一种幽门螺杆菌表位肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供了幽门螺杆菌表位肽、其在制备卵黄抗体中的应用及抗幽门螺杆菌卵黄抗体，为幽门螺杆菌感染相关疾病的预防和治疗提供了新的手段。新的手段。

【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺杆菌表位肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种幽门螺杆菌表位肽及其应用。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(H.pylori)属于革兰氏阴性杆菌，其感染率高，可引起胃炎、胃溃疡甚至胃癌。仅有小部分被感染者会出现临床症状，而大部分无症状携带者常被忽视，间接导致了幽门螺杆菌在人群中广泛传播。迄今为止，由H.pylori感染引起的疾病主要采用三联法，即质子泵抑制剂加两种抗生素的方法进行抗菌治疗，但该方法存在抗生素耐药、副作用大、复发率高等缺陷。因此，开发新的预防及治疗H.pylori感染的方法是十分必要的。
[0003]卵黄抗体(免疫球蛋白卵黄，IgY)是母鸡血液中存在的可传递至鸡卵黄并在仔鸡孵育过程中和孵育后对仔鸡起到保护作用的免疫球蛋白，也是卵黄中唯一的免疫球蛋白，具有良好的稳定性、耐高渗性、耐热、耐酸及耐碱性。由于卵黄抗体的制备不需要牺牲免疫过的动物，且可以连续地生产抗体，适合工业化推广应用。
[0004]单表位多聚抗原肽(SEA
‑
MAP)的设计可在较小的空间范围内聚集高浓度的有效抗原表位，使其免疫原性与线性抗原肽相比大大增强。本专利技术针对幽门螺杆菌设计了特异性单表位B细胞抗原肽，其本身具有良好的免疫原性，并创新性地基于这些高特异性单表位抗原肽制备了SEA
‑
MAP，以这些SEA
‑
MAP代替传统的线性肽抗原对禽类动物进行免疫，获得了特异性更强的卵黄抗体，为制备预防及治疗幽门螺杆菌的药品或制剂奠定了基础。r/>
技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种幽门螺杆菌单表位抗原肽，所述的单表位抗原肽包含KNLIGDKANS(SEQ ID NO：1)，LPALKENNGTVN(SEQ ID NO：2)，QAINPDNLTGS(SEQ ID NO：3)，RSRYSELGNTY(SEQ ID NO：4)，HAFIKSSFFNSA(SEQ ID NO：5)，DKATNFLGKNN(SEQ ID NO：6)，SKKKGSDHAA(SEQ ID NO：7)，YYSFMGAELK(SEQ ID NO：8)中的任一种或其组合。
[0006]本专利技术的另一目的在于提供一种具有式I所示结构的树状表位肽，
[0007][0008]其中，X为碱性氨基酸，Z为幽门螺杆菌单表位抗原肽。
[0009]本专利技术的优选技术方案中，所述的碱性氨基酸选自精氨酸(R)、赖氨酸(K)、组氨酸(H)的任一种。
[0010]本专利技术的优选技术方案中，所述的单表位抗原肽选自KNLIGDKANS(SEQ ID NO：1)，LPALKENNGTVN(SEQ ID NO：2)，QAINPDNLTGS(SEQ ID NO：3)，RSRYSELGNTY(SEQ ID NO：4)，HAFIKSSFFNSA(SEQ ID NO：5)，DKATNFLGKNN(SEQ ID NO：6)，SKKKGSDHAA(SEQ ID NO：7)，YYSFMGAELK(SEQ ID NO：8)的任一种或其组合。
[0011]本专利技术的另一目的在于提供本专利技术的单表位抗原肽或树状表位肽用于制备预防和/或治疗幽门螺杆菌感染相关疾病的药物中的应用。
[0012]本专利技术的优选技术方案中，所述疾病选自急性胃炎、慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、萎缩性胃炎、胃癌、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤中的任一种或其组合。
[0013]本专利技术的优选技术方案中，所述消化性溃疡选自胃溃疡、十二指肠溃疡、食管溃疡、胃空肠吻合口溃疡、胃粘膜Meckel憩室溃疡中的任一种或其组合。
[0014]本专利技术的另一目的在于提供一种卵黄抗体的制备方法，包括下述步骤：采用本专利技术的单表位抗原肽或树状表位肽免疫禽类动物，制得卵黄抗体。
[0015]本专利技术的优选技术方案中，所述禽类动物选自鸡、鸭、鹅、鸟中的任一种或其组合。
[0016]本专利技术的优选技术方案中，所述方法包括如下步骤：S1：采用所述单表位抗原肽或树状表位肽免疫禽类动物，制得卵黄抗体；
[0017]S2：卵黄抗体的提取及纯化。
[0018]本专利技术的优选技术方案中，S1包括下述步骤：
[0019](1
‑
1)选取雌性禽类动物，将所述单表位抗原肽或树状表位肽与弗氏完全佐剂等体积混合并充分乳化，以1ml/只的免疫剂量在动物体的胸肌及大腿根部进行多点注射；
[0020](1
‑
2)每隔两周，采用所述单表位抗原肽或树状表位肽与弗氏不完全佐剂等体积混合并充分乳化后的免疫原加强免疫一次，免疫剂量为1ml/只，优选加强免疫至少3次；
[0021](1
‑
3)末次加强免疫后2周收集蛋，优选收集蛋至少2个月。
[0022]本专利技术的优选技术方案中，收集未免疫蛋作为阴性对照品。
[0023]本专利技术的优选技术方案中，S2包括下述步骤：
[0024](2
‑
1)取消毒完毕的蛋，收集卵黄并刺破，量取10ml蛋黄液，加10倍双蒸水稀释，混匀后，调pH4
‑
5，
‑
20℃过夜，室温解冻，4℃下12000rpm离心30min，将上清液用滤纸过滤除脂，收集上清液，加入硫酸铵，使其终浓度为20％，静置1h后，4℃下12000rpm离心15min，收集沉淀；
[0025](2
‑
2)将沉淀溶于20ml 0.01M pH7.4的PBS中，加入硫酸铵，使其终浓度为14％，静置1h后，4℃下12000rpm离心15min，将收集的沉淀溶于2ml 0.01M pH7.4的PBS中；置于双蒸水中搅拌透析，1h后，更换透析液1次，透析过夜后，收集透析上清液，以0.22μm滤膜过滤除菌后，无菌EP管盛装，
‑
20℃保存。
[0026]本专利技术的优选技术方案中，更换透析液2
‑
5次，优选为3
‑
4次。
[0027]本专利技术的另一目的在于提供一种采用上述方法制备的卵黄抗体。
[0028]本专利技术的另一目的在于提供所述单表位抗原肽或树状表位肽用于制备卵黄抗体中的应用。
[0029]本专利技术的另一目的在于提供所述卵黄抗体在制备预防和/或治疗幽门螺杆菌感染相关疾病的制品中的应用。
[0030]本专利技术的优选技术方案中，所述制品选自药品、保健品、功能性食品、特殊医学用途配方食品(FSMP)中的任一种或其组合。
[0031]本专利技术的优选技术方案中，所述药品选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、混悬液、丸剂、散剂、滴丸、糖浆剂、合剂、露剂、泡腾剂、乳剂、茶剂中的任一种或其组合。
[0032]本专利技术的优选技术方案中，所述保健品选自饮品、汤品、茶、酒、蜂制品、鲜汁、药膳中的任一种或其组合。
[0033]除非另有说明，本专利技术涉及液体与液体之间的百分比时，所述的百分比为体积/体积百分比；本专利技术涉及液体与固体之间的百分比时，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌单表位抗原肽，其特征在于，其氨基酸序列包含SEQ ID NO：1
‑
8中的任一种或其组合。2.一种包含权利要求1所述单表位抗原肽的树状表位肽，其特征在于，所述树状表位肽的结构如式I所示：其中，X为碱性氨基酸，Z为幽门螺杆菌单表位抗原肽。3.如权利要求2所述的树状表位肽，其特征在于，所述的碱性氨基酸选自精氨酸(R)、赖氨酸(K)、组氨酸(H)的任一种。4.如权利要求2
‑
3任一项所述的树状表位肽，其特征在于，所述的单表位抗原肽包含SEQ ID NO：1
‑
8中的任一种或其组...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫小君，罗进，
申请(专利权)人：海图生物科技上海有限责任公司，
类型：发明
国别省市：