用于生产血液产品的材料和方法技术

本文提供了用于制备血液产品的材料和方法。在一个方面中，本文提供了一种包含血小板或血小板衍生物和水性介质的组合物，其中水性介质的蛋白质浓度小于供体单采血浆的蛋白质浓度的50％。浓度的50％。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于生产血液产品的材料和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年5月3日提交的美国临时申请序列号62/843,061和于2019年11月15日提交的美国临时申请序列号62/936,122的优先权，其各自通过引用以其整体并入本文。
[0003]政府利益的声明
[0004]本专利技术是在美国卫生与公众服务部(U.S.Department of Health and Human Services)的生物医学高级研究与发展局(BARDA)授予的合同号HHSO100201300021的政府支持下完成的。政府享有对本专利技术的一定权利。


[0005]本公开总体上涉及血液产品(诸如具有降低的HLA抗体含量的血液产品)以及生产此类血液产品的方法。

技术介绍

[0006]血液是多种组分的复杂混合物。一般来说，血液可以被描述为包含四个主要部分：红细胞、白细胞、血小板和血浆。前三种是细胞或细胞样组分，而第四种(血浆)是液体组分，其包括盐、蛋白质和许多身体功能所需的其他因子的广泛且可变的混合物。血液的组分可以通过各种方法相互分离。一般而言，差速离心是目前最常用的基于大小和(在一些应用中)密度来分离血液的不同组分的方法。
[0007]灭活的血小板(也通常被称为凝血细胞(thrombocyte))是血液中参与凝血过程的小的、通常形状不规则(例如盘状或卵状)的巨核细胞衍生的组分。它们有助于保护身体避免因外伤或损伤以及正常生理活动造成的过度失血。血小板被认为是正常止血的关键所在，为防止血液从受伤的血管中逸出提供了第一道防线。血小板通常通过粘附至破裂血管的内层，在此过程中被激活，变成无定形的形状，并与存在于血浆中或由血小板本身或血液的其他组分释放的凝血系统的组分相互作用而发挥作用。已发现纯化的血小板用于治疗血小板计数低(血小板减少症)和血小板功能异常(血栓栓塞症)的受试者。浓缩的血小板通常用于控制损伤后或获得性血小板功能缺陷或不足期间的出血，例如在手术期间发生的出血和由于血小板抑制剂的存在而引起的出血。

技术实现思路

[0008]该文件至少部分地基于游离蛋白(例如抗体(例如，人白细胞抗原(HLA)抗体或人中性粒细胞抗原(HNA)抗体))水平降低的血液产品(例如，包含血小板或血小板衍生物(例如，血栓小体)的组合物)的生产。
[0009]本文提供了一种包括血小板和水性介质的组合物，其中所述水性介质的蛋白质浓度小于供体单采血浆的蛋白质浓度的50％。
[0010]实施方式可以具有以下特征中的一个或多个。水性介质的蛋白质浓度可以小于供
体单采血浆的蛋白质浓度的30％。水性介质具有的人白细胞抗原(HLA)I类抗体的浓度可以小于供体单采血浆中人白细胞抗原(HLA)I类抗体浓度的30％。水性介质具有的人白细胞抗原(HLA)II类抗体的浓度可以小于供体单采血浆中人白细胞抗原(HLA)II类抗体浓度的30％。水性介质具有的人中性粒细胞抗原(HNA)抗体的浓度可以小于供体单采血浆中HNA抗体浓度的30％。蛋白质浓度可以小于供体单采血浆的蛋白质浓度的10％。水性介质具有的人HLA I类抗体的浓度可以小于供体单采血浆中HLA I类抗体浓度的10％。水性介质具有的人HLA II类抗体的浓度可以小于供体单采血浆中HLA II类抗体浓度的10％。水性介质具有的人HNA抗体浓度可以小于供体单采血浆中HNA抗体浓度的10％。蛋白质浓度可以小于供体单采血浆蛋白质浓度的5％。水性介质具有的人HLA I类抗体的浓度可以小于供体单采血浆中HLA I类抗体浓度的5％。水性介质具有的人HLA II类抗体的浓度可以小于供体单采血浆中HLA II类抗体浓度的5％。水性介质具有的人HNA抗体浓度可以小于供体单采血浆中HNA抗体浓度的5％。蛋白质浓度可以小于供体单采血浆蛋白质浓度的3％。水性介质的人HLA I类抗体的浓度可以小于供体单采血浆中HLA I类抗体浓度的3％。水性介质具有的人HLA II类抗体的浓度可以小于供体单采血浆中HLA II类抗体浓度的3％。水性介质具有的人HNA抗体浓度可以小于供体单采血浆中HNA抗体浓度的3％。蛋白质浓度可以小于供体单采血浆蛋白质浓度的1％。水性介质具有的人HLA I类抗体的浓度可以小于供体单采血浆中HLA I类抗体浓度的1％。水性介质具有的人HLA II类抗体的浓度可以小于供体单采血浆中HLA II类抗体浓度的1％。水性介质具有的人HNA抗体浓度可以小于供体单采血浆中HNA抗体浓度的1％。蛋白质浓度可以通过在280纳米(nm)处的吸光度来确定，其中路径长度为0.5cm。在一些实施例中，在280nm处的吸光度可以小于1.7AU。在一些实施例中，在280nm处的吸光度可以小于1.66AU。在一些实施例中，在280nm处的吸光度可以小于1.6AU。在一些实施例中，血小板计数可以是至少200
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103个血小板/μL。在一些实施例中，血小板计数可以是至少2250
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103个血小板/μL。在一些实施例中，组合物可以具有小于0.2
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106个红细胞/μL的红细胞计数。在一些实施例中，组合物可以进一步包括红细胞。在一些实施例中，红细胞计数可以小于0.2
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106个红细胞/μL。根据监管机构批准的测试，组合物对于HLA I类抗体可能呈阴性。根据监管机构批准的测试，组合物对于HLA II类抗体可能呈阴性。根据监管机构批准的测试，组合物对于HNA抗体可能呈阴性。如通过流式细胞术使用分别包被有I类HLA、II类HLA或HNA的珠对组合物测定的，对选自由HLA I类抗体、HLA II类抗体和HNA抗体组成的群组的抗体呈阳性的珠的百分比可以小于5％。如通过流式细胞术使用分别包被有I类HLA、II类HLA或HNA的珠对组合物测定的，对选自由HLA I类抗体、HLA II类抗体和HNA抗体组成的群组的抗体呈阳性的珠的百分比可以小于3％。如通过流式细胞术使用分别包被有I类HLA、II类HLA或HNA的珠对组合物测定的，对选自由HLA I类抗体、HLA II类抗体和HNA抗体组成的群组的抗体呈阳性的珠的百分比可以小于1％。如通过流式细胞术使用包被有I类HLA的珠对组合物测定的，对HLA I类抗体呈阳性的珠的百分比可以小于5％。如通过流式细胞术使用包被有I类HLA的珠对组合物测定的，对HLA I类抗体呈阳性的珠的百分比可以小于3％。如通过流式细胞术使用包被有I类HLA的珠对组合物测定的，对HLA I类抗体呈阳性的珠的百分比可以小于1％。如通过流式细胞术使用包被有II类HLA的珠对组合物测定的，对HLA II类抗体呈阳性的珠的百分比可以小于5％。如通过流式细胞术使用包被有II类HLA的珠对组合物测定的，对HLA II类抗体呈阳性的珠的百分比可以小于3％。如通过流式细胞
术使用包被有II类HLA的珠对组合物测定的，对HLA II类抗体呈阳性的珠的百分比可以小于1％。如通过流式细胞术使用包被有HNA的珠对组合物测定的，对HNA抗体呈阳性的珠的百分比可以小于5％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于制备包含血小板或血小板衍生物和水性介质的组合物的方法，所述方法包括：对包含血小板的起始材料、包含血小板的稀释的起始材料、浓缩的血小板组合物或其组合进行切向流过滤(TFF)，从而制备包含血小板或血小板衍生物和水性介质的组合物，其中所述水性介质的蛋白质浓度小于或等于供体单采血浆的蛋白质浓度的50％。2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括病原体减少步骤。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述病原体减少步骤在TFF之前。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述起始材料具有约60至约80mg/mL的蛋白质浓度。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中TFF包括用至少两个渗滤体积渗滤。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中TFF包括用包含缓冲剂、碱、负载剂、任选地盐和任选地至少一种有机溶剂的制剂渗滤。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中TFF包括将缓冲液交换成包含缓冲剂、碱、负载剂、任选地盐和任选地至少一种有机溶剂的制剂。8.根据权利要求6至7中任一项所述的方法，其中所述制剂包含缓冲剂、碱、和负载剂，所述缓冲剂包含4
‑
(2
‑
羟乙基)
‑1‑
哌嗪乙烷磺酸(HEPES)，所述碱包含碳酸氢钠，所述负载剂包含海藻糖、聚蔗糖或其组合。9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其中所述制剂包含有机溶剂，所述有机溶剂包含乙醇、DMSO或其组合。10.根据权利要求1至9中任一项的方法，其中所述水性介质的蛋白质浓度小于或等于供体单采血浆的蛋白质浓度的30％。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述水性介质的蛋白质浓度小于或等于供体单采血浆的蛋白质浓度的10％。12.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述水性介质的蛋白质浓度为供体单采血浆的蛋白质浓度的约5％至约15％。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述水性介质的蛋白质浓度为供体单采血浆的蛋白质浓度的约7％至约10％。14.根据权利要求1至13中任一项的方法，其中所述组合物包含小于5.0％(以散射强度计)的微粒。15.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述组合物包含小于4.0％(以散射强度计)的微粒。16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，进一步包括冻干和/或低温冷冻保存包含血小板或血小板衍生物的所述组合物。17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，进一步包括热处理包含血小板或血小板衍生物的所述组合物。18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述血小板或血小板衍生物具有至少55％的CD41阳性百分比。19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述血小板或血小板衍生物具有至少80％的CD42阳性百分比。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述血小板或血小板衍生物具有至少70％的膜联蛋白V阳性百分比。21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述血小板或血小板衍生物具有至少8％的CD47阳性百分比。22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述血小板或血小板衍生物具有至少80％的CD62阳性百分比。23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述血小板或血小板衍生物具有与所述细胞膜结合的纤维蛋白原。24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中当存在含有组织因子和磷脂的试剂时，所述血小板或血小板衍生物当在约4.8
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103个颗粒/μL的浓度下时产生至少25nM的凝血酶峰高(TPH)。25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述血小板或血小板衍生物具有每106个颗粒至少1.5个凝血酶生成效力单位(TGPU)的效力。26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述血小板或血小板衍生物当在至少约70
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103个颗粒/μL的浓度下时，在总血栓形成分析系统(T
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TAS)测定中产生小于14分钟的闭塞时间。27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述血小板衍生物包括血栓小体。28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中所述起始材料是：a)基于监管机构批准的测试，对HLA I类抗体呈阳性；b)基于监管机构批准的测试，对HLA II类抗体呈阳性；c)基于监管机构批准的测试，对HNA抗体呈阳性；或者d)a)、b)和c)中的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：约书亚，
申请(专利权)人：塞尔菲乐有限公司，
类型：发明
国别省市：