一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，包括以下步骤：将蓝莓花青素粗提物通过大孔树脂进行湿法上柱，静置吸附，用蒸馏水洗脱，多糖检测，浓缩，用热蒸馏水溶解，搅拌下加乙醇，静置过夜，过滤收集沉淀，溶解成多糖溶液，再经脱色、离心过滤、脱蛋白、离心过滤，取上清液，湿法上样大孔树脂，用四种不同浓度的溶液通过柱层析色谱法进行梯度洗脱，分别收集各流分，分别用蒸馏水进行透析，透析袋内液分别减压浓缩并真空冷冻干燥，得到Fr

【技术实现步骤摘要】
一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法及应用


[0001]本专利技术属于农产品深加工
，尤其涉及一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法及应用。

技术介绍

[0002]蓝莓(Vacciniμmμliginosμm)，又称越桔或蓝浆果，属杜鹃花科(Ericaceae)越桔属(Vacciniμmspp.)落叶灌木植物，其果成熟后为蓝色，果味酸甜细腻，蓝莓中含有非常丰富的营养成分，被誉为“世界浆果之王”，果实中含有丰富的花青素、多糖、维生素、膳食纤维、蛋白质、脂肪、VA、VE、SOD等营养元素，其中蓝莓中花青素含量较高，花青素和多糖是蓝莓的主要功能性物质，花青素因具有独特的生理活性而被广泛研究。蓝莓果实中含有的活性物质具有抗衰老、缓解视疲劳、改善记忆力、抗氧化、抗癌症等功效。
[0003]蓝莓除了含有大量的花青素以外还含有大量的多糖，提取蓝莓花青素的同时也会附加提取蓝莓多糖，蓝莓花青素中的蓝莓多糖会影响蓝莓花青素干燥，降低蓝莓花青素纯度，从蓝莓花青素粗提物中分离蓝莓多糖，既提高了蓝莓原材料的利用率，也获得了除了蓝莓花青素外的活性物质蓝莓多糖。
[0004]近年来对蓝莓的研究不断深入，现代药理学研究表明蓝莓多糖具有抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、增强免疫、降低胆固醇等功效。目前，关于蓝莓有效成分提取的公开文献有一些，例如：
[0005]1、专利申请CN201910501440.8，公开了一种蓝莓花青素高选择性分离方法，包括如下步骤：(1)高选择性分离材料研制，利用表面修饰技术，制备对蓝莓花青素具有高选择性分离材料；(2)分离材料应用，基于制备的高选择性分离材料，利用柱色谱技术，纯化蓝莓提取物，制备高纯度花青素及蓝莓多糖。该方法可促进蓝莓资源开发利用和产业化生产，为蓝莓高值化、综合开发提供技术支撑。
[0006]2、专利申请CN201510954307.X，公开了一种蓝莓渣粗多糖的制备方法，该蓝莓渣粗多糖的制备方法包括的以下步骤：准备原料、热水处理两次、复合酶解处理、浓缩处理、脱色处理、醇析处理及冷干处理。本专利技术适当结合传统水提法及新技术复合酶解法，合理改进，既减少了多糖损失，相应的提高了提取率，又提高了多糖纯度，方便了后续多糖纯化过程，还具有工艺条件温和、低能耗、高效率的特点。
[0007]3、专利申请CN201510942429.7，公开了一种利用蓝莓植物茎叶制备多种组合提取物的方法，以蓝莓新鲜或干燥枝叶为原料，通过粗碎预处理，采用超声波或微波辅助进行乙醇提取，水提，酶水解，及大孔树脂吸附、膜分离等组合联提工艺，分步制备蓝莓原花青素、绿原酸、多糖等活性成分组合提取物。本专利技术适应原料范围较宽，生产过程物料循环利用，工艺绿色环保，资源利用率高，生产成本低，产品品质好。
[0008]4、专利申请CN201510470256.3，公开了一种提取蓝莓果实多种活性成分的方法，包括：将干燥粉碎的蓝莓果皮渣先酶水解，然后微波提取，固液离心分离，微孔滤袋精滤，合并滤液；滤液用超滤膜脱色除杂，再膜分离，将截留液真空浓缩，醇沉，干燥得蓝莓多糖提取
物；将超滤透析液上大孔树脂过柱吸附，再用乙醇洗脱解析，解析液纳滤膜分离、浓缩，截留液真空浓缩，冷冻干燥，得蓝莓花青素与原花青素组合提取物；将纳滤膜透析液过反渗透膜进一步分离脱水，截留液真空浓缩，喷雾干燥，得蓝莓鞣花酸提取物。本专利技术一种工艺可得蓝莓多糖、原花青素、花青素及鞣花酸等多种有效成分，提取物纯度较高，质量好，生产工艺绿色节能环保。
[0009]但是，现有技术提取得到的蓝莓多糖杂质较多，且分离纯化过程会加入大量有机物，分离纯化方法比较复杂，分离纯化后产品还会有有机物残留，且得到的蓝莓多糖纯度不高，影响产品品质。

技术实现思路

[0010]本专利技术为解决上述技术问题，提供了一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法及应用。
[0011]为了能够达到上述所述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0012]一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，包括以下步骤：
[0013](1)样品分离：将蓝莓花青素粗提物通过大孔树脂进行湿法上柱，静置吸附，然后用蒸馏水洗脱，采用苯酚
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硫酸法进行多糖检测，直至洗脱溶液无糖组分流出，再将蓝莓多糖洗脱液进行浓缩，获得蓝莓多糖浸膏；
[0014](2)醇沉：用热蒸馏水将步骤(1)的蓝莓多糖浸膏溶解，然后在搅拌状态下加入乙醇，静置过夜后，过滤，收集沉淀；
[0015](3)除杂：先用热蒸馏水将步骤(2)的沉淀溶解成多糖溶液，然后用活性炭对溶液脱色，离心过滤，得多糖上清液，再用木瓜蛋白酶对多糖上清液脱蛋白，离心过滤，取上清液，得到蓝莓多糖半成品；
[0016](4)纯化：将步骤(3)的蓝莓多糖半成品湿法上样于DEAE
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cellμloseDE
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52型大孔树脂，用四种不同浓度的溶液通过柱层析色谱法进行梯度洗脱，分别收集各流分，利用苯酚
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硫酸法跟踪检测洗脱液，直至无糖分流出，然后将各流分分别用蒸馏水进行透析，透析袋内液分别减压浓缩并真空冷冻干燥，得到Fr
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A1、Fr
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A2、Fr
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A3、Fr
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A4四种分离纯化的蓝莓多糖。
[0017]进一步地，在步骤(1)，所述蓝莓花青素粗提物与树脂的质量按照1：30湿法上柱，洗脱时间为60～65min；浓缩的温度为63～68℃。
[0018]进一步地，在步骤(2)，所述蒸馏水的温度为60～65℃；乙醇的质量分数为90％；所述静置过夜的温度为4℃；过滤是常压过滤。
[0019]进一步地，在步骤(3)，所述活性炭与多糖溶液的质量比＝1：1，脱色时间为120～130min。
[0020]进一步地，在步骤(3)，所述无色多糖溶液与木瓜蛋白酶的质量比＝50000～50500：1，脱蛋白的温度为50～55℃，时间为120～130min。
[0021]进一步地，在步骤(3)，所述离心过滤的转速为8000～8500r/min，离心时间为5min。
[0022]进一步地，在步骤(4)，所述四种不同浓度的溶液分别是浓度为0mol/L、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的NaCl溶液。
[0023]进一步地，在步骤(4)，所述梯度洗脱时溶液的流速为1.8～2.2mL/h。
[0024]进一步地，在步骤(4)，所述减压浓缩的温度为50℃；所述真空冷冻干燥的温度为
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55～
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50℃，真空度为0～100Pa。
[0025]进一步地，一种如上述所述的绿色分离纯化方法制得的蓝莓多糖在制备抗氧化药物、保健品或食品中的应用。
[0026]一、分离纯化后蓝莓多糖含量的测定
[0027]采用苯酚
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硫酸法检测分离纯化后蓝莓多糖(样品)，其原理在于多糖大分子在浓硫酸加入水中的迅速高温下，脱水生成糖醛及其衍生物。
[0028]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品分离：将蓝莓花青素粗提物通过大孔树脂进行湿法上柱，静置吸附，然后用蒸馏水洗脱，采用苯酚
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硫酸法进行多糖检测，直至洗脱溶液无糖组分流出，再将蓝莓多糖洗脱液进行浓缩，获得蓝莓多糖浸膏；(2)醇沉：用热蒸馏水将步骤(1)的蓝莓多糖浸膏溶解，然后在搅拌状态下加入乙醇，静置过夜后，过滤，收集沉淀；(3)除杂：先用热蒸馏水将步骤(2)的沉淀溶解成多糖溶液，然后用活性炭对溶液脱色，离心过滤，得多糖上清液，再用木瓜蛋白酶对多糖上清液脱蛋白，离心过滤，取上清液，得到蓝莓多糖半成品；(4)纯化：将步骤(3)的蓝莓多糖半成品湿法上样于DEAE
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52型大孔树脂，用四种不同浓度的溶液通过柱层析色谱法进行梯度洗脱，分别收集各流分，利用苯酚
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硫酸法跟踪检测洗脱液，直至无糖分流出，然后将各流分分别用蒸馏水进行透析，透析袋内液分别减压浓缩并真空冷冻干燥，得到Fr
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A1、Fr
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A2、Fr
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A3、Fr
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A4四种分离纯化的蓝莓多糖。2.根据权利要求1所述的一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，其特征在于：在步骤(1)，所述蓝莓花青素粗提物与树脂的质量按照1：30湿法上柱，洗脱时间为60～65min；浓缩的温度为63～68℃。3.根据权利要求1所述的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：李冰晶，罗丽平，王代波，赵景芳，刘国华，封天洪，
申请(专利权)人：贵州省生物研究所，
类型：发明
国别省市：