本发明专利技术公开了一种板栗愈伤组织的诱导培养基和诱导方法，属于组织培养技术领域。本发明专利技术公开的一种板栗愈伤组织的诱导培养基，以木本植物培养基WPM为基础，添加1.0～1.5mg/L6
【技术实现步骤摘要】
一种板栗愈伤组织的诱导培养基和诱导方法
[0001]本专利技术涉及组织培养
，更具体的说是涉及一种板栗愈伤组织的诱导培养基和诱导方法。
技术介绍
[0002]板栗属于壳斗科栗属植物，在我国分布范围很广，其果实营养价值丰富，兼具经济效益与生态效益。中国板栗主要利用它的坚果，其果实富含淀粉、糖、蛋白质、脂肪及多种维生素和矿物质，甘甜可口，并具有保健功效。中国板栗坚果品质高居各种栗的首位，尤其是北方板栗淀粉含量高，品质优良。现今，栗实已成为我国出口创汇的主要干果之一。
[0003]板栗属于木本植物，目前仍采用实生苗嫁接良种的方式进行繁殖，这大大限制了我国板栗良种的大面积推广，并且实生苗生长繁殖系数低，遗传不稳定。随着植物组织培养技术的成熟，人们认识到利用组织培养离体快繁技术的优势：繁殖速度快、繁殖系数高、后代遗传稳定性好、苗木质量高、繁殖不受季节限制等等。因此，离体快繁技术在优良品种繁殖上越来越被广泛应用，已实现了工厂化生产苗木。目前，通过试管苗繁殖并实现产业化的植物有30多种。
[0004]现存的栗属植物有7个种，其中进行经济栽培的主要有中国栗、欧洲栗、日本栗和美洲栗4种。目前欧洲栗和美洲栗的组培主要集中在愈伤组织的诱导、微体繁殖、体细胞胚状体发生方面的研究，中国栗研究很少，且诱导愈伤出愈率低，污染率高，褐化严重。
[0005]因此，提供一种板栗愈伤组织的诱导培养基和诱导方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
[0006]有鉴于此，本专利技术提供了一种板栗愈伤组织的诱导培养基和诱导方法，针对中国栗的愈伤组织诱导，提高诱导率，降低褐化率和污染率。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]一种板栗愈伤组织的诱导培养基，所述诱导培养基的具体组成如下：以木本植物培养基WPM为基础，添加1.0～1.5mg/L 6
‑
BA，0.3mg/L NAA，50～100mg/L半胱氨酸，30g/L蔗糖，7.0g/L琼脂；pH为6.0。
[0009]进一步，一种板栗愈伤组织的诱导方法，具体步骤如下：
[0010](1)灭菌
[0011]于5月中旬从田间选取成年树当年生嫩枝的无病虫害的茎段，在流水下用洗涤灵刷洗干净，剪成小段，用滤纸吸干材料表面的水分，横放于烧杯中；
[0012]向烧杯中倒入75％酒精，没过茎段，摇动25
‑
30s，立即将酒精倒出，然后倒入3％次氯酸钠溶液，没过茎段，浸泡15
‑
20min；所述3％次氯酸钠溶液中含有吐温
‑
80，吐温
‑
80浓度为0.3％
‑
0.5％；
[0013](2)接种
[0014]将步骤(1)处理后的小段切成1cm长不带腋芽的外植体，横放于灭菌的权利要求1所述的诱导培养基上；
[0015](3)培养
[0016]将步骤(2)接种外植体后的培养瓶于温度(25
±
2)℃，空气相对湿度70％
‑
80％的光照培养室进行光暗交替培养；光照12
‑
13h、黑暗11
‑
12h，光照强度为2000lx。
[0017]燕山板栗因其具有"香、甜、糯”的优异品质，畅销日本和东南亚市场，出口量约占全国的80％，稳居全国第一位，是河北省的特色品牌产品。基于此，本专利技术选用一个板栗高产优质新品种“燕宝”，该品种由河北科技师范学院培育，适宜在燕山板栗产区及全国板栗主产区栽培。
[0018]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种板栗愈伤组织的诱导培养基和诱导方法，愈伤组织出愈率高，褐化率低，污染率低，为组培成功打下基础。我校所处的燕山山脉有丰富的板栗种质资源，利用组织培养技术对其进行繁殖、保存，能够为选育优良板栗品种及其推广应用奠定基础，对于推动当地板栗产业发展具有现实意义。
具体实施方式
[0019]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]木本植物培养基(WPM)购自Phytotech，L449。
[0021]实施例1一种板栗愈伤组织的诱导方法
[0022]实验前准备：
[0023]接种室准备：首先将接种用具、无菌蒸馏水、培养基等置于超净工作台上，打开超净工作台紫外灯及送风开关，确认正常送风后，开机30min；接种前关闭紫外灯，用75％酒精棉球擦拭超净台。
[0024]操作人员准备：穿上白大褂、拖鞋，戴上帽子；用肥皂洗手，将指甲洗净，然后用沾有75％酒精的棉球把手和指尖消毒1次。
[0025]具体试验过程如下：
[0026](1)灭菌
[0027]于5月中旬从田间选取“燕宝”成年树当年生嫩枝的无病虫害的茎段，在流水下用毛笔沾洗涤灵刷洗干净，剪成小段，用滤纸吸干材料表面的水分，横放于烧杯中。
[0028]向烧杯中倒入75％酒精，没过茎段，摇动25
‑
30s，立即将酒精倒出，然后倒入3％次氯酸钠溶液(3％次氯酸钠溶液中吐温
‑
80的浓度为0.3％)，没过茎段，浸泡15min(在超净工作台上)。浸泡过程中不断摇动，保证材料充分接触药剂，然后在超净台上用灭菌蒸馏水洗三次，用无菌滤纸吸干水分。
[0029](2)接种
[0030]将步骤(1)处理后的小段切成1cm长不带腋芽的外植体，横放于愈伤组织诱导培养基上，每瓶培养基(装有30mL培养基的100mL培养瓶)接种四小段。愈伤组织诱导培养基的组
成如下：木本植物培养基(WPM)+1.0mg/L 6
‑
BA+0.3mg/L NAA+50mg/L半胱氨酸+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L。培养基pH为6.0，在0.1Pa、121℃恒温条件下灭菌20min。
[0031](3)培养
[0032]接种外植体后的培养瓶于温度(25
±
2)℃，空气相对湿度70％
‑
80％的光照培养室进行光暗交替培养；每天光照时间为12h，光照强度2000lx，黑暗时间为12h；生长6周，调查结果。
[0033]实施例2一种板栗愈伤组织的诱导方法
[0034]实验前准备同实施例1。
[0035]具体试验过程如下：
[0036](1)灭菌
[0037]于5月中旬从田间选取“燕宝”成年树当年生嫩枝的无病虫害的茎段，在流水下用毛笔沾洗涤灵刷洗干净，剪成小段，用滤纸吸干材料表面的水分，横放于烧杯中。
[0038]向烧杯中倒入75％酒精，没过茎段，摇动25
‑
30s，立即将酒精倒出，然后倒入3％次氯酸钠溶液(3％次氯本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种板栗愈伤组织的诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基的具体组成如下：以木本植物培养基WPM为基础，添加1.0～1.5mg/L 6
‑
BA，0.3mg/LNAA，50～100mg/L半胱氨酸，30g/L蔗糖，7.0g/L琼脂；pH为6.0。2.一种板栗愈伤组织的诱导方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)灭菌于5月中旬从田间选取成年树当年生嫩枝的无病虫害的茎段，在流水下用洗涤灵刷洗干净，剪成小段，用滤纸吸干材料表面的水分，横放于烧杯中；向烧杯中倒入75％酒精，没过茎段，摇动25
‑
30s，立即将酒精倒出，然后倒入3％次氯酸钠溶液，没过茎段，浸泡15...
【专利技术属性】
技术研发人员：李婧实，周丽艳，睢金凯，程晓园，
申请(专利权)人：河北科技师范学院，
类型：发明
国别省市：
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