一种产乳酸牛链球菌及其分离方法技术

本发明专利技术提供一种产乳酸牛链球菌及其分离方法，涉及牛链球菌分离技术领域。该产乳酸牛链球菌的分离方法，包括以下步骤：S1：原料制取：取正常牛的粪便100克，对其进行稀释，过滤杂质，留下滤液，装入无菌厌氧密封袋中并密封，S2：制备培养基：以水为溶质，向其中加入以下质量份数：可溶性淀粉2.0

【技术实现步骤摘要】
一种产乳酸牛链球菌及其分离方法


[0001]本专利技术涉及牛链球菌分离
，具体为一种产乳酸牛链球菌及其分离方法。

技术介绍

[0002]牛链球菌是食草动物消化道内的正常菌群，常见于牛的胃肠道和粪便，也可以从狗、大熊猫、单峰驼、黑鹿、羊、考拉和驯鹿等动物的胃肠道和粪便中分离到。牛链球菌也是人胃肠道内的常见菌群，可以从人的胃肠道、粪便、以及食品中分离到。所以，一直以来，人们都认为牛链球菌是许多动物、人胃肠道内的一种无害细菌。但是，1945年，Mc
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Neal和Blevins首次报道牛链球菌可以引起感染性心内膜炎。心内膜炎患者发病前多有瓣膜异常或系修补瓣膜。牛链球菌败血症或心内膜炎患者常伴有肠道恶性肿瘤。
[0003]现有关于对牛链球菌的分离技术仍存在缺陷，对于培养基的制备组分和要求较高，同时对于牛链球菌和其它细菌的培养分离存在不便，导致分离不完全，且分离后的牛链球菌纯度较低，所以现在需要一种能够解决以上问题的产乳酸牛链球菌及其分离方法。

技术实现思路

[0004](一)解决的技术问题
[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种产乳酸牛链球菌及其分离方法，解决了分离不便，且纯度低的问题。
[0006](二)技术方案
[0007]为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种产乳酸牛链球菌，该牛链球菌取自牛的粪便中。
[0008]一种产乳酸牛链球菌的分离方法，包括以下步骤：
[0009]S1：原料制取
[0010]取正常牛的粪便100克，对其进行稀释，过滤杂质，留下滤液，装入无菌厌氧密封袋中并密封；
[0011]S2：制备培养基
[0012]以水为溶质，向其中加入以下质量份数：可溶性淀粉2.0
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4.0克、葡萄糖10
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30克、磷酸氢二钾0.5
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1.5克、碳酸钙3
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5克、硫酸镁0.2
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0.4克、酵母粉0.4
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0.6克、琼脂20
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40克、1％结晶紫溶液1毫升；
[0013]S3：进行培养
[0014]取S1中滤液10毫升，将其与S2中制得的培养基进行混合，并置于厌氧培养瓶中，继续放置于37℃保温箱中震荡培养24小时；
[0015]S4：进行分离
[0016]除去厌氧培养瓶中的培养液，保留沉淀物，挑取少许沉淀，置于分离培养板中，在厌氧条件下37到39℃避光培养24到36小时，挑选表面湿润、有光泽、颜色为乳白色的圆滴状菌落，进行革兰氏染色鉴定，选择鉴定结果为革兰氏阳性的菌落进一步转移至新的分离培
养板中分离培养；
[0017]S5：进行保存
[0018]用接种棒挑出纯菌株的菌落，转至含保存培养基的冻存管中，旋盖密封，并涡旋震荡30秒，投入液氮速冻，随后再转移至－80℃超低温冰箱长期保存。
[0019]优选的，所述S2中，其制备方法为：把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他组分，使它溶解，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水至总容量为1000毫升，调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。
[0020]优选的，所述S4中，重复分离培养和鉴定的次数为五次，以得到纯菌种。
[0021](三)有益效果
[0022]本专利技术提供了一种产乳酸牛链球菌及其分离方法。具备以下有益效果：
[0023]1、通过在常用的培养基组分中加入淀粉和琼脂，其作为能源，可加快牛链球菌高于其它细菌的生长速率，迅速增殖，形成优势菌群，更易后续分离。
[0024]2、通过在常用的培养基组分中加入结晶紫溶液，易于对颜色进行区分，可快速将牛链球菌从其它细菌中挑选出来，可加快进程，提高分离的效率。
[0025]3、通过对菌落进行革兰氏染色鉴定，且进行重复分离培养和五次鉴定，以得到纯菌种，可极大程度地提高牛链球菌菌种的纯度，使得分离的效果更好。
具体实施方式
[0026]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]实施例一：
[0028]本专利技术实施例提供一种产乳酸牛链球菌，该牛链球菌取自牛的粪便中。
[0029]一种产乳酸牛链球菌的分离方法，包括以下步骤：
[0030]S1：原料制取
[0031]取正常牛的粪便100克，对其进行稀释，过滤杂质，留下滤液，装入无菌厌氧密封袋中并密封；
[0032]S2：制备培养基
[0033]以水为溶质，向其中加入以下质量份数：可溶性淀粉2.0克、葡萄糖10克、磷酸氢二钾0.5克、碳酸钙3克、硫酸镁0.2克、酵母粉0.4克、琼脂20克、1％结晶紫溶液1毫升，具体制备方法为：把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他组分，使它溶解，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水至总容量为1000毫升，调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用；
[0034]S3：进行培养
[0035]取S1中滤液10毫升，将其与S2中制得的培养基进行混合，并置于厌氧培养瓶中，继续放置于37℃保温箱中震荡培养24小时；
[0036]S4：进行分离
[0037]除去厌氧培养瓶中的培养液，保留沉淀物，挑取少许沉淀，置于分离培养板中，在
厌氧条件下37到39℃避光培养24到36小时，挑选表面湿润、有光泽、颜色为乳白色的圆滴状菌落，进行革兰氏染色鉴定，选择鉴定结果为革兰氏阳性的菌落进一步转移至新的分离培养板中分离培养，重复分离培养和鉴定的次数为五次，以得到纯菌种；
[0038]S5：进行保存
[0039]用接种棒挑出纯菌株的菌落，转至含保存培养基的冻存管中，旋盖密封，并涡旋震荡30秒，投入液氮速冻，随后再转移至－80℃超低温冰箱长期保存。
[0040]实施例二：
[0041]本专利技术实施例提供一种产乳酸牛链球菌，该牛链球菌取自牛的粪便中。
[0042]一种产乳酸牛链球菌的分离方法，包括以下步骤：
[0043]S1：原料制取
[0044]取正常牛的粪便100克，对其进行稀释，过滤杂质，留下滤液，装入无菌厌氧密封袋中并密封；
[0045]S2：制备培养基
[0046]以水为溶质，向其中加入以下质量份数：可溶性淀粉3.0克、葡萄糖20克、磷酸氢二钾1.0克、碳酸钙4克、硫酸镁0.3克、酵母粉0.5克、琼脂30克、1％结晶紫溶液1毫升，具体制备方法为：把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他组分，使它溶解，加热到煮沸时加入琼脂，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产乳酸牛链球菌，其特征在于：该牛链球菌取自牛的粪便中。2.一种产乳酸牛链球菌的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：原料制取取正常牛的粪便100克，对其进行稀释，过滤杂质，留下滤液，装入无菌厌氧密封袋中并密封；S2：制备培养基以水为溶质，向其中加入以下质量份数：可溶性淀粉2.0
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4.0克、葡萄糖10
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30克、磷酸氢二钾0.5
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1.5克、碳酸钙3
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5克、硫酸镁0.2
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0.4克、酵母粉0.4
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0.6克、琼脂20
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40克、1％结晶紫溶液1毫升；S3：进行培养取S1中滤液10毫升，将其与S2中制得的培养基进行混合，并置于厌氧培养瓶中，继续放置于37℃保温箱中震荡培养24小时；S4：进行分离除去厌氧培养瓶中的培养液，...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴静，齐萌，陈荣，
申请(专利权)人：塔里木大学，
类型：发明
国别省市：