本发明专利技术提供了一种氯胺类衍生化试剂在双键位置鉴定中的应用，具体地，本发明专利技术提供了一种质谱法鉴定长链不饱和分子中双键位置的方法，其特征在于，所述的方法包括使用如下式I所示的化合物作为鉴定试剂。本发明专利技术的方法可以有效提高质谱对低浓度样品的检测能力，有利于保证方法的准确性。证方法的准确性。证方法的准确性。
【技术实现步骤摘要】
氯胺类衍生化试剂在双键位置鉴定中的应用
[0001]本专利技术涉及分析化学领域，具体地，本专利技术涉及一种氯胺类衍生物用于质谱学手段精准鉴定双键数目及位置的方法。
技术介绍
[0002]脂质在生命过程中发挥着举足轻重的作用，如作为生物体内细胞膜的支撑载体、为生命活动储存和补充能量，作为信号传导过程中的第二信使前体来源等。越来越多的证据表明，脂质的组成、浓度以及空间分布情况可以作为重要的生物系统功能指标，在疾病标志物发现、代谢水平分析等方面有着重要作用。近期研究表明，脂质在双键水平上的结构、含量差异，能够影响脂质与细胞膜上胆固醇以及蛋白质的相互作用，在动脉粥样硬化、神经退行性疾病、癌症等疾病中有着重要的作用。因此，需要发展一些能快速鉴定脂质双键位置的方法。
[0003]质谱具有快速的数据采集和分析能力，随着电喷雾质谱技术的发展，利用基于碰撞诱导解离的二级质谱技术，将质谱应用在脂质双键水平的精细结构分析受到越来越多的重视。这种方法可以直接通过提取物直接进样分析，无需色谱分离，被称作鸟枪质谱脂质分析。目前已经有几类基于质谱的方法鉴定C＝C双键的位置，如臭氧化裂解(OzID)、环氧化、PB衍生化分析。尽管这些方法有强大的功能，但对于复杂生物基质中脂质双键的分析时，仍需要解决两个问题：其一，对于精准结构的组成分析，尤其是多双键的不饱和脂质双键数目及位置的精准鉴定。其二，负离子模式下的低电离效率和低灵敏度。
[0004]综上所述，本领域尚缺乏质谱响应好，灵敏度高的鉴定分子中双键位置的方法。
技术实现思路
<br/>[0005]基于此，我们专利技术了一种氯胺类衍生化试剂在双键位置鉴定方面的新方法。该方法利用双键发生衍生化反应，将双键直接转化为氮杂环化合物。所述衍生化产物的产物质谱响应好，灵敏度高，二级质谱具有特征断裂，能够在质谱中诊断双键的位置，实现双键位置异构体的鉴定。
[0006]本专利技术的第一方面，提供了一种质谱法鉴定长链不饱和分子中双键位置的方法，所述的方法包括使用如下式I所示的化合物作为鉴定试剂：
[0007][0008]其中，环Y选自下组：苯基、萘基；
[0009]R为一个或多个选自下组的取代基：氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯氧基，C1-C4卤代烷基、卤原子；
[0010]X选自下组：氢、氯、溴、碘；
[0011]M选自下组：氢、金属离子、铵离子、烷基铵离子、吡啶阳离子。
[0012]在另一优选例中，所述的式I化合物选自下组：N-氯-苯磺酰胺钠盐三水合物(氯胺B)、N-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺T)，较佳地为N-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺T)。
[0013]在另一优选例中，所述的方法包括步骤：
[0014](1)在惰性溶剂中，用待测底物、式I化合物和任选的卤化物混合进行衍生化反应，得到经衍生化的样品液；
[0015](2)对所述经衍生化的样品液在正离子模式下或负离子模式下进行质谱分析，得到质谱的谱图及谱峰数据；
[0016](3)对所述经衍生化的样品液在正离子模式下或负离子模式下进行二级质谱分析，得到质谱的谱图及谱峰数据；
[0017](4)根据一级的分子量、二级质谱特征的断裂方式，推导得到样品中待测物中分子所含有的双键数目及位置信息。
[0018]在另一优选例中，所述的步骤(2)和/或(3)在正离子模式下进行。
[0019]在另一优选例中，所述的步骤(3)中，二级质谱的碰撞能为15-35eV，较佳地，15-20eV，更佳地，20-30eV，最佳地，30-35eV。
[0020]在另一优选例中，当所述式I化合物中的M或X为氢时，所述的步骤(1)在碱存在下进行，且所述的碱选自下组：醇钠、醇钾、碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化钾、1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)、胍、三甲基胍，或其组合。
[0021]在另一优选例中，当所述式I化合物中的M或X为氢时，所述的步骤(1)在氧化剂存在下进行，且所述的氧化剂选自下组：次氯酸钠、次溴酸钠、次氯酸、次溴酸、氯、溴、碘苯二乙酸、碘苯二(三氟乙酸)。
[0022]在另一优选例中，所述的卤化物选自下组：卤素单质、有机三卤化物、有机碘化物、金属卤化物。
[0023]在另一优选例中，所述的有机三卤化物选自下组：吡啶三溴化氢、苄基三甲基三溴化铵、四丁基三溴化铵、四甲基三溴化铵、苯基三甲基三溴化铵、三碘化钠、三碘化钾，较佳地，吡啶三溴化氢，更佳地，苯基三甲基三溴化铵，最佳地，苄基三甲基三溴化铵。
[0024]在另一优选例中，所述的有机碘化物选自下组：碘苯二乙酸、碘苯二(三氟乙酸)，较佳地，碘苯二乙酸。
[0025]在另一优选例中，所述的金属卤化物选自下组：碘化钠、碘化钾、溴化钠、溴化钾。较佳地，溴化钠，更佳地，碘化钾，最佳地，碘化钠。
[0026]在另一优选例中，所述的卤化物选自下组：苯基三甲基三溴化铵、苄基三甲基三溴化铵、吡啶三溴化氢、苄基三甲基三溴化铵。
[0027]在另一优选例中，所述的惰性溶剂选自下组：乙腈、丙酮、四氢呋喃、甲基叔丁基醚、二氯甲烷、氯仿、水或其组合。
[0028]在另一优选例中，所述的步骤(1)中，所述的待测底物、式I化合物和任选的卤化物的摩尔比为1:0.8-1.5:0-0.5。
[0029]在另一优选例中，所述的待测底物、式I化合物和任选的卤化物的摩尔比为1:0.8-1.5:0.05-0.5。
[0030]在另一优选例中，所述的待测底物为多双键底物时，增加或不增加式I化合物和任选的卤化物用量不影响反应结果，所述的待测底物、式I化合物和任选的卤化物的摩尔比为1:0.8-10:0.05-0.5。
[0031]在另一优选例中，任选的卤化物选自下组：碘单质、碘化物、多碘化物。
[0032]在另一优选例中，足够量的式I化合物和任选的卤化物用量不影响反应结果。
[0033]在另一优选例中，所述的待测底物、式I化合物和任选的卤化物的摩尔比为1:10-10000:1-10000。
[0034]在另一优选例中，所述的长链不饱和分子为选自下组的分子：不饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸酯、不饱和脂肪醇、不饱和脂肪酰胺、不饱和脂肪醛、不饱和甘油酯、不饱和磷脂、非极性烯烃。
[0035]在另一优选例中，所述的长链不饱和分子为碳原子数为8-30的长链不饱和分子。
[0036]在另一优选例中，所述的长链不饱和分子含有多个不饱和度，较佳地，具有1-4个不饱和度。
[0037]应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
[0038]除特地说明，所有谱图和谱峰均在正离子模式的质谱条件下获得。
[0039]图1为本专利技术实施例1，芥酸22:1(n-9)，油酸乙酯18:1(n-9)，油酸酰胺18:1(n-9)，反油醇18:1(n-本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种质谱法鉴定长链不饱和分子中双键位置的方法，其特征在于，所述的方法包括使用如下式I所示的化合物作为鉴定试剂：其中，环Y选自下组：苯基、萘基；R为一个或多个选自下组的取代基：氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯氧基，C1-C4卤代烷基、卤原子；X选自下组：氢、氯、溴、碘；M选自下组：氢、金属离子、铵离子、烷基铵离子、吡啶阳离子。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的式I化合物选自下组：N-氯-苯磺酰胺钠盐三水合物(氯胺B)、N-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺T)，较佳地为N-氯-4-甲基苯磺酰胺钠盐(氯胺T)。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：(1)在惰性溶剂中，用待测底物、式I化合物和任选的卤化物混合进行衍生化反应，得到经衍生化的样品液；(2)对所述经衍生化的样品液在正离子模式下或负离子模式下进行质谱分析，得到质谱的谱图及谱峰数据；(3)对所述经衍生化的样品液在正离子模式下或负离子模式下进行二级质谱分析，得到质谱的谱图及谱峰数据；(4)根据一级的分子量、二级质谱特征的断裂方式，推导得到样品中待测物中分子所含有的双键数目及位置信息。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，当所述式I化合物中的M或X为氢时，所述的步骤(1)在碱存在...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭寅龙，章博，周博文，朱苏珍，曹宇奇，张立，张菁，
申请(专利权)人：中国科学院上海有机化学研究所，
类型：发明
国别省市：
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