Eudesmanolide倍半萜类化合物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种Eudesmanolide倍半萜类化合物，结构为以下结构的一种：所述Eudesmanolide倍半萜类化合物是从北极土壤弯孢聚壳属真菌D

【技术实现步骤摘要】
Eudesmanolide倍半萜类化合物及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于海洋生物医药
，具体涉及一种从北极土壤弯孢聚壳属真菌D
‑
1(Eutypella sp.D
‑
1)中经固体培养基高产发酵、提取、分离纯化得到的Eudesmanolide类化合物及其制备方法与在制备抗菌药物中的应用。

技术介绍

[0002]南北两极地区极端的生存环境，导致极地真菌在进化的过程中形成了独特的防御能力，从而产生许多结构新颖、活性显著的次级代谢产物，这些代谢产物是创新药物的重要来源和新的突破口，一直是天然药物学家的研究对象。药源材料Eutypella sp.D
‑
1分离自北极高纬度(78
°
55
’
N)仙女木根基土壤，隶属于子囊菌门Ascomycetes、炭角菌目Xylariales、胶孢壳科Diatrypaceae、弯孢聚壳属Eutypella。目前，文献报道该种属的次级代谢产物主要包括桉烷型倍半萜、海松烷二萜、甾体、苯并吡喃衍生物、γ
‑
内酯类以及细胞松弛素类化合物等。这些化合物存在着多种生物活性，如抗肿瘤、神经毒性、抗疟、抗菌等，从该种属中分离得到的海松烷二萜化合物Libertellenone C有非常良好的抗菌活性(参见文献：谭俊杰,张捷,李医明.弯孢聚壳属真菌次级代谢产物及其生物活性.菌物学报,2017,36(9):1181
‑
1191.)。
[0003]目前，报道的源于该种属的Eudesmanolide类化合物的产量极低，严重限制其后续应用。专利技术人卢小玲前期(Natural Product Research,2017,3,1676
‑
1681)报道了化合物2eut
‑
Guaiane sesquiterpene的提取制备方法，但产量极低，仅有0.1％，如何获得高产量和高纯度并适合药物开发的化合物2eut
‑
Guaiane sesquiterpene的发酵、提取和分离方法，仍是目前需要解决的技术问题。本专利技术采用合成固体培养基进行发酵，化合物2eut
‑
Guaiane sesquiterpene的产量是前期报道的液体培养基产量的500倍。同时，至今未见从该属真菌中分离得到具有抗菌活性的Eudesmanolide类化合物1的报道；也未见化合物2eut
‑
Guaiane sesquiterpene对粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)和绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)具有抗菌活性的报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一目的是提供一种Eudesmanolide倍半萜类化合物。
[0005]本专利技术的第二目的是提供一种所述Eudesmanolide倍半萜类化合物的制备方法。
[0006]本专利技术的第三目的是提供一种所述Eudesmanolide倍半萜类化合物在制备抗菌药物中的应用。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0008]本专利技术的第一方面提供了一种Eudesmanolide倍半萜类化合物，结构为以下结构的一种：
[0009][0010]所述Eudesmanolide倍半萜类化合物是从北极土壤弯孢聚壳属真菌D
‑
1(Eutypella sp.D
‑
1)中经提取、分离纯化得到。
[0011]本专利技术的第二方面，提供了一种所述Eudesmanolide倍半萜类化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0012]第一步，制备总提物
[0013]从保种平板上挑取少量保藏编号为CCTCC NO：M 2013144的弯孢聚壳菌D
‑
1(Eutypella sp.D
‑
1)的菌丝体，接种到250mL三角瓶中进行种子培养，每个三角瓶装100mL的PDB培养基，28℃摇床恒温培养，转速180r/min，培养3.5天后获得种子液；然后将种子液按照5％v/v的接种量接种到装有200mL固体发酵培养基的20mm
×
20cm培养皿中进行扩大培养，置于20℃静置培养45天获得发酵液。
[0014]所述PDB培养基配方为：马铃薯浸出粉10g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL。
[0015]所述固体发酵培养基配方为：蔗糖51.4g/L，硝酸钠3.3g/L，尿素2.5g/L，酵母提取物0.7g/L，三水磷酸氢二钾0.07g/L，七水硫酸镁0.4g/L，氯化钾0.625g/L，七水硫酸亚铁18.75mg/L，无水氯化钙6.5g/L，六水氯化钴3.125mg/L，琼脂20g/L。
[0016]将上述培养得到的发酵液过滤，分别获得菌体和菌液；菌液用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液蒸干溶剂得到第一部分浸膏；菌体用二氯甲烷:甲醇＝1:1超声提取3次，30min/次，浓缩提取液至无有机溶剂，加水混悬，用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液蒸干溶剂得到第二部分浸膏；将上述第一部分浸膏和第二部分浸膏合并获得总提物；
[0017]第二步，分离纯化
[0018]将上述总提物经减压液相柱色谱VLC，以石油醚:乙酸乙酯＝100:1，80:1，50:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，0:1为溶剂进行梯度洗脱，根据TLC薄层层析显色合并相似流分，得到20个组分Fr.A
‑
T；
[0019]组分Fr.K经反相高效液相纯化，条件为65％甲醇/水，流速2mL/min，检测波长为280nm，保留时间为37分钟，得到化合物1；保留时间为39分钟，得到化合物2。
[0020]所述化合物1、化合物2的结构如下所示：
[0021][0022]本专利技术的第三方面，提供了一种Eudesmanolide倍半萜类化合物或其药学上可接受的盐在制备抗菌药物中的应用。
[0023]所述Eudesmanolide倍半萜类化合物的结构为以下结构的一种：
[0024][0025]所述抗菌药物指的是抗大肠杆菌(Escherichia coli)药物、抗枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)药物、抗金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)药物、抗粪肠球菌(Enterococcus faecalis)药物、抗绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)药物。
[0026]体外抗菌实验结果显示，本专利技术的化合物对大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)的生长都具有强烈的抑制活性，其抑菌活性MIC值大小与阳性对照药氨苄西林相当。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Eudesmanolide倍半萜类化合物，其特征在于，结构为以下结构的一种：2.根据权利要求1所述的Eudesmanolide倍半萜类化合物，其特征在于，所述Eudesmanolide倍半萜类化合物是从北极土壤弯孢聚壳属真菌D
‑
1中经提取、分离纯化得到。3.一种Eudesmanolide倍半萜类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，制备总提物从保种平板上挑取少量保藏编号为CCTCC NO：M 2013144的弯孢聚壳菌D
‑
1的菌丝体，接种到250mL三角瓶中进行种子培养，每个三角瓶装100mL的PDB培养基，28℃摇床恒温培养，转速180r/min，培养3.5天后获得种子液；然后将种子液按照5％v/v的接种量接种到装有200mL固体发酵培养基的20mm
×
20cm培养皿中进行扩大培养，置于20℃静置培养45天获得发酵液；所述PDB培养基配方为：马铃薯浸出粉10g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL；所述固体发酵培养基配方为：蔗糖51.4g/L，硝酸钠3.3g/L，尿素2.5g/L，酵母提取物0.7g/L，三水磷酸氢二钾0.07g/L，七水硫酸镁0.4g/L，氯化钾0.625g/L，七水硫酸亚铁18.75mg/L，无水氯化钙6.5g/L，六水氯化钴3.125mg/L，琼脂20g/L；将上述...

【专利技术属性】
技术研发人员：于豪冰，刘小宇，宁哲，胡波，陈海燕，程思桐，卢小玲，何颖，焦炳华，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军特色医学中心，
类型：发明
国别省市：