一种精确鉴定草麻黄的方法技术

本发明专利技术提供了一种精确鉴定草麻黄的方法。具体是利用设计、筛选获得的引物，扩增并采用Sanger测序方法获得叶绿体基因rbcL及matK目的序列，通过与GenBank数据库比对，并计算遗传距离结合系统发育及特征核苷酸位点分析，区分草麻黄与其他物种的方法。步骤为：提取草麻黄植物基因组DNA，利用PCR技术，采用给定引物及程序扩增，并采用Sanger测序获得叶绿体基因rbcL和matK的目的序列，采用CExpress、Bioedit及MEGA 5.1等软件将草麻黄与麻黄属近缘物种进行多序列比对，分析得到稳定的种间遗传变异位点，并以K2P模型计算它们的种内种间遗传距离，以邻接法构建系统发育树，综合分析以鉴别草麻黄与同属近缘物种。该方法具有稳定、高效、精确的特点，是从分子水平鉴定草麻黄植物和药材的良好方法。材的良好方法。

【技术实现步骤摘要】
一种精确鉴定草麻黄的方法


[0001]本专利技术属于药用植物物种鉴定，具体的说是涉及采用rbcL+matK组合条形码精确鉴别草麻黄与其他相似物种的方法。

技术介绍

[0002]草麻黄(Ephedra sinica Stapf)，别名麻黄草、华麻黄、无叶草等，为麻黄属草本状灌木植物，是中华人民共和国《药典》收录的中药“麻黄”及“麻黄根”指定的主要基原植物。用途广、用量大，是我国许多经典名方的主要成分。
[0003]全世界麻黄属下有67个相似种，我国有15个种及4个变种，主要产于辽宁、吉林、内蒙古、河北、山西、河南西北部及陕西等省区，适应性强，常组成大面积的单纯群落。近年来，草麻黄市场需求量逐年上升，存在以次充好、物种混淆使用的现象，但市场上尚没有精确鉴定并区分草麻黄与其他相似物种的良好方法，这很大程度上限制了草麻黄用药安全及其现代化应用研究。
[0004]截止目前，草麻黄的鉴别多采用两种方法，一种是传统的形态鉴别法，该方法主要从植物外观、颜色、理化性质等指标区分，存在误差大、不够精密等缺点；第二种方法，是通过核糖体基因ITS、叶绿本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种草麻黄matK基因引物对，其特征在于，正向引物核苷酸序列为CTATGTTATAGATCCGAATC，反向引物核苷酸序列为CAACTTTTCCATCGAAGAG。2.一种利用rbcL+matK组合条形码鉴定草麻黄的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)准备草麻黄植物干或者湿的样品；2)采用常规方法提取草麻黄植物的基因组DNA；3)采用rbL通用引物ATGTCACCACAAACAGAAAC和TCGCATGTACCTGCAGTAGC，PCR扩增叶绿体基因rbL目的序列；采用25μL PCR体系：2
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SanTaq PCR Master Mix 12.5μL,浓度为10μmol/L的引物各1μL,浓度为100ng/μL的模板DNA 2μL,ddH2O 8.5μL；扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性50s,55℃退火1min，72℃延伸1min，36个循环；72℃延伸10min；4)采用正向引物CTATGTTATAGATCCGAATC和反向引物CAACTTTTCCATCGAAGAG，PCR扩增叶绿体基因matK目的序列；采用25μL PCR体系：2
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SanTaq PCR Mas...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔晋龙，蒋珊，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：