，得到除菌外植体；C、对除菌外植体进行愈伤组织诱导培养，得到初代广玉兰花愈伤组织；诱导培养时使用的诱导培养基包括以下组分：MS培养基、2,4D、6

【技术实现步骤摘要】
一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种广玉兰花组织，特别是一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法。

技术介绍

[0002]广玉兰(Magnolia grandiflora Linn)系木兰科木兰属乔木树种，其醇提物中的主要成分为黄酮，黄酮类物质是一种优质的抗氧化剂，可有效清除机体代谢过程中所产生的自由基。广玉兰花提取物的总黄酮中含有花青素，该物质可以有效的降低油脂性过氧化物的溢出，实验表明，花青素还对于细胞的衰老具有延缓作用，是优质的抗衰老原料。另外，广玉兰花黄酮还具有明显的扩张血管和降压作用，并对血小板聚集及血栓形成起抑制作用。广玉兰花提取物是一种可广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。广玉兰花挥发油是一种植物挥发油，由广玉兰花为原料制得。该提取物不仅具有较强的抗氧化活性，同时也兼具抗菌活性，另外由于广玉兰花提取物具有一定的香气，作为化妆品原料添加到配方之中，也可为调香剂而应用。因此广玉兰花挥发油同样也是一种非常适合应用于化妆品领域的植物原料。
[0003]广玉兰花所属的木兰科植物，是目前自然界中的稀缺资源，该植物在野生条件下的有性繁殖成功率极低，另外由于环境的变化以及人类过度的开采利用，这些因素都导致了该资源极其匮乏的现状，上述现状限制了玉兰花在化妆品领域的大规模应用。因此，现有的技术存在着玉兰花应用受限制的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于，提供一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法。本专利技术具有能够有效提高玉兰花在化妆品领域应用的特点。
[0005]本专利技术的技术方案：一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法，包括以下步骤：
[0006]A、选取广玉兰花的茎段部位作为外植体；
[0007]B、对外植体进行消毒处理，得到除菌外植体；
[0008]C、对除菌外植体进行愈伤组织诱导培养，得到初代广玉兰花愈伤组织；诱导培养时使用的诱导培养基包括以下组分：MS培养基、2,4D、6
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BA、NAA、肽黄素和蔗糖；
[0009]D、对广玉兰花愈伤组织进行继代培养，得到广玉兰花愈伤组织；继代培养时使用的培养基包括以下组分：MS培养基、6
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BA、NAA、VC和蔗糖。
[0010]前述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法中，诱导培养时使用的诱导培养基中：2,4D为4mg/L；6
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BA为1mg/L；NAA为4mg/L；肽黄素为0.1mg/L；蔗糖为30g/L。
[0011]前述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法中，继代培养时使用的培养基中：6
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BA为1mg/L；NAA为4mg/L；VC为500mg/L；蔗糖为30g/L。
[0012]前述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法中，所述广玉兰花的茎段部位为12月采摘的广玉兰花的茎段部位。
[0013]前述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法中，以广玉兰花愈伤组织作为提取
原料，采用超声提取法提取得到高黄酮含量的广玉兰花提取物；超声提取时所用到的提取溶剂为60
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70％丁二醇，料液比为1：20～50，提取时间为10
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30min，提取温度为35℃
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45℃。
[0014]前述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法中，超声提取时的提取溶剂为70％丁二醇，料液比1：45，提取时间20min，提取温度40℃。
[0015]前述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法中，使用生长旺盛且无褐化现象的广玉兰花愈伤组织作为原料，对广玉兰花愈伤组织进行干燥处理，然后通过超临界CO2法萃取制备得到挥发油；萃取时，温度为40～50℃，压力为30～50MPa，静态萃取时间为80～100min，动态萃取时间为90～110min，CO2流速为2～3mL/min。
[0016]前述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法中，对广玉兰花愈伤组织进行干燥处理时采用的方式为自然风干、烘干或冻干。
[0017]前述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法中，消毒处理的具体过程为：
[0018]1)将外植体置于烧杯中，使用无菌水浸泡1d；
[0019]2)使用5％NaClO溶液充分浸泡该外植体，摇摆震荡30min进行外植体的表面除菌；
[0020]3)将5％NaClO溶液充分除菌后的外植体整体转入无菌工作台，取出外植体，使用无菌水冲洗干净；
[0021]4)浸泡入75％乙醇中30s，取出后使用无菌水冲洗1min，之后重复两次该操作；
[0022]5)然后将使用75％乙醇处理后的外植体浸入0.1％HgCl2中10min，并用无菌水震荡冲洗5min，重复三次，得到除菌外植体。
[0023]与现有技术相比，本专利技术通过合理选择广玉兰花外植体，并针对广玉兰花外植体依次进行消毒处理、愈伤组织诱导培养和继代培养，对诱导培养方法及培养基进行合理的优化改良，研发出可高效率制备及富集广玉兰花愈伤组织的技术，成功获得了高诱导率的广玉兰花愈伤组织诱导技术，使用此方法可有效获得生长旺盛、总黄酮含量高且无菌的广玉兰花愈伤组织；通过在诱导培养基中添加肽黄素作为细胞保护剂，提高诱导效率；通过在继代培养基中添加VC，作为抗氧化剂，可以有效的防止褐化。与此同时，使用该愈伤组织，可制备出高质量的广玉兰花提取物及挥发油，对比原植物，经由本专利技术愈伤组织制得的具有高黄酮含量的醇提取物及更高抗氧化活性及抑菌活性的挥发油，易于应用于化妆品中。综上所述，本专利技术具有能够有效提高玉兰花在化妆品领域应用的特点。
具体实施方式
[0024]下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不作为对本专利技术限制的依据。
[0025]实施例1。一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法，包括以下步骤：
[0026]A、选取广玉兰花的茎段部位作为外植体；
[0027]B、对外植体进行消毒处理，得到除菌外植体；
[0028]C、对除菌外植体进行愈伤组织诱导培养，得到初代广玉兰花愈伤组织；诱导培养时使用的诱导培养基包括以下组分：MS培养基、2,4D、6
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BA、NAA、肽黄素和蔗糖；
[0029]D、对广玉兰花愈伤组织进行继代培养，得到广玉兰花愈伤组织；继代培养时使用的培养基包括以下组分：MS培养基、6
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BA、NAA、VC和蔗糖。
[0030]诱导培养时使用的诱导培养基中：2,4D为4mg/L；6
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BA为1mg/L；NAA为4mg/L；肽黄素为0.1mg/L；蔗糖为30g/L。
[0031]继代培养时使用的培养基中：6
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BA为1mg/L；NAA为4mg/L；VC为500mg/L；蔗糖为30g/L。
[0032]所述广玉兰花的茎段部位为12月采摘的广玉兰花的茎段部位。
[0033]以广玉兰花愈伤组织作为提取原料，采用超声提取法提取得到高黄酮含量的广玉兰花提取物；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、选取广玉兰花的茎段部位作为外植体；B、对外植体进行消毒处理，得到除菌外植体；C、对除菌外植体进行愈伤组织诱导培养，得到初代广玉兰花愈伤组织；诱导培养时使用的诱导培养基包括以下组分：MS培养基、2,4D、6
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BA、NAA、肽黄素和蔗糖；D、对广玉兰花愈伤组织进行继代培养，得到广玉兰花愈伤组织；继代培养时使用的培养基包括以下组分：MS培养基、6
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BA、NAA、VC和蔗糖。2.根据权利要求1所述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法，其特征在于：诱导培养时使用的诱导培养基中：2,4D为4mg/L；6
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BA为1mg/L；NAA为4mg/L；肽黄素为0.1mg/L；蔗糖为30g/L。3.根据权利要求1所述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法，其特征在于：继代培养时使用的培养基中：6
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BA为1mg/L；NAA为4mg/L；VC为500mg/L；蔗糖为30g/L。4.根据权利要求1所述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法，其特征在于：所述广玉兰花的茎段部位为12月采摘的广玉兰花的茎段部位。5.根据权利要求1所述的一种玉兰花愈伤组织培养物的制备方法，其特征在于：以广玉兰花愈伤组织作为提取原料，采用超声提取法提取得到高黄酮含量的广玉兰花提取物；超声提取时所用到的提取溶剂为60
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70％丁二醇，料液比为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张大勇，毕永贤，孔德承，周浩淼，李昊，杜雨涵，胡雪情，
申请(专利权)人：浙江宜格企业管理集团有限公司，
类型：发明
国别省市：