整合素蛋白作为标志物在制备治疗结直肠癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种整合素蛋白作为标志物在制备治疗结直肠癌药物中的应用。该药物为能够抑制结直肠癌细胞的增殖、促进细胞凋亡的药物。本发明专利技术通过敲减或抑制整合素蛋白的表达，能够有效的提升结直肠癌细胞对于MEK抑制剂的敏感性，并能协同促进MEK抑制剂对于结直肠癌的抑制效果。的抑制效果。

【技术实现步骤摘要】
整合素蛋白作为标志物在制备治疗结直肠癌药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及整合素作为标志物在制备治疗结直肠癌药物中的应用。

技术介绍

[0002]结直肠癌(Colorectal Cancer，CRC)是全球范围内常见的恶性肿瘤。2018年全球癌症统计报告结果表明，在常见肿瘤中，结直肠癌的发生率和死亡率均位居前三位。结直肠癌的发生除了遗传因素外，还很大程度上与人们的饮食习惯和生活方式有关。
[0003]早期结直肠癌患者的治疗方式通常采用外科切除手术，再加上一些辅助药物治疗就能有较好的治疗效果；疾病晚期或者被诊断为不可切除的患者通常采用化疗、分子靶向治疗等方式，但在治疗过程中，患者经常出现耐药问题，所以结直肠癌的临床预后仍然不尽人意，尤其是当CRC患者出现淋巴结转移时，预后更差。
[0004]在结直肠癌靶向治疗中，EGFR单抗药物Cetuximab最早被批准用于转移性结直肠癌的治疗。它可作为KRAS野生型结直肠癌患者的临床一线治疗药物。但是在结直肠癌患者中，KRAS突变的患者约占50％，临床研究表明携带这种突变的患者对EGFR相关抑制剂的治疗响应率极低。结直肠癌靶向治疗耐药导致的低反应率严重制约了结直肠癌靶向治疗的临床效果，成为临床治疗急需解决的问题。由于基因突变引起的各种诱导细胞增殖和存活的代偿传导途径的激活，以及信号传导网络的复杂，导致针对结直肠癌患者的靶向MAPK疗法临床获益率不高。结直肠癌的耐药问题亟需解决。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种整合素作为标志物在制备治疗结直肠癌药物中的应用，可用于制备结直肠癌治疗药物，提升结直肠癌细胞对于MEK抑制剂的敏感性。
[0006]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0007]一种整合素表达抑制剂或敲除试剂在制备治疗结直肠癌药物中的应用，该药物能够抑制结直肠癌细胞的增殖、促进细胞凋亡。
[0008]进一步地，整合素蛋白为Integrinα3或Integrinβ1。
[0009]一种整合素表达抑制剂或敲除试剂在制备提高结直肠癌治疗效果的辅助药物中的应用，辅助药物能够抑制结直肠癌细胞的增殖、促进细胞凋亡。
[0010]进一步地，结直肠癌为KRAS突变的结直肠癌。
[0011]一种治疗结直肠癌的联合药物，包括整合素表达抑制剂或敲除试剂，以及结直肠癌抑制剂。
[0012]进一步地，结直肠癌抑制剂为MEK抑制剂。
[0013]进一步地，抑制整合素蛋白表达能够降低细胞对MEK抑制剂的耐受性。
[0014]进一步地，联合药物是能够抑制结直肠癌细胞的增殖、促进细胞凋亡的药物。
[0015]本专利技术的有益效果：
[0016]本专利技术通过敲减或抑制整合素蛋白的表达，能够有效的提升结直肠癌细胞对于MEK抑制剂的敏感性，并能协同促进MEK抑制剂对于结直肠癌的抑制效果。
附图说明
[0017]图1为三种细胞中整合素相关蛋白转录水平的表达量分布；统计整合素相关蛋白在细胞系HCT116、HCT116 AZD7(HCT116接受1μM AZD6244处理7天)、HCT116 AZDR(HCT116 AZD6244耐药株)中的表达差异，以TPM作为表达量的值；每组数据中，从左至右的柱状图分别表示HCT116、HCT116 AZD7、HCT116 AZDR；
[0018]图2为Western blot检测敲减ITGB1后对细胞HCT116蛋白表达的影响；
[0019]图3为MTS 72小时检测敲减ITGB1后对细胞HCT116短期增殖的影响；
[0020]图4为敲减ITGB1对细胞HCT116长期增殖的影响；长期(12
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14天)克隆形成实验检测对照(PLKO.1)和敲减ITGB1的细胞对MEKi的响应情况；(A)用不同浓度(0、0.03、0.125、0.25、0.5、1μM)AZD6244隔天处理细胞12
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14天，用0.05％结晶紫染色液对细胞进行染色；(B)结晶紫染色结果(A)的统计图。
具体实施方式
[0021]下面对本专利技术的具体实施方式进行描述，以便于本
的技术人员理解本专利技术，但应该清楚，本专利技术不限于具体实施方式的范围，对本
的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本专利技术的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本专利技术构思的专利技术创造均在保护之列。
[0022]结直肠癌细胞系HCT116和HEK293T购买于美国典型培养物保藏中心(ATCC)。
[0023]实施例1整合素在耐药细胞中的表达量
[0024]统计三种细胞系HCT116、HCT116 AZD6244耐药株(HCT116 AZDR)及HCT116接受AZD6244短期处理(HCT116 AZD7)中的整合素相关蛋白的转录组数据(图1)，发现在这三种细胞中，整合素蛋白Integrinα3(ITGA3)、Integrinβ1(ITGB1)在HCT116 AZD7、HCT116 AZDR两种细胞中的表达量显著高于HCT116中的表达量。这个结果表明在结直肠癌细胞中，MEKi(MEK抑制剂)的处理可能会引起细胞内整合素表达量的增加。
[0025]实施例2探究整合素对HCT116细胞增殖的影响途径
[0026]用1μM MEKi分别处理对照(PLKO.1)和敲减ITGB1的HCT116细胞24h，提取细胞蛋白后，用Western blot检测相关蛋白的表达水平(图2)。实验结果显示，在敲减细胞中ITGB1的表达几乎被完全抑制，表明shRNA的靶向性好，敲减效率高。同时p
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MET的表达量随ITGB1的敲减明显降低，p
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AKT(S473)的表达量在敲减细胞中也有一定程度降低，表明敲减ITGB1能够影响HCT116细胞中p
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MET、p
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AKT的激活。实验结果还显示在敲减ITGB1的细胞中，经过MEKi处理后，PI3K通路下游的p
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S6表达水平受到明显抑制，表明敲减ITGB1能够同MEKi共同影响PI3K通路的活性。
[0027]上述实验结果表明在细胞HCT116中敲减ITGB1能够抑制p
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MET和p
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AKT(S473)的表达，对PI3K通路的活性也有一定抑制作用。
[0028]实施例3敲减ITGB1对细胞增殖的影响
[0029]关于敲减ITGB1对细胞增殖的影响，我们做了短期和长期的增殖影响检测。首先我们用不同浓度(0、0.01、0.1、1、10μM)的MEKi分别处理PLKO.1(对照组)和敲减ITGB1的HCT116细胞，药物处理72小时后，用MTS法检测药物对细胞增殖的影响。如图3所示，在敲减ITGB1的细胞中，AZD6244对细胞的半数抑制浓度相比于PLKO.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种整合素蛋白表达抑制剂或敲除试剂在制备治疗结直肠癌的药物中的应用，其特征在于，所述药物为能够抑制结直肠癌细胞的增殖、促进细胞凋亡的药物。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述整合素蛋白为Integrinα3或Integrinβ1。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述整合素蛋白表达抑制剂或敲除试剂能提升结直肠癌细胞对结直肠癌抑制剂的敏感性。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑晓博，余春娥，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：