一种用于特禽性别鉴定的PCR引物、试剂盒及其方法技术

本发明专利技术提供一种用于特禽性别鉴定的PCR引物、试剂盒及其方法，所述特禽性别鉴定用PCR引物序列如SEQ ID NO.1和/SEQ ID NO.2所示。通过本发明专利技术的PCR引物进行PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳，利用电泳结果的条带数来确定火鸡、珍珠鸡、七彩山鸡、鹧鸪的性别，具有操作简单方便，鉴别结果快速准确，便于基层推广和使用，具有广阔的市场应用前景，此外，基于本发明专利技术方法开发的检测试剂盒，可产生可观的经济效益和良好的社会价值。的社会价值。

【技术实现步骤摘要】
一种用于特禽性别鉴定的PCR引物、试剂盒及其方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于特禽性别鉴定的PCR引物、试剂盒及其方法。

技术介绍

[0002]特禽是特种经济禽类的简称，同鸡、鸭、鹅等家禽相比，特禽一般驯化时间较短，有的甚至处于半野生状态，如：火鸡、珍珠鸡、七彩山鸡、鹧鸪等。特禽一般具有较高的经济价值，养殖效益高，养殖前景好。在特禽生产中，需要的母禽的数量要远远大于公禽的数量，比如：在自然交配时，公母配比一般为1:10，人工授精，比例则可达1:20。因此，需要进行早期性别鉴定，提前淘汰公禽。
[0003]雏特禽公母在外形上非常相似，无法从体型外貌进行鉴别，也没有发现类似家禽的金银色羽、横斑羽、快慢羽等伴性遗传性状。目前特禽早期的性别鉴定主要通过翻肛观察生殖突起进行鉴别，一般泄殖腔下部有两个浅红色椭圆形球状突起的为公特禽，有浅粉红色八字状皱襞的为母特禽。但翻肛鉴别须在雏禽出壳一天内进行，雏禽肛门难以翻开，生殖突起萎缩甚至陷入泄殖腔深处，不便观察。翻肛鉴别劳动强度大、工作环境差、专业性高，误鉴率也较高。通过分子生物学手段，快速、准确的进行特禽早期性别鉴定具有重要意义。
[0004]随着我国特禽产业的快速发展，亟需开发一种简单方便，能够快速、准确鉴别特禽性别的方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种设计合理，可用于特禽早期性别快速鉴定的PCR引物。
[0006]本专利技术通过以下技术方案实现本专利技术的目的：
[0007]本专利技术目的之一在于提供一种性别鉴定用PCR引物，所述引物序列如SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2所示。即所述引物的核苷酸序列为：
[0008]正向引物(SEQ ID NO.1)：5'
‑
TATGGACTAGAGCTGCACAAA
‑
3'；
[0009]反向引物(SEQ ID NO.2)：5'
‑
GAGCCATCTTCTGTCTCAA
‑
3'。
[0010]本专利技术目的之二在于提供包含本专利技术所述的性别鉴定用PCR引物的试剂盒。
[0011]在本专利技术的一种实施例中，本专利技术所述的试剂盒包含本专利技术所述的PCR引物、PCR 反应液，在一些实施例中，还可以包含DNA提取液。
[0012]本专利技术目的之三在于提供本专利技术所述的PCR引物或本专利技术所述的试剂盒在养殖业中的应用。
[0013]本专利技术目的之四在于提供本专利技术所述的PCR引物或本专利技术所述的试剂盒在火鸡性别鉴定中的应用。
[0014]本专利技术所述的在火鸡性别鉴定中的应用，通过本专利技术所述的引物进行PCR扩增，电泳结果呈现1083bp一条带的为公火鸡，呈现1083bp和766bp的两条带时为母火鸡。
[0015]本专利技术目的之五在于提供本专利技术所述的PCR引物或本专利技术所述的试剂盒在珍珠鸡性别鉴定中的应用。
[0016]本专利技术所述的在珍珠鸡性别鉴定中的应用，通过本专利技术所述的引物进行PCR扩增，电泳结果呈现960bp一条带的为公珍珠鸡，呈现960bp和771bp的两条带时为母珍珠鸡。
[0017]本专利技术目的之六在于提供本专利技术所述的PCR引物或本专利技术所述的试剂盒在七彩山鸡性别鉴定中的应用。
[0018]本专利技术所述的在七彩山鸡性别鉴定中的应用，通过本专利技术所述的引物进行PCR扩增，电泳结果呈现1118bp一条带的为公七彩山鸡，呈现1118bp和774bp的两条带时为母七彩山鸡。
[0019]本专利技术目的之七在于提供本专利技术所述的PCR引物或本专利技术所述的试剂盒在鹧鸪性别鉴定中的应用。
[0020]本专利技术所述的在鹧鸪性别鉴定中的应用，通过本专利技术所述的引物进行PCR扩增，电泳结果呈现945bp一条带的为公鹧鸪，呈现945bp和815bp的两条带时为母鹧鸪。
[0021]本专利技术还提供一种火鸡、珍珠鸡、七彩山鸡或鹧鸪性别快速鉴定方法，包括以下步骤：
[0022]1)提取待测火鸡、珍珠鸡、七彩山鸡或鹧鸪的基因组DNA；
[0023]2)以步骤1)中提取的DNA为模板，利用本专利技术所述引物对，进行PCR扩增反应；
[0024]3)PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，
[0025]当待测特禽为火鸡时，电泳结果呈现1083bp一条带的为公火鸡，呈现1083bp和766 bp的两条带时为母火鸡；
[0026]当待测特禽为珍珠鸡时，电泳结果呈现960bp一条带的为公珍珠鸡，呈现960bp和 771bp的两条带时为母珍珠鸡；
[0027]当待测特禽为七彩山鸡时，电泳结果呈现1118bp一条带的为公七彩山鸡，呈现1118 bp和774bp的两条带时为母七彩山鸡。
[0028]当待测特禽为鹧鸪时，电泳结果呈现945bp一条带的为公鹧鸪，呈现945bp和815bp 的两条带时为母鹧鸪。
[0029]本专利技术所述的方法，步骤1)提取待测特禽的基因组DNA可以按照本领域常规方法提取，例如可以选用包括但不限于羽毛、血液、组织、器官等进行待测特禽的基因组DNA 的提取。
[0030]本专利技术所述的方法，步骤2)中PCR反应体系可以为本领域的常规体系，在本专利技术的一种具体的实施方式中，为：2
×
PCR Mix(上海生工生物有限公司)12.5μL，10μ mol/L正向和反向引物各0.5μL，50
‑
100μg/ml模板DNA 1μL，超纯水10.5μL。
[0031]本专利技术所述的方法，步骤2)中PCR反应程序可以为本领域的常规体系，在本专利技术的一种具体的实施方式中，为：95℃3min，(95℃30s，59℃30s，72℃30s)33循环， 72℃7min。
[0032]本专利技术与现有技术相比具有以下优点：本专利技术通过设计的PCR引物，进行PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳，利用电泳结果的条带数来确定特禽的性别，具有操作简单方便，鉴别结果快速准确，便于基层推广和使用，具有广阔的市场应用前景，此外，基于本专利技术方法开发的检测试剂盒，可产生可观的经济效益和良好的社会价值。
[0033]本专利技术的引物对特禽品种限制性小，因此对于所述的本专利技术所述的火鸡、珍珠鸡、
七彩山鸡和鹧鸪没有具体品种的限制。
附图说明
[0034]图1为本专利技术实施例1火鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
[0035]图2为本专利技术实施例2火鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
[0036]图3为本专利技术实施例3珍珠鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
[0037]图4为本专利技术实施例4珍珠鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
[0038]图5为本专利技术实施例5七彩山鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
[0039]图6为本专利技术实施例6七彩山鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
[0040]图7为本专利技术实施例7鹧鸪的PCR扩增产物的电泳图谱。
[0041本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种性别鉴定用PCR引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列为：正向引物序列如SEQ ID NO.1所示、反向引物序列如SEQ ID NO.2所示。2.包含权利要求1所述的性别鉴定用PCR引物的试剂盒；优选的，所述的试剂盒还包含PCR反应液和/或DNA提取液。3.权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒在火鸡性别鉴定中的应用，所述应用具体为通过权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒进行PCR扩增，电泳结果呈现1083bp一条带的为公火鸡，呈现1083bp和766bp的两条带时为母火鸡。4.权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒在珍珠鸡性别鉴定中的应用，所述应用具体为通过权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒进行PCR扩增，电泳结果呈现960bp一条带的为公珍珠鸡，呈现960bp和771bp的两条带时为母珍珠鸡。5.权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒在七彩山鸡性别鉴定中的应用，所述应用具体为通过权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒进行PCR扩增，电泳结果呈现1118bp一条带的为公七彩山鸡，呈现1118bp和774bp的两条带时为母七彩山鸡。6.权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒在鹧鸪性别鉴定中的应用，所述应用具体为通过权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒进行PCR扩增，电泳结果呈现945bp一条带的为公鹧鸪，呈现945bp和815bp...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾晓旭，高玉时，唐修君，陆俊贤，樊艳凤，周倩，唐梦君，张小燕，黄胜海，陈大伟，张晶鑫，葛庆联，张静，刘茵茵，马丽娜，蒲俊华，马尹鹏，顾荣，王珏，叶俊文，陆雪林，袁红艳，
申请(专利权)人：江苏省家禽科学研究所，
类型：发明
国别省市：