一种富含二肽Hyp-Gly的胶原小分子肽及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种富含二肽Hyp

【技术实现步骤摘要】
一种富含二肽Hyp
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Gly的胶原小分子肽及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于生物活性肽领域，具体涉及一种富含二肽Hyp
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Gly的胶原小分子肽及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是哺乳动物中最丰富的蛋白质，广泛存在于动物体内的皮肤、骨骼和血管等组织中。其中Ⅰ型胶原蛋白占全部胶原蛋白含量的80
‑
90％，主要分布于皮肤、肌腱等组织，也是水产品加工废弃物(皮、骨和鳞)中含量最多的蛋白质。胶原蛋白肽是通过酶解或发酵法水解胶原蛋白得到的产物，分子量较小，在体内更易被吸收利用。
[0003]皮肤老化主要由生理因素和环境因素而引起。紫外线所引起的老化被称为光老化，是由环境因素所引起的老化中最重要的一种，占面部老化的80％，主要由UVA(320
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400nm)和UVB(290
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320nm)引起。胶原蛋白肽可以提高皮肤弹性、修复胶原纤维、减少皱纹及保湿，因此胶原蛋白肽对皮肤光老化有明显的改善及预防作用。
[0004]羟脯氨酸(Hyp)是胶原蛋白中的特征性氨基酸，这也是导致胶原蛋白肽的活性不同于其他蛋白来源肽的原因之一。由于含Hyp胶原小分子肽的生物利用度较高，这类肽在体内可能更易发挥活性作用。关于含Hyp胶原小分子肽改善皮肤的作用，目前报道多集中于Gly
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Pro
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Hyp这条胶原三肽，因此近些年胶原肽的制备工艺也大多集中在富集Gly
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Pro<br/>‑
Hyp。Shigemura等人报道，胶原二肽Hyp
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Gly能够刺激皮肤成纤维细胞的生长和透明质酸合成(Shigemura et al.,Food Chemistry,2011.129(3):1019
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1024)。此外，胶原二肽Hyp
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Gly的吸收效率可能比三肽Gly
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Pro
‑
Hyp更高。因此，制备富含二肽Hyp
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Gly的胶原小分子肽有助于开发更有效的美容类产品。
[0005]在三螺旋区域含有Gly
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X
‑
Y三肽重复序列是胶原蛋白的典型特征。X和Y可以是任何残基，但通常分别是脯氨酸(Pro)和羟脯氨酸(Hyp)。基于该特点，Hyp
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Gly是胶原序列中出现频次最多的肽序列。因此，胶原蛋白序列中二肽片段Hyp
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Gly的理论含量较高。但目前文献报道的胶原蛋白肽中大多不含有二肽Hyp
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Gly，而其中一篇报道含量最高的仅为0.2％(Inoue et al.,Journal of the Science of Food and Agriculture,2016.96(12):4077
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4081)。这主要是由于轻度水解或不合适的蛋白酶无法有效切断切断
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Xaa
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Hyp
‑
Gly
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中Xaa与Hyp之间的肽键，同时胶原肽中&lt;1000Da小分子肽组分含量也较低，而过度水解则易破坏Hyp与Gly之间的肽键，因此如何通过控制酶解过程定向制备富含二肽Hyp
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Gly的胶原小分子肽有待进一步突破。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服目前胶原蛋白肽产品中二肽Hyp
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Gly含量低的问题，提供一种富含二肽Hyp
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Gly的胶原小分子肽及其制备方法和用途，采用特定的内切蛋白酶与外肽酶分步水解并控制Hyp
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Gly的定向释放，避免过度酶解对Hyp
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Gly二肽上肽键的破坏，从而提高胶原蛋白肽产品中二肽Hyp
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Gly含量，同时又能提高&lt;1000Da小分子肽组分的含量。
[0007]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0008]一种富含二肽Hyp
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Gly的胶原小分子肽，其中二肽Hyp
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Gly的含量0.8％以上，分子量&lt;1000Da的肽占85％以上；
[0009]优选地，其中二肽Hyp
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Gly的含量0.81
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1.07％，分子量&lt;1000Da的肽占85
‑
89％。
[0010]上述富含二肽Hyp
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Gly的胶原小分子肽的制备方法，包括以下步骤：
[0011](1)将富含胶原蛋白的原料在碱液中浸泡，然后清水洗至pH值为7.0
‑
8.5，加水，进行热处理；冷却至40
‑
50℃后调节反应体系pH值至7.0
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8.0；
[0012](2)向步骤(1)的反应体系加入内切蛋白酶，40
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65℃下酶解2
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6h，灭酶，并冷却；
[0013]所述的内切蛋白酶为碱性蛋白酶、中性蛋白酶或复合蛋白酶中的一种以上；
[0014]所述的内切蛋白酶来源于地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌；
[0015](3)向步骤(2)的反应体系加入外肽酶，40
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60℃下酶解4
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8h，灭酶，并冷却；
[0016]所述的外肽酶为风味蛋白酶和/或氨肽酶A；
[0017]所述的外肽酶来源于米曲霉或黑曲霉；
[0018](4)向步骤(3)的反应体系加入半胱氨酸蛋白酶，40
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65℃下酶解2
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6h，灭酶，并冷却；
[0019]所述的内切蛋白酶为木瓜蛋白酶和/或菠萝蛋白酶；
[0020]步骤(2)、(3)、(4)所述的内切蛋白酶、外肽酶、半胱氨酸蛋白酶，酶添加量是原料质量0.1％
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0.5％，所述内切蛋白酶、外肽酶与半胱氨酸蛋白酶的质量比为(1.0
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2.5):(1.25
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2.00):1；
[0021](5)离心，取上清液，为富含二肽Hyp
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Gly的胶原小分子肽溶液；
[0022]所得溶液经过活性炭吸附后，过板框过滤机，经浓缩和喷雾干燥后，得到富含二肽Hyp
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Gly的胶原小分子肽粉。
[0023]步骤(1)所述富含胶原蛋白的原料，为牛、猪、羊或鱼等动物的皮、骨、筋、腱、鳞等。
[0024]步骤(1)所述的碱液，优选浓度0.1
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0.6％的NaOH溶液；所述的浸泡，优选浸泡1
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4h；
[0025]步骤(1)所述的热处理，优选70
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95℃加热1
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4h；
[0026]步骤(2)、(3)、(4)所述的灭酶，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种富含二肽Hyp
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Gly的胶原小分子肽，特征在于：其中二肽Hyp
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Gly的含量0.8％以上，分子量&lt;1000Da的肽占85％以上。2.根据权利要求1所述的胶原小分子肽，特征在于：其中二肽Hyp
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Gly的含量0.81
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1.07％，分子量&lt;1000Da的肽占85
‑
89％。3.权利要求1或2所述富含二肽Hyp
‑
Gly的胶原小分子肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将富含胶原蛋白的原料在碱液中浸泡，然后清水洗至pH值为7.0
‑
8.5，加水，进行热处理；冷却至40
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50℃后调节反应体系pH值至7.0
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8.0；(2)向步骤(1)的反应体系加入内切蛋白酶，40
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65℃下酶解2
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6h，灭酶，并冷却；所述的内切蛋白酶为碱性蛋白酶、中性蛋白酶或复合蛋白酶中的一种以上；(3)向步骤(2)的反应体系加入外肽酶，40
‑
60℃下酶解4
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8h，灭酶，并冷却；所述的外肽酶为风味蛋白酶和/或氨肽酶A；(4)向步骤(3)的反应体系加入半胱氨酸蛋白酶，40
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65℃下酶解2
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6h，灭酶，并冷却；所述的内切蛋白酶为木瓜蛋白酶和/或菠萝蛋白酶；步骤(2)、(3)、(4)所述的内切蛋白酶、外肽酶、半胱氨酸蛋白酶，酶添加量是原料质量0.1％<...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵谋明，刘琪，郑淋，刘晓影，赵翊君，
申请(专利权)人：广东华肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：