一种与肿瘤相关的长链非编码RNA及其cDNA和应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，公开了一种与肿瘤相关的长链非编码RNA、其cDNA和应用。该长链非编码RNA或者其cDNA能够作为肿瘤分子标志物，或者药物的靶点，可用来调控MYB基因的表达，并调控白血病细胞的增殖，可作为白血病检测的标志物和治疗的靶点。测的标志物和治疗的靶点。测的标志物和治疗的靶点。

【技术实现步骤摘要】
一种与肿瘤相关的长链非编码RNA及其cDNA和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种与肿瘤相关的长链非编码RNA、其cDNA和应用。

技术介绍

[0002]MYB是一种原癌基因和重要的转录因子，在细胞的增殖、分化、凋亡等重要生命过程和多种疾病中发挥重要作用。现有的研究表明，MYB转录失调或突变可诱发癌变，主要为白血病，包括急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病 (CML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)等。在人的T淋巴细胞白血病病人的基因组中发现，MYB基因存在基因转座及拷贝数增加。此外，在人的结直肠癌和乳腺癌中也发现MYB的表达显著升高。
[0003]已有研究发现，MYB上游存在增强子元件，可以与MYB启动子空间上靠近并形成DNA
‑
loop环，并通过募集转录因子和结构蛋白远端调控MYB的表达。因此，调控MYB的表达量可能有助于治疗肿瘤，且MYB的转录受其上游区域的非编码区调控。
[0004]白血病的治疗方法多样，包括放化疗、干细胞移植以及免疫治疗等，这些治疗方法在一定程度上可以缓解病程，然而疾病的完全缓解率较低，且白血病还具有易复发的特点，这也增加了治疗难度。因此，寻找新的治疗靶点和治疗方法对白血病的治疗具有重要的意义。
[0005]长链非编码RNA(long non
‑
coding RNA，lncRNA)是指长度大于200nt，不翻译成多肽的RNA，lncRNA种类丰富，功能复杂，具有多种生物学特性。研究表明，lncRNA参与了X染色体沉默、基因组印记以及染色质修饰、转录激活、转录干扰等多种重要的调控过程。多种lncRNA在人类癌细胞中异常表达，与癌症的发生、发展以及转移密切相关。因此，lncRNA可能成为白血病的治疗靶点和生物标志物，深入研究lncRNA在白血病中的作用及机制有望为白血病的诊断及治疗提供新方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在提供一种与肿瘤相关的长链非编码RNA及其cDNA，并用来调控MYB的表达，将其用作肿瘤尤其是白血病检测的标志物和治疗靶点。
[0007]本专利技术的技术方案为：
[0008]一种与肿瘤相关的长链非编码RNA(简称MYB
‑
34KAS)及其cDNA，长链非编码RNA由MYB基因上游34kb区域转录，cDNA的核苷酸序列包含SEQ IDNo.1所示的序列。
[0009]优选的，所述长链非编码RNA的cDNA为SEQ ID No.1所示核苷酸序列。
[0010]用于扩增上述长链非编码RNA或者其cDNA的引物，其上游引物和下游引物，分别包括SEQ ID No.2和SEQ ID No.3的序列；优选的，其上游引物和下游引物分别如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。
[0011]上游引物(SEQ ID No.2)：5
′‑
atgggagagaaactcagaacatttc
‑3′
；
[0012]下游引物(SEQ ID No.3)：5
’‑
ttaaattgtttattgttctctgttacatttaaaatg
‑3’
[0013]一种检测前述长链非编码RNA的表达丰度或者其cDNA序列的试剂盒，含有上述扩增引物。
[0014]一种重组载体或者转染载体，含有上述长链非编码RNA的cDNA序列，能够过表达或者敲降上述长链非编码RNA或者其cDNA。
[0015]重组载体为含有上述长链非编码RNA的cDNA序列的质粒，可以是过表达重组质粒或者敲降重组质粒。
[0016]重组载体的构建方法为：RACE技术扩增出cDNA全长序列后，连接到载体上，经过测序验证后，进行酶切位点PCR反应将cDNA全长序列从载体上转移到过表达质粒或敲降质粒上。
[0017]过表达重组质粒的构建方法为：RACE技术扩增出cDNA全长序列后，连接到T载体上，经过测序验证后，进行酶切位点PCR反应将cDNA全长序列从T 载体上转移到过表达载体pLVX
‑
IRES
‑
Neo上。
[0018]用于构建过表达重组质粒的引物，其序列如下：
[0019]EcoRI
‑
F:5
′‑
ggaattcatgggagagaaactcagaacatttc
‑3′
[0020]XbaI
‑
R:5
′‑
gactagtttaaattgtttattgttctctgttacatttaaaatg
‑3[0021]用于构建敲降重组质粒的引物序列如下所示：
[0022]shRNA
‑
F：5
’‑
ccgggagggaacaatatggaattatctcgagataattccatattgttccctctttttg
‑3’
[0023]shRNA
‑
R：5
’‑
aattcaaaaagagggaacaatatggaattatctcgagataattccatattgttccctc
‑3’
[0024]构建敲降重组质粒时，选用的载体为pLKO.1
‑
TRC cloning质粒；构建过表达重组载体时，选用的载体为pLVX
‑
IRES
‑
Neo质粒。
[0025]转染载体包括病毒或重组菌；优选的，病毒为慢病毒。
[0026]上述重组载体或者转染载体能用来调控MYB基因的表达。
[0027]敲降或过表达载体转染到白血病细胞中，发现这种长链非编码RNA过表达时，会促进白血病细胞的增殖，提高MYB基因的转录和蛋白合成水平，及促进MYB基因的表达；而敲降则会限制抑制白血病细胞的增殖、迁移和侵袭，降低 MYB基因的表达水平。说明本专利技术的长链非编码RNA及其cDNA可作为分子标志物或靶点应用于肿瘤，尤其是白血病的检测治疗和药物开发，具有很好的临床意义。
[0028]上述重组载体或者转染载体，能够过表达或者敲降上述白血病相关的长链非编码RNA，对MYB的表达具有调控作用，并调控白血病细胞的增殖、迁移和侵袭。
[0029]因此，本专利技术的长链非编码RNA或者其cDNA可以用作肿瘤分子标志物或靶点，尤其是作为白血病的分子标志物或靶点。
[0030]所述的长链非编码RNA或者其cDNA，或者其重组载体或转染载体能够调控MYB基因表达水平。
[0031]所述的长链非编码RNA或者其cDNA，用于扩增的引物或者检测试剂盒或者其重组载体或转染载体，可用于制备或筛选治疗肿瘤的药物或者制备检测肿瘤的诊断试剂。优选的，所述的肿瘤为白血病。
[0032]上述与肿瘤相关的长链非编码RNA的全长序列可用RACE技术获取，步骤如下：
[0033](1)获取总RNA作为模板合成RACE第一链cD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与肿瘤相关的长链非编码RNA或者其cDNA，其特征在于，由MYB基因上游34kb区域转录，cDNA的核苷酸序列包括SEQ ID No.1所示的序列。2.权利要求1所述的长链非编码RNA或者其cDNA，其特征在于，cDNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。3.权利要求1或2所述的长链非编码RNA或者其cDNA在肿瘤分子标志物方面的应用。4.用于扩增权利要求1或2所述长链非编码RNA的cDNA的引物，其特征在于，包括上游引物和下游引物，核苷酸序列分别包括如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3的序列。5.权利要求4所述的引物，其特征在于，所述上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3的...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩兵社，张俊芳，王玉成，李梦佳，张泽辉，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：