一种小鼠体外受精繁育性别选择方法技术

本发明专利技术涉及一种小鼠体外受精繁育性别选择方法，利用基因编辑技术，在雄性小鼠Y染色体上插入luciferase基因，通过胚胎注射和移植，通过基因鉴定得到luc

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠体外受精繁育性别选择方法

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[0001]本专利技术涉及生物实验
，具体涉及一种小鼠体外受精繁育性别选择方法。

技术介绍
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[0002]小鼠体外受精用于净化和扩繁。一般自然受精会得到雌雄各半的子代。但是不同的实验对动物的性别有选择性的需求。例如大规模扩繁需要数量更多的雌性小鼠，而一些动物模型则需要雄性小鼠来做实验。因此，为了得到目的数量特定性别的小鼠，通过小鼠精子和卵细胞自然结合会导致饲养工作量和费用翻倍，浪费人力物力，并且处死不需要的性别的小鼠也有违动物伦理。因此我们开发一种在小鼠体外受精过程中可以选择性别的方法，以便快速高效的得到想要的性别的小鼠。专利号为ZL201711338448.4的专利提供了一种小鼠X/Y精子分离精液的生产方法及应用，它是应用小鼠X、Y精子DNA含量的差异，通过流式细胞方式分离X和Y精子，然后制成性别控制精液，用于小鼠的体外受精、人工受精和胞质内精子注射，按照需要定向繁育雄鼠或雌鼠，或者通过小鼠X/Y精子分离精液生产性控胚胎，再进行胚胎移植，加快特殊品系小鼠的繁育速度。通过添加上机分离液来保护小鼠的鲜精，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小鼠体外受精繁育性别选择方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)利用基因编辑技术，在雄性小鼠Y染色体上的基因间区插入luciferase基因，通过胚胎注射和移植，通过基因鉴定得到luc
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Y雄性小鼠；(2)取luc
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Y雄性小鼠的精子，包括luc
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Y精子和正常X精子，在精子保存液中加入luciferase底物，luc
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Y精子发出波长560nm的荧光，正常X精子无荧光，通过流式细胞分选仪分选出luc
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Y精子和正常X精子；(3)取分选出的luc
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Y精子和正常X精子各40
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50万个，存放于含有luciferase底物的保存液中，使用荧光显微镜观察分离后的luc
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Y精子和正常X精子，通过荧光判断正常X精子中luc
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Y精子的比例，若比例超标则将正常X精子重新放入流式细胞分选仪进行分选，直至正常X精子纯度达标为止；(4)将luc
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Y精子和正常卵细胞体外受精，将受精卵移植到代孕母鼠体内，代孕母鼠生出的子代将会全部都是雄性子代；将正常X精子和正常卵细胞体外受精，将受精卵移植到代孕母鼠体内，代孕母鼠生出的子代将会全部都是雌性子代。2.根据权利要求1所述的一种小鼠体外受精繁育性别选择方法，其特征在于，所述luc
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Y雄性小鼠获得方法如下：(1)通过体外表达纯化制备得到具有核酸酶活性的Cas9蛋白备用；(2)针对小鼠Y染色体上的基因间区设计sgRNA，并进行软件分析以确保所述sgRNA没有预测的脱靶结合位点，采用转录试剂盒，体外转录所述sgRNA，转录好的所述sgRNA备用；(3)根据打靶位点，选取打靶位...

【专利技术属性】
技术研发人员：张琪，张进祥，王慧，陈子涵，李静蕾，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：