一种年糕中脱氢乙酸的磁性纳米酶比色检测方法技术

本发明专利技术涉及一种年糕中脱氢乙酸的磁性纳米酶比色检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)称取样品10.0g并置于烧杯中，加入提取液，再加入耐高温α

【技术实现步骤摘要】
一种年糕中脱氢乙酸的磁性纳米酶比色检测方法


[0001]本专利技术涉及食品安全检测
，具体涉及一种年糕中脱氢乙酸的磁性纳米酶比色检测方法。

技术介绍

[0002]脱氢乙酸及其钠盐，是一种可用于面包、糕点、熟肉制品等食品中的高效防腐剂，但不得用于年糕等米面制品(GB 2760
‑
2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》)。由于年糕、湿面等米面制品的保质期很短，特别是在气温高的夏天，很容易腐败变质，因此有些不法商人会在年糕、湿面等米面制品中添加脱氢乙酸或其钠盐来防腐，严重危险人体健康，在国家食品安全抽检中年糕中检测出残留有较高含量脱氢乙酸的情况时有发生。
[0003]关于食品中脱氢乙酸及其钠盐的检测方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法和紫外分光光度法等。高效液相色谱法和气相色谱法由于要使用大型仪器，不适用于现场快速检测和基层实验室检测。关于紫外分光光度法，由于年糕等样品提取液中具有较多的紫外吸收物质从而使得干扰测定结果的因素较多，且其同样不适用于快速检测的场合。同时，因为年糕样品粘性大，样品提取时容易粘团，在均质或打浆过程中往往粘在一起形成大团，造成脱氢乙酸及其钠盐的提取率很低。因此，一种提取率高、不需要大型仪器、操作简单、适合于现场快速检测和基层实验室检测的年糕样品中脱氢乙酸的检测方法，具有广阔的应用前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种用于年糕样品中脱氢乙酸高效提取和基于分光光度法的比色检测方法。
[0005]为了实现上述目的，克服现有技术中的不足，本专利技术提供一种年糕中脱氢乙酸的磁性纳米酶比色检测方法，包括以下步骤：
[0006](1)将年糕样品切细成小块，称取样品10.0g并置于烧杯中，加入100mL提取液，再加入耐高温α
‑
淀粉酶后，于超声波清洗器中60～90℃水浴超声提取30min；将提取结束后的溶液以流水冷却至室温，再6000rpm离心10min或用0.45μm滤膜过滤，取待测上清液备用；
[0007](2)取10mL步骤(1)中的待测上清液，加入磁性纳米酶溶液混匀，再加入0.1～0.3mL0.1mol/LH2O2溶液和显色剂溶液混匀，于室温下反应5min后，将长条形磁铁置于试管侧面约1min，使磁性纳米酶全部聚集后将试管内液体倒出，于652nm下测定其吸光度值，以蒸馏水代替上清液显色反应后的溶液作为空白调零；
[0008](3)用系列标准浓度的脱氢乙酸溶液代替样品的上清液，重复步骤(2)来测定其吸光度值，得到脱氢乙酸
‑
吸光度值的标准曲线，以样品的上清液测定的吸光度值代入所述标准曲线，根据稀释倍数即可得到原年糕样品中脱氢乙酸的含量。
[0009]作为上述技术方案的进一步优选的技术方案，所述提取液为pH4.0～7.0、50～200mM的磷酸缓冲液。
[0010]作为上述技术方案的进一步优选的技术方案，所述提取液采用pH6.5、100mM磷酸缓冲液。
[0011]作为上述技术方案的进一步优选的技术方案，所述磁性纳米酶为碳量子点
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F3O4纳米材料，其使用量为0.1～0.3mL，浓度为10～100μg/mL。
[0012]作为上述技术方案的进一步优选的技术方案，所述磁性纳米酶的使用量为0.1mL，浓度为20μg/mL。
[0013]作为上述技术方案的进一步优选的技术方案，所述显色剂为3,3
′
,5,5
′‑
四甲基联苯胺(简称TMB)，其使用量为0.1～0.3mL，浓度为0.2～1.0mmol/L。
[0014]作为上述技术方案的进一步优选的技术方案，所述显色剂的使用量为0.1mL，其浓度为0.8mmol/L。
[0015]作为上述技术方案的进一步优选的技术方案，所述超声波清洗器功率为60W，频率为40KHz；所述水浴温度为80℃。
[0016]作为上述技术方案的进一步优选的技术方案，所述耐高温α
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淀粉酶的添加量为1.0～3.0mL，酶活力为20000～60000U/mL。
[0017]作为上述技术方案的进一步优选的技术方案，所述耐高温α
‑
淀粉酶的添加量为1.0mL，酶活力为42000U/mL。
[0018]在本专利技术的年糕样品中脱氢乙酸的比色检测方法中，年糕主要成分是糊化后的淀粉，粘度很大，打浆提取时容易成团，目标物提取率很低；在样品中加入耐高温α
‑
淀粉酶，并在较高温度下进行超声波提取，使淀粉快速降解成低粘度的糊精，甚至葡萄糖，这样就不会成团，待测定目标物脱氢乙酸也会被释放出来；磁性纳米酶能催化过氧化氢分解，产生活性氧，使还原型的显色剂TMB氧化形成氧化型的TMB，呈蓝色，但是反应若有脱氢乙酸存在，会抑制磁性纳米酶的催化反应，使产物蓝色程度降低甚至无色，其颜色蓝色程度与脱氢乙酸浓度呈线性关系。
[0019]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的样品前处理方法简单，可有效解决样品匀浆时粘团现象，同时大大提高了样品中的脱氢乙酸提取率；同时，本专利技术所提供的检测方法，简单易用，样品前处理方法和检测方法中均不需要大型仪器设备，比色法可以测定，非常适合于基层检测实验室和现场快速检测。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为本专利技术实施例1的反应物波长扫描图；
[0022]图2为本专利技术实施例2的测定标准曲线图；
具体实施方式
[0023]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是
本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]实施例1
[0025]配制1.0mg/mL的脱氢乙酸标准贮备液(按GB 5009.121
‑
2016第二法配制)，将此贮备液以pH6.5、100mM磷酸缓冲液稀释成1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/L工作溶液。
[0026]取10mL待测工作溶液，加入0.1mL20μg/mL磁性纳米酶溶液，混匀；再加入0.2mL 1.0mol/LH2O2溶液和0.3mL0.8mmol/L显色剂(3,3
′
,5,5
′‑
四甲基联苯胺，TMB)溶液；混匀，于室温下反应5min，将长条形磁铁置于试管侧面约1min使磁性纳米酶全部聚集后，将试管内液体倒出，于400...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种年糕中脱氢乙酸的磁性纳米酶比色检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将年糕样品切细成小块，称取样品10.0g并置于烧杯中，加入100mL提取液，再加入耐高温α
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淀粉酶后，于超声波清洗器中60～90℃水浴超声提取30min；将提取结束后的溶液以流水冷却至室温，再6000rpm离心10min或用0.45μm滤膜过滤，取待测上清液备用；(2)取10mL步骤(1)中的待测上清液，加入磁性纳米酶溶液混匀，再加入0.1～0.3mL0.1mol/L H2O2溶液和显色剂溶液混匀，于室温下反应5min后，将长条形磁铁置于试管侧面约1min，使磁性纳米酶全部聚集后将试管内液体倒出，于652nm下测定其吸光度值，以蒸馏水代替上清液显色反应后的溶液作为空白调零；(3)用系列标准浓度的脱氢乙酸溶液代替样品的上清液，重复步骤(2)来测定其吸光度值，得到脱氢乙酸
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吸光度值的标准曲线，以样品的上清液测定的吸光度值代入所述标准曲线，根据稀释倍数即可得到原年糕样品中脱氢乙酸的含量。2.根据权利要求1所述的一种年糕中脱氢乙酸的磁性纳米酶比色检测方法，其特征在于，所述提取液为pH4.0～7.0、50～200mM的磷酸缓冲液。3.根据权利要求2所述的一种年糕中脱氢乙酸的磁性纳米酶比色检测方法，其特征在于，所述提取液采用pH6.5、100mM磷酸缓冲液。4.根据权利要求1所述的一种年糕中脱氢乙酸的磁...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐玉龙，黄光荣，吉炉婷，柴寅，
申请(专利权)人：杭州天涅科技有限公司，
类型：发明
国别省市：