一种冬瓜果面蜡粉基因的CAPS分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术属于分子标记辅助育种技术领域，具体涉及一种冬瓜果面蜡粉基因的CAPS分子标记及其应用，本发明专利技术公开的冬瓜果面蜡粉基因的CAPS分子标记，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，SEQ ID NO.1所示序列自5

【技术实现步骤摘要】
一种冬瓜果面蜡粉基因的CAPS分子标记及其应用


[0001]本专利技术属于分子标记辅助育种
，具体涉及一种冬瓜果面蜡粉基因的CAPS分子标记及其应用。

技术介绍

[0002]冬瓜(Benincasa hispida Cogn.)为葫芦科冬瓜属一年生草本植物，原产于我国南方和印度，全国各地均有栽培。冬瓜脆爽多汁，营养成分丰富，耐贮藏运输，耐热性强，是适于现代化农产品加工的良好原料，同时还具有利尿、清热、化痰、解渴等功效，在医药领域中也有着广泛的用途。
[0003]根据老熟冬瓜果面蜡粉的有无，可将冬瓜分为粉皮冬瓜和青皮冬瓜两种表型。不同地区对冬瓜类型的喜好不同，其中华南地区以青皮冬瓜为主，四川、江西、湖南等省份则以粉皮冬瓜为主。此外，冬瓜果面蜡粉在果实耐储性和抗病性等方面也发挥着重要的作用。可见，冬瓜果面蜡粉是冬瓜育种过程中的重要性状之一。
[0004]然而，由于果面蜡粉是冬瓜果实成熟期才显现的外观性状，因此在传统育种过程中，需要等到果实成熟期才能进行针对性选育，这种育种方法不仅耗时耗力，且效率低下。因而，有必要开发与冬瓜蜡粉性状紧密连锁的分子标记，以便于直接在育苗期进行大规模筛选，从而缩小育种群体，提高育种效率。

技术实现思路

[0005]为了克服上述现有技术的不足，本专利技术的首要目的是提供一种冬瓜果面蜡粉基因的CAPS分子标记，可用于冬瓜果面蜡粉表型的鉴定。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供用于扩增上述CAPS分子标记的引物，该引物能产生有蜡粉材料特异性标记和无蜡粉材料特异性标记(共显性标记)，重复性好，特异性强。
[0007]本专利技术的第三个目的是提供上述的CAPS分子标记，或者上述的CAPS分子标记引物在冬瓜果面蜡粉表型选育中的应用。
[0008]本专利技术的第四个目的是提供一种冬瓜果面蜡粉有无的鉴定方法。该方法具有准确、快速、成本低、鉴定周期短，操作简便等优势。
[0009]本专利技术的上述第一个目的是通过以下技术方案来实现的：
[0010]一种冬瓜果面蜡粉基因的CAPS分子标记，所述CAPS分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，SEQ ID NO.1所示序列自5
’
端起第1370位碱基为SNP位点，所述SNP位点为G或A。
[0011]本专利技术的上述第二个目的是通过以下技术方案来实现的：
[0012]用于扩增上述CAPS分子标记的引物，所述引物包括上游引物和下游引物。
[0013]优选地，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0014]本专利技术的上述第三个目的是通过以下技术方案来实现的：
[0015]上述的CAPS分子标记，或者上述的CAPS分子标记引物在冬瓜果面蜡粉表型选育中的应用。
[0016]本专利技术的上述第四个目的是通过以下技术方案来实现的：
[0017]一种冬瓜果面蜡粉有无的鉴定方法，包括以下步骤：
[0018]S1、以冬瓜基因组DNA为模板，采用权利要求2或3的CAPS分子标记引物进行PCR扩增，对PCR扩增产物酶切后进行电泳分析：
[0019]S2、当仅产生140bp、305bp的果面无蜡粉亲本特异性标记WAX
140+305
时，该冬瓜为果面无蜡粉冬瓜；当仅产生445bp的果面有蜡粉亲本特异性标记WAX
445
时，该冬瓜为果面有蜡粉冬瓜；当同时产生445bp的果面有蜡粉亲本特异性标记WAX
445
和140bp、305bp的果面无蜡粉籽亲本特异性标记WAX
140+305
时，该冬瓜为果面有蜡粉冬瓜。
[0020]本专利技术通过对电泳结果进行分析，该用于扩增所述CAPS分子标记的引物对能产生445bp的果面有蜡粉亲本P131特异性标记WAX
445
和140bp、305bp的无蜡粉亲本W3特异性标记WAX
140+305
。由于该标记为共显性标记，同时具有双亲本特异性条带的单株为杂合体。
[0021]因此，当CAPS分子标记引物对仅产生445bp的果面有蜡粉亲本特异性标记WAX
445
时，该冬瓜为果面有蜡粉冬瓜；当该分子标记引物对能同时产生445bp的果面有蜡粉亲本特异性标记WAX
445
和140bp、305bp的果面无蜡粉亲本特异性标记WAX
140+305
时，该冬瓜为果面有蜡粉冬瓜；当该分子标记引物对仅产生140bp、305bp的单边籽亲本特异性标记WAX
140+305
时，该冬瓜为果面无蜡粉冬瓜。
[0022]优选地，PCR扩增时，PCR反应体系包括1μL基因组DNA、2μL含Mg
2+
的10
×
PCRbuffer、1.5μL dNTPs、1μL上游引物、1μL下游引物、1U Taq酶，添加ddH2O至20μL。
[0023]进一步地，PCR反应体系包括1μL浓度为200ng
·
μL
‑1的基因组DNA、2μL含Mg
2+
的10
×
PCRbuffer、1.5μL浓度为2.5mM的dNTPs、1μL浓度为10mM的上游引物WAXS4
‑
CAPS1
‑
F(SEQ ID NO.2)、1μL浓度为10mM的下游引物WAXS4
‑
CAPS1
‑
R(SEQ ID NO.3)、1U Taq酶、添加ddH2O至20μL。
[0024]优选地，PCR扩增时，扩增程序为：94℃预变性3min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环后，72℃终延伸7min，4℃保存。
[0025]优选地，所述酶切为采用限制性内切酶Ava II进行酶切。
[0026]优选地，酶切体系包括10μL PCR扩增产物，1μL10
×
Buffer，1UAva II限制性内切酶，添加ddH2O至20μL；酶切条件为37℃酶切3小时。
[0027]优选地，所述冬瓜基因组DNA为冬瓜叶片的基因组DNA。
[0028]优选地，所述电泳为采用琼脂糖凝胶进行电泳，所述琼脂糖凝胶为质量百分含量为3％的琼脂糖凝胶。
[0029]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0030]本专利技术公开了一种冬瓜果面蜡粉基因的CAPS分子标记，该分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，SEQ ID NO.1所示序列自5
’
端起第1370位碱基是SNP位点，其碱基为G或A。同时，本专利技术还公开了用于扩增上述CAPS分子标记的引物，该CAPS分子标记引物能同时产生果面有蜡粉材料的特异性标记和果面无蜡粉材料的特异性标记，且重复性好，特异性强。此外，将本专利技术开发的冬瓜果面蜡粉基因CAPS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种冬瓜果面蜡粉基因的CAPS分子标记，其特征在于，所述CAPS分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，SEQ ID NO.1所示序列自5
’
端起第1370位碱基为SNP位点，所述SNP位点为G或A。2.用于扩增权利要求1所述的CAPS分子标记的引物，其特征在于，所述引物包括上游引物和下游引物。3.根据权利要求2所述的CAPS分子标记的引物，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。4.权利要求1所述的CAPS分子标记，或者权利要求2或3所述的CAPS分子标记的引物在冬瓜果面蜡粉表型选育中的应用。5.一种冬瓜果面蜡粉有无的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、以冬瓜基因组DNA为模板，采用权利要求2或3的CAPS分子标记引物进行PCR扩增，对PCR扩增产物酶切后进行电泳分析：S2、当仅产生140bp、305bp的果面无蜡粉亲本特异性标记WAX
140+305
时，该冬瓜为果面无蜡粉冬瓜；当仅产生445bp的果面有蜡粉亲本特异性标记WAX
445
时，该冬瓜为果面有蜡粉冬瓜；当同时产生445bp的果面有蜡粉亲本特异性标记WAX
445
和14...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫晋强，江彪，陈凤，刘文睿，孙飘云，谢大森，何晓明，王敏，彭庆务，
申请(专利权)人：广东省农业科学院蔬菜研究所，
类型：发明
国别省市：