一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基于流式荧光技术同步检测吗啡和冰毒的检测方法及试剂盒，是以磁性荧光编码微球作为载体、以藻红蛋白作为荧光标记物，在一个待测样品中同时检测吗啡和冰毒的一种流式荧光免疫分析法。在本发明专利技术中，分别将冰毒抗原和吗啡抗原共价偶联于不同磁性聚苯乙烯荧光编码微球表面，同时分别将吗啡抗体、冰毒抗体与藻红蛋白共价偶联，利用竞争分析法，形成微球

【技术实现步骤摘要】
一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测方法及试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种检测方法及试剂盒，更具体一点说，涉及一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测方法及试剂盒，属于生物技术检测领域。

技术介绍

[0002]冰毒(甲基苯丙胺)(methamphetamine)又称甲基安非他明、去氧麻黄碱、盐酸甲基苯丙胺。因其原料外观为纯白结晶体，晶莹剔透，故被吸毒、贩毒者称为“冰”。由于它的毒性剧烈，人们便称之为“冰毒”。冰毒属于兴奋剂类精神药品，具有强烈的中枢兴奋作用，由于其刺激性强、持久力强，使用一次便会上瘾，因此被称为毒品之王。
[0003]吗啡(Morphine)，为阿片受体激动剂，在鸦片中的含量为4％
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21％，平均10％左右。1806年德国化学家泽尔蒂纳首次将其从鸦片中分离出来，并使用希腊梦神Morpheus的名字将其命名为吗啡。其衍生物盐酸吗啡是临床上常用的麻醉剂，有极强的镇痛作用，而且它的镇痛作用有较好的选择性，多用于创伤、手术、烧伤等引起的剧痛，也用于心肌梗死引起的心绞痛，还可作为镇痛、镇咳和止泻剂；吗啡的二乙酸酯又被称为海洛因。但其最大缺点是易成瘾。这使得长期吸食者无论从身体上还是心理上都会对吗啡产生严重的依赖性，造成严重的毒物癖，从而对自身和社会均造成极大的危害，众所周知，吗啡是海洛因在体内代谢的主要产物，吸食海洛因后可以在体液中检测到吗啡的存在。其最大缺点是易成瘾。这使得长期吸食者无论从身体上还是心理上都会对吗啡产生严重的依赖性，造成严重的毒物癖，从而对自身和社会均造成极大的危害。
[0004]毒品威胁着人类的健康，威胁着全世界的社会稳定和经济发展，是当今世界最严重的社会问题。在同一样品中，同步地、准确地、快速地检测待测样品中冰毒和海洛因的含量具有重要的意义。
[0005]流式微球技术利用球形基质作为载体,以流式细胞术作为检测平台,可以在较短时间内对样品进行大规模检测。该系统主要基于流式荧光编码微球，检测通量大、灵敏度高,可实现同步检测多靶标，具有较为广阔的应用空间。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一种基于流式荧光技术的冰毒与吗啡的检测方法，利用不同荧光编码磁性微球和藻红蛋白实现在同一份样品中同步检测冰毒和吗啡。
[0007]本专利技术提供了一种基于流式荧光技术的冰毒与吗啡的检测的试剂盒
[0008]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0009]本专利技术一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测方法，其特征在于该检测方法为：首先，将冰毒和吗啡抗原分别包被在不同荧光编码磁性微球表面，形成微球
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抗原复合物；
[0010]将冰毒抗体和吗啡抗体分别与藻红蛋白偶联，并对抗体的使用量进行优化，确定
适合的抗体使用剂量，避免检测抗体过量；
[0011]将优化剂量的偶联抗体和待测样品同时与荧光编码磁性微球孵育，最终形成微球
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抗原
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藻红蛋白偶联抗体荧光免疫复合物；
[0012]经仪器检测荧光类型和荧光信号强度完成检测。
[0013]优选的，形成微球
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抗原复合物后，利用离心管和磁力架对荧光编码磁性微球进行洗涤和分离，去除未结合抗原。
[0014]优选的，荧光编码磁性微球为具有羧基基团的磁性聚苯乙烯荧光编码微球。
[0015]优选的，包被抗原微球是通过活化荧光微球表面的羧基基团，将羧基基团分别与冰毒抗原、吗啡抗原上的氨基形成共价键，从而形成复合物。
[0016]优选的，检测抗体是指与藻红蛋白偶联的冰毒单克隆抗体和吗啡单克隆抗体。
[0017]优选的，将冰毒和吗啡抗原分别包被在不同荧光编码磁性微球表面过程中包被比例和孵育条件：10μg抗原包被5
×
106个荧光编码磁性微球，抗原与荧光编码磁性微球的孵育条件为室温避光震荡1.5h。
[0018]优选的，冰毒抗原和吗啡抗原共价偶联于荧光编码磁性微球表面，利用冰毒抗原和吗啡抗原、待测样品中的冰毒分子和吗啡分子、藻红蛋白偶联的冰毒抗体和吗啡抗体，形成微球
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抗原
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藻红蛋白偶联抗体荧光免疫复合物，通过竞争法进行检测。
[0019]优选的，经仪器检测荧光类型和荧光信号强度完成检测中以藻红蛋白作为荧光标记物，根据其荧光强度计算待测物含量。
[0020]优选的，藻红蛋白偶联冰毒抗体和吗啡抗体的浓度为30μg/mL，每1mg抗体偶联藻红蛋白3.5mg。
[0021]本专利技术一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒检测的试剂盒，包含：包括试剂盒以及放在试剂盒内的多个药剂盒，其中，具有放置不同荧光编码磁性微球的药剂盒，荧光编码微球包含有分别包被冰毒抗原和吗啡抗原的荧光编码微球；具有放置检测抗体的药剂盒，检测抗体包括分别偶联藻红蛋白的冰毒抗体和吗啡抗体，具有放置标准品溶液的药剂盒，所述标准品溶液包括冰毒标准品和吗啡标准品溶液，具有放置缓冲液的药剂盒，所述缓冲液为pH7.4的PBS缓冲液；试剂盒里设有可发性聚苯乙烯泡沫层，试剂盒包括盒体与盒盖，盒体与盒盖由酚醛塑料材质的连接轴连接，试剂盒底部预制有存放碎冰的冰槽。
[0022]有益效果：通过识别不同编码微球区分两种检测物，通过检测藻红蛋白荧光强度计算待测物浓度。本专利技术可以同时检测待测样品中冰毒和吗啡含量，效率高、特异性强、灵敏度高、重复性好，可用于缉毒筛查，具有较好的应用前景；试剂盒使用可发性聚苯乙烯泡沫材质，盒体与盒盖由酚醛塑料材质的连接轴连接，试剂盒底部预制有存放碎冰的冰槽，结构简单，实用性强。
附图说明
[0023]图1是本专利技术冰毒检测标准曲线图。
[0024]图2是本专利技术吗啡检测标准曲线图。
具体实施方式
[0025]以下结合说明书附图1
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2，对本专利技术作进一步说明，但本专利技术并不局限于以下实施
例。
[0026]为使本专利技术的目的、方法及优点更加清楚明确，下面结合具体实施例对本专利技术做出详细说明，所述的实施例只用于说明本专利技术，而不是用于对本专利技术进行限定，任何在本专利技术基础上所做的修改、等同替换等均在本专利技术的保护范围内。
[0027]本专利技术一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测方法的技术解决方案如下：
[0028]首先，将冰毒和吗啡抗原分别包被在不同荧光编码磁性微球表面，形成微球
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抗原复合物，10μg抗原包被5
×
106个磁珠，抗原与微球的孵育条件为室温避光震荡1.5h。利用离心管和磁力架对编码荧光微球进行洗涤和分离，去除未结合抗原。将冰毒抗体和吗啡抗体分别与藻红蛋白偶联，并对抗体的使用量进行优化，确定适合的抗体使用剂量，避免检测抗体过量。将优化剂量的偶联抗体和待测样品同时与微球孵育，孵育条件为避光、37℃震荡1h，最终形成微球
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冰毒/吗啡
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藻红蛋白偶联本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测方法，其特征在于该检测方法为：首先，将冰毒和吗啡抗原分别包被在不同荧光编码磁性微球表面，形成微球
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抗原复合物；将冰毒抗体和吗啡抗体分别与藻红蛋白偶联以达到标记物最大信号强度80％时的抗体浓度为实验浓度，最大信号强度在没有待测样品的情况下用偶联藻红蛋白的抗体与偶联抗原的微球滴定测得；将优化剂量的偶联抗体和待测样品同时与荧光编码磁性微球孵育，最终形成微球
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抗原
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藻红蛋白偶联抗体荧光免疫复合物；经仪器检测荧光类型和荧光信号强度完成检测。2.如权利要求1所述的一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测方法，其特征在于：形成微球
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抗原复合物后，利用离心管和磁力架对荧光编码磁性微球进行洗涤和分离，去除未结合抗原。3.如权利要求1或2所述的一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测方法，其特征在于：荧光编码磁性微球为具有羧基基团的磁性聚苯乙烯荧光编码微球。4.如权利要求1所述的一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测方法，其特征在于：包被抗原微球是通过活化荧光微球表面的羧基基团，将羧基基团分别与冰毒抗原、吗啡抗原上的氨基形成共价键，从而形成复合物。5.如权利要求1所述的一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测方法，其特征在于：检测抗体是指与藻红蛋白偶联的冰毒单克隆抗体和吗啡单克隆抗体。6.如权利要求1或2或4所述的一种基于流式荧光技术的同步检测吗啡和冰毒的检测方法，其特征在于：将冰毒和吗啡抗原分别包被在不同荧光编码磁性微球表面过程中包被比例和孵育条件：10μg...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄飚，秦源，周秀梅，赵雪芹，王毅刚，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：