一种标记临近星形胶质细胞的方法技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种标记临近星形胶质细胞的方法，用于解决现有技术双重荧光标记效率低、技术难度大，不易推广使用的问题，同时还能够进一步实现多重荧光标记；其步骤主要有质粒构建和病毒包装、病毒注射、图像采集，其中质粒构建是将不同的荧光蛋白接入骨架质粒中，随后将含目的基因的质粒与AAV5的pHelper质粒共转染进入人胚肾细胞系（AAV

【技术实现步骤摘要】
一种标记临近星形胶质细胞的方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体而言，涉及一种标记临近星形胶质细胞的方法。

技术介绍

[0002]星形胶质细胞（星胶）广泛分布于哺乳动物的中枢神经性系统中，具有多级、海绵样的复杂形态，星胶的精细分枝能与临近的神经元、少突胶质细胞及血管等相互接触，进而参与脑功能的调控，临近星胶的精细分枝也能相互接触，通过缝隙链接进行细胞间的物质交换和信号交流。Bushong, E.A等报道了海马CA1中，临近的星胶具有独立、无重叠的空间领域，如图1所示，此后的多项研究还在人类及果蝇的中枢神经系统中报道了类似的现象，提示具有进化上的保守。此后，这一理论持续占据了学术主流地位，在近二十年来未曾有重大更新。
[0003]现有的标记临近星胶的方法包括染料导入法和双重荧光标记的嵌合体分析。其中，染料导入法是在福尔马林或多聚甲醛固定的脑组织中，在明场显微镜下找到一组毗邻的星胶胞体，通过尖端非常细的玻璃电极将荧光染料（如Alexa568、Alexa488或荧光黄二锂盐）导入星胶内。由于在明场显微镜下准确识别星胶的难度较大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种标记临近星形胶质细胞的方法，包括如下步骤：质粒构建、病毒包装、病毒注射、图像采集；其特征在于，所述病毒注射是将含有两种不同荧光蛋白的病毒稀释成低滴度并混合，再注射进实验材料的特定脑区。2.根据权利要求1所述的一种标记临近星形胶质细胞的方法，其特征在于，所述质粒构建是通过将不同的荧光蛋白分别接入含有GfaABC1D启动子的骨架质粒中，形成带有目的基因的质粒；所述病毒包装步骤中，将含目的基因的质粒与对星胶亲和力较高的5型腺相关病毒病AAV5的pHelper质粒共转染进入人胚肾细胞系AAV
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293中完成病毒包装，裂解细胞并收集病毒颗粒。3.根据权利要求2所述的一种标记临近星形胶质细胞的方法，其特征在于，所述病毒颗粒包括第一病毒样本、第二病毒样本，所述第一病毒样本的荧光蛋白包括EBFP，所述第二病毒样本的荧光蛋白包括EGFP。4.根据权利要求3所述的一种标记临近星形胶质细胞的方法，其特征在于，含有所述荧光蛋白的病毒注射前稀释到2~5
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【专利技术属性】
技术研发人员：周斌，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：