一种抗结晶的肌酸激酶检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种抗结晶的肌酸激酶检测试剂盒及其制备方法。本发明专利技术所述肌酸激酶检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1与所述试剂R2中含有抗结晶组分，以体积百分数计，所述抗结晶组分的含量为2

【技术实现步骤摘要】
一种抗结晶的肌酸激酶检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及体外诊断
，具体涉及一种抗结晶的肌酸激酶检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]肌酸激酶(CK)是一种二聚体酶，具有四种同工酶形式：骨骼肌型(CK
‑
MM)、脑型(CK
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BB)、心肌型(CK
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MB)和线粒体型(CKm)。CK是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。在临床上，CK活性的检测主要用于诊断和监控心肌损伤、肌肉萎缩等疾病。在心肌损伤发生时，CK会从受损细胞中释放入血，使血清CK水平迅速提高，例如急性心肌梗死发生后4小时，血清中CK的活性开始升高，24小时达到高峰，3
‑
4日内恢复正常水平。
[0003]目前应用最为广泛的检测血清或血浆中CK活性的方法为IFCC推荐的方法，即磷酸肌酸底物法，该方法利用CK催化高能磷酸键在肌酸和ATP之间转换，生成磷酸肌酸和ADP的可逆反应，随后在葡萄糖、己糖激酶、葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶等作用下，引发NADP向NADPH的转化，使用生化分析仪检测340nm波长处吸光度的变化，可知被检测血清中的肌酸激酶的活性。反应方程式如下：
[0004][0005][0006][0007]由于肌酸激酶活性检测试剂反应原理要经过三步反应，试剂中含有底物、酶、活化剂、稳定剂、激活剂等多种组成成分，在生化检测试剂盒中组分数量几乎是最多的。<br/>[0008]目前临床使用的全自动生化分析仪一般采用2种吸取试剂方式：一种为吸量方式，一种为分注方式。在试剂吸量方式中，试剂针在几秒钟的时间内从针前端吸一定量的试剂注入反应杯，然后对针进行清洗，继而进行下一次吸取，这种方式试剂针每次与试剂接触的时间很短，清洗频繁。在分注方式中，仪器软管长期插入试剂瓶，从软管的另一端吐出试剂至反应杯，整个管路需要与试剂长期接触，除非进行仪器维护，日常反应过程中并不对管路进行清洗。

技术实现思路

[0009]专利技术人在将市面上常见的肌酸激酶检测试剂盒与分注方式的生化分析仪配套使用时，由于软管长期插入试剂瓶中，管路要与试剂长期接触，经常会在管路内外壁和压重块上形成结晶，晶块随着试剂流路进入仪器内部，影响正常检测，或造成管路堵塞，导致仪器受损。试剂在管道中结晶的现象在配方组分越多越复杂的试剂中越明显。在吸量方式的全自动生化分析仪上可以使用的肌酸激酶试剂盒，应用在分注方式的仪器上时，最短1周左右即会出现结晶。
[0010]结晶的出现非常影响检测结果，而临床科室在日常工作中，从收到样本到发出报告要求的时间很短，如果仪器出现结晶问题，则不得不拆卸模块进行手工疏通、清洁，一般需要1
‑
2天的时间才能恢复正常使用。因此，需要提供一种新的、可配套分注方式生化分析仪、具有抗结晶性能的肌酸激酶检测试剂盒以解决上述问题。
[0011]为了解决现有肌酸激酶检测试剂盒会存在堵塞生化分析仪管路的问题，本专利技术的目的是提供一种肌酸激酶活性检测试剂盒及其制备方法。
[0012]本专利技术提供的制备方法可以稳定获得一种既具有抗结晶性能，其他性能也优异(稳定性强、精密度高、准确度好)的肌酸激酶活性检测试剂盒，所述试剂盒可以同时适配试剂吸量方式和试剂分注方式的全自动生化分析仪，适合临床应用推广。
[0013]为了实现本专利技术的目的，本专利技术的技术方案如下：
[0014]本专利技术的第一方面提供一种抗结晶的肌酸激酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1与所述试剂R2中含抗结晶组分，以体积百分数计，所述抗结晶组分的含量为2
‰‑5‰
；所述抗结晶组分为吐温
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20、吐温
‑
60、吐温
‑
80、曲拉通X
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100、曲拉通X
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450、Span20、Span80中的一种或几种；
[0015]优选地，所述抗结晶组分为曲拉通X
‑
450、曲拉通X
‑
100、Span
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20或吐温
‑
20。
[0016]肌酸激酶试剂盒中组分极多，试剂中要添加每一步所应所需的底物和酶。酶不稳定，极易失活，试剂中应配备酶的保护成分。大部分肌酸激酶在血液中以非活性形式存在，试剂中需添加酶的激活剂，通常为镁离子以及含巯基的化合物，如N
‑
乙酰半胱氨酸、二硫苏糖醇、还原型谷胱甘肽等，但此类化合物溶液稳定性差，试剂需具备适宜pH的缓冲体系，形成还原型缓冲液。此外，血液中含中内源性腺苷酸激酶(AK)，可以催化ADP生ATP，导致肌酸激酶的检测结果升高，在试剂中需要加入一磷酸腺苷和五磷酸二腺苷，来抑制反应体系中的AK干扰。
[0017]在长期检测工作中，专利技术人发现，检测试剂盒各组分之间易发生同离子效应，即在两种或两种以上离子化合物溶质中含有同一种相同离子，会互相影响，易导致晶体析出；或盐析效应，即多种弱电解质、难容电解质或非电解质加入同一溶液中，能改变溶液的活度系数从而改变溶质的溶解度，溶解度降低时可能导致晶体析出。这些原因使得管路内外壁和压重块上形成结晶。
[0018]为了获得具备抗结晶性能且稳定性强、精密度高、准确度好的肌酸激酶检测试剂盒，本专利技术的产品在组分选择上在保障试剂性能优良的情况下最大程度避免了同离子效应和盐析效应发生的可能，同时添加了抗结晶组分，使溶液中其他组分更为稳定。
[0019]在抗结晶组分的选择过程中，考虑了表面活性剂，主要基于两点原因：一是由于表面活性剂分子中不同部分，分别对于两相亲和，分子排列在两相之间，使两相的表面相当于转入分子内部，从而降低了试剂表面张力和表面自由能。二是表面活性剂在水中形成胶束后，胶束提供了从非极性到极性全过渡的微环境，对各类物质均有不同程度的增溶作用。胶束内部为非极性或极性较小的区域，这使得原本不溶或微溶于水的有机化合物的溶解度显著增大，具有增溶作用。
[0020]然而，当表面活性剂与试剂中的酶以及生物样本中的肌酸激酶混合后，表面活性剂有可能影响酶的分子结构，进而对酶在反应环境下的催化活性和活性的动力学稳定性产生影响。离子型表面活性剂由于其静电及疏水的协同作用，其带电基团与酶分子之间强烈
作用，使酶活性被抑制、激活或使其构象发生变化而失活。非离子表面活性剂与酶分子之间仅存在氢键和疏水作用，抑制性较弱。并且即使是同类别的不同表面活性剂仍有差别。不同类型的表面活性剂对酶活性的影响各不相同，同种表面活性剂对不同种类酶的影响也不相同。这种影响与具体的酶分子结构有关，也与环境条件相关，表面活性剂与酶的相互作用也非常复杂，机理解释尚不统一，未形成系统理论。
[0021]由此可见，合适的表面活性剂对底物而言，是抗结晶剂、增溶剂；对酶而言，又可能是“激活剂”、“抑制剂”或“变性剂”。通过添加表面活性剂使试剂具备抗结晶性能，同时使溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗结晶的肌酸激酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其特征在于，所述试剂R1与所述试剂R2中含有抗结晶组分，以体积百分数计，所述抗结晶组分的含量为2
‰‑5‰
；所述抗结晶组分为吐温
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20、吐温
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60、吐温
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80、曲拉通X
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100、曲拉通X
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450、Span20、Span80中的一种或几种。2.根据权利要求1所述肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，以体积百分数计，还包括1
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5％甘露醇、1
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5％海藻糖、1
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5％甘氨酸、1
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5％牛血清白蛋白或1
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5％AES中的一种或多种。3.根据权利要求2所述肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中还含生物缓冲液、络合物、酶激活剂。4.根据权利要求3所述肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述生物缓冲液为咪唑缓冲液、Tris盐酸缓冲液或Good
’
s生物缓冲液中的一种；所述络合物为EDTA钠盐或EDTA钾盐；所述酶激活剂为硫酸镁、醋酸镁或氯化镁中的一种。5.根据权利要求4所述肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1成分浓度如下：10mM
‑
250mM生物缓冲液、20mM
‑
150mM还原剂、1％
‑
5％酶保护剂、1mM
‑
50mM离子络合物、2
‰‑5‰
抗结晶组分、6mM
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：金玲，
申请(专利权)人：中生北控生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：