本发明专利技术公开了一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法，涉及细胞遗传学技术领域，所述染色体制片方法具体包括以下步骤：(1)取样；(2)固定；(3)低渗；(4)酶解；(5)制片。采用本发明专利技术染色体制片方法获得的野牡丹属植物染色体制片，具有分裂相多，细胞壁解离彻底，染色体分散较好，背景干净、清晰的优点，方便进行野牡丹属植物染色体的核型分析研究及后续野牡丹属植物的FISH杂交研究，为野牡丹属植物种质资源开发利用与细胞学和分子细胞学研究奠定基础，且本发明专利技术中的固定液不仅可将有丝分裂的细胞停留在早中期，而且无需进行预处理，减少预处理液对细胞的毒害作用，将预处理和固定结合在一起，有效提高制片效率。有效提高制片效率。有效提高制片效率。
【技术实现步骤摘要】
一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法
[0001]本专利技术涉及细胞遗传学
，具体是一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法。
技术介绍
[0002]染色体方面的研究是遗传领域的基础研究，是多项研究领域的基石及催化剂。而野牡丹属植物具有很高的观赏价值，又具有较高的药用价值，发展前景广阔。由于野牡丹属植物具有染色体较小，极易重叠等现象，从而限制了人们对野牡丹属植物分子细胞遗传学机制的了解。
[0003]目前市场上现有的制片方法需要先进行野牡丹属植物染色体样本的预处理再进行固定，操作复杂，制片效率较低，且采用现有制片方法获得的野牡丹属植物染色体制片，易出现细胞分离不彻底，细胞膜破裂，染色体溢出的现象，无法进行后续的FISH杂交研究。因此，本领域技术人员提供了一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的在于提供一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法，所述染色体制片方法具体包括以下步骤：
[0006](1)取样：将野牡丹属植物进行水培，待野牡丹属植物根系长至1～2cm时，取0.5cm根尖作为染色体样本；
[0007](2)固定：利用固定液将上述染色体样本进行固定；
[0008](3)低渗：将染色体样本从固定液中取出，放入0.075mol/L的KCL溶液或纯水中进行低渗；
[0009](4)酶解：待染色体样本沉下去后夹入另一培养基皿中将根冠部分切除，只留下根尖，置于果胶酶和纤维素酶的混合液中解离；
[0010](5)制片：吸出解离液，用纯水清洗，再用固定液固定，用枪头拍打制成悬浮液，再将悬浮液滴至载玻片上，干燥即得染色体制片。
[0011]作为本专利技术进一步的方案：所述步骤(1)中的水培方式为：采用野牡丹属植物幼嫩茎段放入清水中进行培养，水培时间为25～45d。
[0012]作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤(2)中的固定液为乙醇、冰醋酸和三氯甲烷的混合物。
[0013]作为本专利技术再进一步的方案：所述固定液中乙醇、冰醋酸、三氯甲烷的质量比为5:3:2。
[0014]作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤(2)中的固定时间为24h。
[0015]作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤(4)酶解中的解离时间为10～12h。
[0016]作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤(4)中的酶解温度为37℃。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术公开了一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法，采用本专利技术染色体制片方法获得的野牡丹属植物染色体制片，具有分裂相多，细胞壁解离彻底，染色体分散较好，背景干净、清晰的优点，方便进行野牡丹属植物染色体的核型分析研究及后续野牡丹属植物的FISH杂交研究，为野牡丹属植物种质资源开发利用与细胞学和分子细胞学研究奠定基础，且本专利技术制片方法中的固定液不仅可将有丝分裂的细胞停留在早中期，而且无需进行预处理，减少预处理液对细胞的毒害作用而导致的染色体过度缩短的现象发生，本专利技术将预处理和固定结合在一起，有效提高制片效率。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]图1为采用本专利技术染色体制片方法获得的染色体制片图。
具体实施方式
[0020]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0021]本专利技术实施例中，
[0022]实施例1
[0023]一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法，染色体制片方法具体包括以下步骤：
[0024](1)取样：将野牡丹属植物进行水培，待野牡丹属植物根系长至1cm时，取0.5cm根尖作为染色体样本，其中，水培方式为：采用野牡丹属植物幼嫩茎段放入清水中进行培养，水培时间为25d，水培季节为夏初；
[0025](2)固定：利用固定液将上述染色体样本进行固定，其中，固定液为乙醇、冰醋酸和三氯甲烷的混合物，固定液中乙醇、冰醋酸、三氯甲烷的质量比为5:3:2，固定时间为24h；
[0026](3)低渗：将染色体样本从固定液中取出，放入0.075mol/L的KCL溶液或纯水中进行低渗；
[0027](4)酶解：待染色体样本沉下去后夹入另一培养基皿中将根冠部分切除，只留下根尖，置于果胶酶和纤维素酶的混合液中解离，解离时间为10h，酶解温度为37℃；
[0028](5)制片：吸出解离液，用纯水清洗，再用固定液固定，用枪头拍打制成悬浮液，再将悬浮液滴至载玻片上，干燥即得染色体制片。
[0029]实施例2
[0030]一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法，染色体制片方法具体包括以
下步骤：
[0031](1)取样：将野牡丹属植物进行水培，待野牡丹属植物根系长至1.5cm时，取0.5cm根尖作为染色体样本，其中，水培方式为：采用野牡丹属植物幼嫩茎段放入清水中进行培养，水培时间为35d，水培季节为夏初；
[0032](2)固定：利用固定液将上述染色体样本进行固定，其中，固定液为乙醇、冰醋酸和三氯甲烷的混合物，固定液中乙醇、冰醋酸、三氯甲烷的质量比为5:3:2，固定时间为24h；
[0033](3)低渗：将染色体样本从固定液中取出，放入0.075mol/L的KCL溶液或纯水中进行低渗；
[0034](4)酶解：待染色体样本沉下去后夹入另一培养基皿中将根冠部分切除，只留下根尖，置于果胶酶和纤维素酶的混合液中解离，解离时间为12h，酶解温度为37℃；
[0035](5)制片：吸出解离液，用纯水清洗，再用固定液固定，用枪头拍打制成悬浮液，再将悬浮液滴至载玻片上，干燥即得染色体制片。
[0036]实施例3
[0037]一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法，染色体制片方法具体包括以下步骤：
[0038](1)取样：将野牡丹属植物进行水培，待野牡丹属植物根系长至2cm时，取0.5cm根尖作为染色体样本，其中，水培方式为：采用野牡丹属植物幼嫩茎段放入清水中进行培养，水培时间为45d，水培季节为夏初；
[0039](2)固定：利用固定液将上述染色体样本进行固定，其中，固定液为乙醇、冰醋酸和三氯甲烷的混合物，固定液中乙醇、冰醋酸、本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法，其特征在于：所述染色体制片方法具体包括以下步骤：(1)取样：将野牡丹属植物进行水培，待野牡丹属植物根系长至1～2cm时，取0.5cm根尖作为染色体样本；(2)固定：利用固定液将上述染色体样本进行固定；(3)低渗：将染色体样本从固定液中取出，放入0.075mol/L的KCL溶液或纯水中进行低渗；(4)酶解：待染色体样本沉下去后夹入另一培养基皿中将根冠部分切除，只留下根尖，置于果胶酶和纤维素酶的混合液中解离；(5)制片：吸出解离液，用纯水清洗，再用固定液固定，用枪头拍打制成悬浮液，再将悬浮液滴至载玻片上，干燥即得染色体制片。2.根据权利要求1所述的一种基于FISH杂交的野牡丹属植物染色体制片方法，其特征在于：所述步骤(1)中的水培方式为：采用野牡丹属植物...
【专利技术属性】
技术研发人员：何雪娇，余智城，林秀香，陈振东，
申请(专利权)人：福建省热带作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：
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